合生素是一种由益生菌与益生元复合而成的微生态制剂，可同时发挥益生菌和益生元的双重作用。芽孢杆菌类益生菌与功能性多糖配合而成的合生素在畜禽生产中的应用最为广泛[1]。研究表明，枯草芽孢杆菌可显著提高兔的生产性能[2]和免疫力[3]，改善屠宰性能和肉品质[4]；凝结芽孢杆菌可提高肉兔对饲料的利用率[5]，改善肠道健康，增强免疫[6]；低聚木糖可降低长毛兔腹泻率[7]，促进獭兔小肠上皮细胞对营养物质的吸收[8]，提高盲肠内酸度和微生物脱氢酶总活力[9]。但是关于枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌与低聚木糖联合使用对新西兰断奶肉兔生长性能及盲肠微生物多样性的研究较少。本试验将前期筛选的体外抑菌活性较好的枯草芽孢杆菌制剂和凝结芽孢杆菌制剂1∶1混合[10]，与低聚木糖2∶1配伍制备成兔专用合生素，按照0.04%比例添加在断奶肉兔基础日粮中[11]，研究合生素代替抗生素对肉兔生长性能及盲肠微生物菌群的影响，为合生素在肉兔生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料枯草芽孢杆菌制剂：活菌数为1×109 CFU/g，由上海某公司提供；凝结芽孢杆菌制剂：活菌数为1×1010 CFU/g，由青岛某公司提供；低聚木糖：纯度为95%，购自山东龙力生物科技有限公司。1.2试验设计及饲养管理试验在山东某肉兔养殖场进行，选用300只35日龄断奶新西兰肉兔，随机分为3组，每组5个重复，每个重复20只兔（公、母各半）。合生素组（H组）为基础日粮添加0.04%合生素；抗生素组（K组）为基础日粮添加土霉素；对照组（D组）为基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100玉米粉20代谢能/(MJ/kg)11.50大豆粕17粗蛋白/%18.32苜蓿草粉15粗纤维/%15.22豆秸粉8钙/%1.25青蒿粉12总磷/%0.53麦芽根5蛋氨酸/%0.82大蒜皮10蛋氨酸+胱氨酸/%0.63次粉7葡萄糖2预混料4注：1.预混料为每千克日粮提供：Fe 100 mg、Cu 20 mg、Zn 90 mg、Mn 30 mg、Se 0.15 mg、Co 0.2mg、VA 4 000 IU、VD3 1 000 IU、VE 50 IU、VK 2.25 mg、胆碱1 mg、D-泛酸15 mg、叶酸1.2 mg、地克珠利1 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余为实测值。每天肉兔08：00和17：00饲喂2次，投料量以兔充分吃饱几乎不留料为准，预试期3 d，正式试验期42 d。肉兔免疫程序及其他饲养管理按兔场常规管理进行。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能正式试验开始和结束当天早晨试验兔空腹称重，记录试验初平均体重和试验末平均体重。每组试验兔有单独料袋，专兔专袋饲喂，准确记录试验兔试验期间采食饲料总量。记录整个试验期发生腹泻的试验兔数量和存活试验兔数量，计算腹泻率和成活率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=腹泻兔数/试验兔数×100%(4)成活率=成活兔数/试验兔数×100%(5)1.3.2盲肠微生物高通量测序分析正式试验期第42 d，每组随机选取10只试验兔屠宰，取出盲肠内容物放入5 mL灭菌无酶带盖离心管中，液氮罐中速冻20 min，取出，-80 ℃冰箱中冷冻保存。样品委托北京诺禾致源生物信息科技有限公司提取样本肠道微生物基因组DNA。根据所扩增的16S 区域特点，构建小片段文库，基于Illumina Nova测序平台对该文库进行双末端测序，经过Reads拼接，过滤，得到有效数据，基于97%一致性将序列聚类成为运算分类单元（OTUs），对运算分类单元序列比对到Silva132数据库进行物种注释分析。根据运算分类单元分析结果，得到对应的物种信息及分布情况，对运算分类单元进行丰富度分析，比较3组样本菌群结构组成差异。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010进行初步处理，SPSS 21.0统计软件的单因素方差分析显著性，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1合生素对断奶肉兔生长性能的影响（见表2）由表2可知，合生素组试验兔平均日采食量、平均日增重均显著高于对照组和抗生素组（P0.05）；合生素组和抗生素组试验兔腹泻率显著低于对照组，成活率显著高于对照组（P0.05）；合生素组兔料重比均略低于抗生素组和对照组，但差异不显著（P0.05）。研究表明，饲料中添加合生素对肉兔的促生长作用优于抗生素，在预防腹泻病发生、提高成活率方面，合生素和抗生素效果相当。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T002表 2合生素对断奶肉兔生长性能的影响项目初重/g末重/g平均日采食量/[g/(只·d)]平均日增重/[g/(只·d)]料重比腹泻率/%成活率/%合生素组1 042.5±13.322 842.5±15.78a139.21±5.32a42.88±1.59a3.25±0.235.56±0.09b94.08±0.37a抗生素组1 033.5±18.382 569.8±16.44b131.55±6.74b36.58±4.25b3.60±0.016.92±0.45b93.57±0.26a对照组1 043.5±15.322 454.9±14.88b126.36±5.32b33.59±2.89b3.45±0.069.89±0.81a86.68±0.71b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。2.2合生素对断奶肉兔盲肠测序结果、取样深度验证、OTU聚类的影响2.2.1肉兔盲肠测序结果（见表3）由表3可知，30个样品最终得到用于分析运算分类单元（OTUs）的Tags序列数为45 732~51 573，虽然合生素组样品质控有效数据量（Effective Tags）显著低于对照组（P0.05），但是最终3个试验组样品质控有效率达均在60%以上，表明用于OTUs分析的Tags数量充足。3组样品的中测序错误率小于1%的碱基所占的百分比在98%以上，测序错误率小于0.1%的碱基所占的百分比在95%以上，表明本项目提取的Tags质量较高，达到了用于运算分类单元（OTUs）分析的质控条件。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T003表3肉兔盲肠测序结果项目Raw PERaw TagsClean TagsEffective TagsQ20Q30GC/%Effective/%合生素组76 472.4±1 895.0b74 032.4±1 812.5b73 158.5±1 781.1b45 732.0±890.1b98.67±0.0595.67±0.1154.87±0.2059.89±0.75抗生素组81 808.1±1 836.3ab79 316.7±1 756.6ab78 441.9±1 728.4ab49 044.4±809.9ab98.76±0.0495.91±0.0854.85±0.3160.06±0.75对照组83 578.6±2 784.4a81 397.0±2 707.6a80 655.9±2 670.4a51 573.8±1 599.7a98.89±0.0196.19±0.0254.76±0.1061.79±0.82注：Raw PE为原始下机的PE reads，Raw Tags为拼接得到的Tags序列，Clean Tags为Raw Tags过滤低质量和短长度后的序列，Effective Tags为过滤嵌合体后，最终用于后续分析的Tags序列，Q20和Q30为Effective Tags中碱基质量值大于20（测序错误率小于1%）和30（测序错误率小于0.1%）的碱基所占的百分比，GC为Effective Tags中GC碱基的含量，Effective为Effective Tags的数目与Raw PE数目的百分比。2.2.2肉兔盲肠取样深度验证稀释曲线是从样本中随机抽取一定测序量的数据，统计其代表物种数目（即OTUs数目），以抽取的测序数据量与对应的物种数构建曲线。稀释曲线可直接反映测序数据量的合理性，间接反映样本中物种的丰富程度，当曲线趋向平坦时，表明测序数据量渐进合理，更多的数据量只会产生少量新的物种（OTUs）。30个样品稀释曲线见图1。3组样品稀释曲线见图2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F001图130个样品稀释曲线10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F002图23组样品稀释曲线由图1和图2可知，随着抽取测序数据量增加曲线趋于平缓，表明样本中的OTUs覆盖度已基本饱和，测序数据量合理，基于现有数据量的分析结果准确可靠。2.2.3OTU聚类结果通过与数据库Silva138比对，进行物种注释，对不同分类层级统计，物种注释统计结果见表4。依据聚类OTUs结果，得到合生素组、抗生素组和对照组之间共有、特有的OTUs及每个组10个样品间的共有、特有的OTUs，结果见图3。由图3可知，合生组共有OTUs数目比抗生素组增加了17个，比对照组增加了28个，表明饲料中添加合生素增加了肉兔盲肠共有物种的数量；合生组特有的OTUs数目比抗生素组减少了118个，比对照组减少了128个，以对照组特有的OTUs数目最多。表明断奶肉兔在不受饲料中外源益生菌和抗生素干扰时，盲肠具有较多的微生物物种，侧面反映饲料中添加的合生素和土霉素抑制了盲肠某些微生物物种的增殖，特别外源益生菌的作用更大。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T004表4物种注释统计结果项目结果OTU catalogue4 037Annotated on 数据库4 036（99.98%）Annotated on Unclassified1（0.02%）Annotated on Kingdom level99.98%Annotated on Phylum leve69.48%Annotated on Class level61.65%Annotated on Order level44.41%Annotated on Family level29.45%Annotated on Genus level10.73%Annotated on Species level1.63%图3组间及组内特有OTUs和共有OTUs数目10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F3a1（a）H组、K组、D组韦恩图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F3a2（b）H组10个样本花瓣图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F3a3（c）K组10个样本花瓣图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F3a4（d）D组10个样本花瓣图2.3合生素对肉兔盲肠微生物物种相对丰度的影响根据物种注释结果，选取每个组在各分类水平（Phylum、Class、Order、Family、Genus）上最大丰度排名前10的物种，生成物种相对丰度柱形累加图；同时对各分类水平排名前10的物种的相对丰度值进行统计学分析。2.3.1门水平物种相对丰度（见图4、表5）由图4可知，在门水平上，优势物种主要是拟杆菌门、厚壁菌门、疣微菌门，占比在85%以上。由表5可知，在门水平上，合生组未鉴定的门、脱硫杆菌门、放线菌门、其他门相对丰度均显著高于抗生素和对照（P0.05）；合生组变形菌门相对丰度显著低于抗生素组（P0.05）。合生素组拟杆菌门相对丰度略低于抗生组和对照组，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F004图4各组在门水平排名前10物种相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T005表5门水平排名前10物种的相对丰度物种合生素组抗生素组对照组拟杆菌门（Bacteroidota）0.369 2±0.021 90.411 8±0.044 70.450 2±0.032 4厚壁菌门（Firmicutes）0.347 4±0.014 80.352 6±0.035 00.326 8±0.024 8疣微菌门（Verrucomicrobiota）0.130 6±0.018 90.125 3±0.019 10.117 6±0.027 2未定义的门（unidentified_Bacteria）0.052 6±0.012 8a0.027 9±0.005 0b0.023 2±0.003 7b螺旋体门（Spirochaetota）0.017 5±0.011 00.015 0±0.004 30.020 0±0.008 2变形菌门（Proteobacteria）0.005 1±0.000 5b0.010 9±0.003 1a0.006 5±0.000 8ab脱硫杆菌门（Desulfobacterota）0.014 2±0.001 1a0.008 0±0.001 4b0.010 1±0.001 4b广古菌门（Euryarchaeota）0.001 9±0.000 80.000 5±0.000 30.001 1±0.000 5放线菌门（Actinobacteriota）0.003 8±0.000 2a0.002 5±0.000 2b0.002 1±0.000 2b弯曲杆菌门（Campilobacterota）0.000 09±0.000 010.000 40±0.000 200.000 32±0.000 16其他门（Others）0.057 6±0.002 4a0.045 0±0.003 8b0.042 0±0.003 8b注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05）；表6~表10与此同。2.3.2纲水平物种相对丰度（见图5、表6）由图5可知，在纲水平上，优势物种主要是拟杆菌门-拟杆菌纲、梭菌纲、疣微菌纲，占比在80%左右。由表6可知，在纲水平上，合生组未定义的拟杆菌门-拟杆菌纲、脱硫弧菌纲和其他纲相对丰度均显著高于对照组（P0.05）；合生组丙型-变形杆菌纲相对丰度显著低于抗生素组（P0.05）。合生素组拟杆菌门-拟杆菌纲相对丰度略低于抗生组和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F005图5各组在纲水平排名前10物种相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T006表6纲水平排名前10物种的相对丰度物种合生素组抗生素组对照组拟杆菌门-拟杆菌纲（Bacteroidota-Bacteroidia）0.369 2±0.021 90.411 8±0.044 70.450 2±0.032 4梭菌纲（Clostridia）0.302 4±0.015 20.311 8±0.032 80.275 9±0.020 9疣微菌纲（Verrucomicrobiae）0.130 6±0.018 90.125 3±0.019 10.117 6±0.027 2未定义的拟杆菌门-拟杆菌纲（unidentified_Bacteria-Bacteroidia）0.041 8±0.012 7a0.021 1±0.004 5ab0.015 2±0.002 5b螺旋体纲（Spirochaetia）0.017 5±0.011 00.015 0±0.004 30.020 0±0.008 2杆菌纲（Bacilli）0.037 8±0.001 90.035 2±0.004 40.040 3±0.004 4厚壁菌纲（Negativicutes）0.005 7±0.002 80.004 6±0.001 40.008 8±0.003 4丙型-变形杆菌纲（Gammaproteobacteria）0.004 5±0.000 5b0.010 9±0.003 1a0.006 4±0.000 8ab脱硫弧菌纲（Desulfovibrionia）0.014 5±0.001 1a0.008 0±0.001 4b0.010 1±0.001 4b甲型-变形杆菌纲（Alphaproteobacteria）0.002 9±0.001 00.001 5±0.000 40.003 2±0.001 5其他纲（Others）0.073 0±0.003 4a0.055 5±0.004 6b0.052 4±0.004 2b2.3.3目水平排名前10物种相对丰度（见图6、表7）由图6可知，在目水平上，优势物种主要是拟杆菌纲-拟杆菌目、疣微菌目和颤螺菌目，3类物种之和占所有目水平分类的65%以上。由表7可知，在目水平上，合生组未定义的拟杆菌纲-拟杆菌目相对丰度显著高于对照组（P0.05），合生组拟杆菌纲-拟杆菌目相对丰度略低于抗生素和对照组，疣微菌目相对丰度略高于抗生素和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F006图6各组在目水平排名前10物种的相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T007表7目水平排名前10物种相对丰度物种合生素组抗生素组对照组拟杆菌纲-拟杆菌目（Bacteroidia-Bacteroidales）0.368 7±0.021 90.410 7±0.044 90.449 4±0.032 2疣微菌目（Verrucomicrobiales）0.130 6±0.018 90.125 3±0.019 00.117 6±0.027 2颤螺菌目（Oscillospirales）0.149 2±0.009 40.168 3±0.018 80.145 5±0.014 1未定义的拟杆菌纲-拟杆菌目（Unidentified-Bacteroidia-Bacteroidales）0.041 8±0.012 7a0.021 1±0.004 5ab0.015 1±0.002 5b毛螺菌目（Lachnospirales）0.063 0±0.003 40.060 7±0.010 30.047 5±0.003 6螺旋体目（Spirochaetales）0.017 5±0.011 00.015 0±0.004 30.020 0±0.008 2RF390.032 1±0.001 80.029 0±0.003 70.034 3±0.003 8克里斯滕森菌目（Christensenellales）0.015 6±0.001 50.015 5±0.003 10.013 8±0.003 4梭菌目（Clostridia_UCG-014）0.023 9±0.001 60.020 5±0.002 10.022 3±0.002 2氨基酸球菌目（Acidaminococcales）0.005 7±0.002 80.004 6±0.001 40.008 8±0.003 5其他目（Others）0.152 0±0.006 70.129 3±0.012 00.125 7±0.009 32.3.4科水平物种相对丰度（见图7、表8）由图7可知，在科水平上，占优势的物种主要是Muribaculaceae、艾克曼菌科、理研菌科、颤螺旋菌科，占比在50%以上。由表8可知，在科水平上，合生组巴恩斯氏菌科相对丰度显著高于对照组（P0.05）。合生组Muribaculaceae相对丰度略低于抗生素组和对照组（P0.05），艾克曼菌科和理研菌科相对丰度略高于抗生素组和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F007图7各组在科水平排名前10物种相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T008表8科水平排名前10物种相对丰度物种合生素组抗生素组对照组Muribaculaceae0.261 7±0.032 80.315 2±0.054 70.343 6±0.034 0艾克曼菌科（Akkermansiaceae）0.130 6±0.018 90.125 3±0.019 10.117 6±0.027 2理研菌科（Rikenellaceae）0.090 5±0.016 30.076 1±0.016 60.088 4±0.016 4颤螺旋菌科（Oscillospiraceae）0.085 2±0.006 30.097 7±0.012 00.079 6±0.008 5巴恩斯氏菌科（Barnesiellaceae）0.041 8±0.012 7a0.021 1±0.004 5ab0.015 2±0.002 5b毛螺旋菌科（Lachnospiraceae）0.062 7±0.003 40.060 0±0.010 30.047 3±0.003 6螺旋体科（Spirochaetaceae）0.017 5±0.011 00.015 0±0.004 30.020 0±0.008 2瘤胃球菌科（Ruminococcaceae）0.039 2±0.002 40.042 4±0.004 80.040 3±0.003 4拟杆菌科（Bacteroidaceae）0.012 6±0.003 60.015 7±0.004 50.012 8±0.003 1UCG-0100.018 2±0.001 60.020 6±0.002 40.018 1±0.002 7其他科（Others）0.240 0±0.008 40.210 6±0.019 90.217 2±0.019 22.3.5属水平物种相对丰度（见图8、表9）由图8可知，在属水平上，占优势的物种主要是阿克曼菌属、理研菌科RC9肠道群、另支菌属，占比在20%以上。由表9可知，在属水平上，合生组另支菌属和毛螺菌科NK4A136组相对丰度显著高于对照组（P0.05），其他物种在属水平的相对丰度与对照组和抗生素组差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.F008图8各组在属水平排名前10物种相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T009表9属水平排名前10物种相对丰度物种合生素组抗生素组对照组阿克曼菌属（Akkermansia）0.130 6±0.018 90.125 7±0.019 10.117 6±0.027 2理研菌科RC9肠道群（Rikenellaceae_RC9_gut_group）0.032 7±0.014 50.004 7±0.001 50.021 2±0.008 6毛螺菌科NK4B4组（Lachnospiraceae_NK4B4_group）0.003 3±0.000 20.010 7±0.008 50.001 8±0.001 2另支菌属（Alistipes）0.031 1±0.006 0a0.021 1±0.002 8ab0.016 0±0.001 0bdgA-11_gut_group0.015 0±0.004 10.020 2±0.006 70.011 0±0.004 3V9D2013_group0.016 4±0.003 40.022 4±0.005 10.020 6±0.003 9拟杆菌属（Bacteroides）0.012 6±0.003 60.015 7±0.004 50.012 8±0.003 1毛螺菌科NK4A136组（Lachnospiraceae_NK4A136_group）0.023 8±0.001 7a0.019 2±0.003 0ab0.015 7±0.001 4b克里斯滕森菌科R-7组（Christensenellaceae_R-7_group）0.015 6±0.001 50.015 5±0.003 10.013 8±0.003 4考拉杆菌属（Phascolarctobacterium）0.005 6±0.002 70.004 5±0.001 40.007 7±0.003 5其他属（Others）0.713 3±0.029 50.740 6±0.028 00.761 9±0.026 22.4盲肠微生物物种多样性分析（见表10）由表10可知，合生素组直观观测到的物种数目（Observed_species）增多，比对照组提高了0.93%，比抗生组提高了1.17%；合生素组Shannon指数和Simpson指数均高于对照组和抗生素组，表明合生素组群落具有较高多样性和均匀度；但是合生素和抗生组的估计群落样品中包含的物种总数（Chao1）和估计群落中OTU数目（ACE）均低于对照组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.015.T010表10盲肠微生物物种多样性分析指数合生素组抗生素组对照组observed_species868.3±15.24856.50±23.97860.50±13.75shannon指数6.681 5±0.108 46.281 5±0.381 56.220 0±0.255 9simpson指数0.958 6±0.005 60.915 4±0.039 80.924 7±0.019 5chao1929.53±13.36925.61±25.77941.45±13.07ACE936.99±15.03944.06±25.27957.97±11.79goods_coverage0.996 2±.0001 0a0.995 8±0.000 2ab0.995 4±0.000 3bPD_whole_tree57.78±1.1958.00±1.7459.22±1.12注：Observed_species为直观观测到的物种数目（即OTUs数目），Shannon为样品中的分类总数及其占比，Simpson为表征群落内物种分布的多样性和均匀度，Chao1为估计群落样品中包含的物种总数，ACE为估计群落中OTU数目，Goods_coverage为测序深度指数；PD_whole_tree为群落内物种的亲缘关系。在本次测序当中，所有品种的覆盖率（goods_coverage）皆大于99%，表明测序结果已经基本覆盖样本的多样性，测序数据有效，且合生素组的goods_coverage指数显著高于对照组；但是合生素的PD_whole_tree指数低于抗生组和对照组，但差异不显著（P0.05）。3讨论3.1合生素对新西兰肉兔生长性能的影响芽孢杆菌类益生菌进入动物肠道后，在增殖过程中能够分泌高活性的脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶，还可分泌有助于降解抗营养因子的酶类，如麦芽糖酶、植酸酶、β-葡聚糖酶和纤维素酶等以补充动物内源酶的不足，进而提高营养物质的利用率；芽孢杆菌在动物肠道内可分泌氨基酸以及维生素等多种营养因子，促进动物对营养物质的消化吸收[12-16]。低聚木糖虽然不能直接被动物利用，但是可作为益生菌特别是双歧杆菌的增殖提供营养，增加动物消化道益生菌的丰度以维持健康的肠道状态，使胃肠更好地发挥消化吸收功能[17-18]。本研究将枯草芽孢杆菌制剂、凝结芽孢杆菌制剂与低聚木糖联合使用，显著提高了新西兰肉兔的平均日采食量、平均日增重和成活率，腹泻率也显著降低，与徐登峰等[2]、任永军等[4]的研究结果类似。本研究利用合生素代替抗生素生产的无抗饲料，发现在促进断奶肉兔生长方面的作用明显优于含有抗生素的饲料，在预防腹泻病发生方面，与含有抗生素的饲料效果相当。因此，合生素是一种不错的抗生素替代品，具有用于无抗兔料生产的潜力。3.2合生素对新西兰断奶肉兔盲肠微生物菌群的影响盲肠微生物群落是在动物在长期进化过程中形成的，与宿主保持相对平衡的稳定状态，盲肠微生物群落的组成受饲料、环境、疾病、物种等因素的影响。当动物长期饲喂含有抗生素的饲料或者长期滥用抗生素时，肠道微生态平衡极易遭到破坏，机体免疫力严重下降，患病率升高，同时导致大量耐药菌株产生，造成动物疫病的防治存在困难。益生菌制剂可通过促进双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌生长，抑制大肠杆菌数量、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等病原菌增殖，维持良好的肠道微生态平衡。魏宇超等[19]在30日龄伊拉肉兔基础日粮中分别按照100、200、300 g/t比例添加枯草芽孢杆菌（3.0×109 CFU/g），连续饲喂30 d，不同剂量组肉兔盲肠微生物丰度在门水平上厚壁菌门、拟杆菌门、疣微菌门相对丰度值均发生了明显变化。本研究中，饲喂合生素的肉兔，在门水平上厚壁菌门、拟杆菌门、疣微菌门相对丰度变化不大，但脱硫杆菌门和放线菌门相对丰度显著升高，表明饲料中单一添加枯草芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌与凝结芽孢杆菌低聚木糖联合使用对盲肠微生物丰度的影响不同，可能是由于添加枯草芽孢杆菌菌株的类型不同或者试验兔的品种或者饲喂时间长短等因素而导致。本试验中，饲喂合生素的肉兔盲肠微生物中变形菌门相对丰度显著降低，与魏宇超等[19]研究结果具有一致性，表明枯草芽孢杆菌单独或者联合使用均可抑制变形菌门微生物的生长。本研究中，饲喂合生素的肉兔盲肠微生物中放线菌门和另支菌属相对丰度显著升高，表明放线菌门可产生多种抗生素，如链霉素、土霉素、四环素、庆大霉素，还能产生各种蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、维生素B12和有机酸等。另支菌属属于拟杆菌门的一种相对新的细菌属，革兰氏阴性，专性厌氧，是肠道共生的细菌，可生产多种短链脂肪酸（丙酸和乙酸盐），具有抗炎机制；另支菌属可能对肝纤维化、癌症免疫治疗和心血管疾病等具有保护作用，与链球菌具有拮抗作用[20]。因此，在合生素组新西兰肉兔盲肠放线菌门和另支菌属相对丰度升高，对抑制有病原菌增殖、促进营养物质吸收意义重大，这也是合生素能够增加肉兔平均日增重、降低腹泻率的原因之一。变形菌门包括大肠杆菌、沙门氏菌、幽门螺杆菌、霍乱弧菌等多种病原致病菌；丙型-变形杆菌纲是所知的细菌中种类最多的一纲，很多重要的病原菌属于这个纲，如沙门氏菌属（肠炎和伤寒）、耶尔辛氏菌属（鼠疫）、弧菌属（霍乱）、绿脓杆菌。本试验中，合生素组变形菌门和丙型-变形杆菌纲相对丰度显著降低，表明本研究配伍的兔专用合生素减少了肉兔肠道中有害菌的数量，能够维持肠道健康。4结论在新西兰兔日粮中添加由枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌与低聚木糖配伍而成的合生素代替土霉素，具有显著的促生长作用，能够维持良好的盲肠微生物菌群结构，是一种较理想的抗生素替代品，可用于肉兔绿色养殖生产中。