抗生素具有耐药性，抗生素的滥用能够危害畜禽及人类健康[1]，因此需要寻找替代抗生素的绿色产品[2]。植物精油是通过物理或化学方法从芳香植物中提取的带有特殊香味和易挥发的高度浓缩物质，具有低残留、低抗药性等优点[3]。多种植物精油具有活血化瘀、杀毒和抗菌效果，具有很好的保健作用[4-5]。Brenes等[6]研究表明，植物精油能够减少机体氧化应激，抑制病原菌繁殖，增强机体抵抗力，提高生产性能，并且可以减少养殖中氨和氮的排放，改善生态环境。复合植物精油具有一定的增效或抑制功能。贾聪慧等[7]研究发现，复合植物精油能够有效提高动物的生长性能，调节肠道菌群，抑制病原菌繁殖，提高营养物质的消化率。本试验在肉鸡饲粮中添加适量以香芹酚和百里香酚为主要成分的复合植物精油，研究其对肉鸡生长性能、抗氧化功能和肠道微生物的影响，为植物精油的进一步开发和应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料白羽肉鸡由驻马店龙华牧业公司提供。抗生素为市购速大肥（美国某公司），含50%维吉尼霉素；复合植物精油由广州智特奇生物科技有限公司提供，香芹酚含量≥2.3%，百里香酚含量≥1.2%。1.2试验设计试验于河南省农业科学院畜牧兽医研究进行，选取480只肉鸡随机分为5组，每组6个重复，每个重复16只鸡。对照组肉鸡饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加35 mg/kg抗生素（D1组）以及50（D2组）、100（D3组）、150 mg/kg复合植物精油（D4组）。按照标准NY/T 33—2004配制基础饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。试验期42 d。试验期间肉鸡自由采食，不间断饮水，按白羽肉鸡免疫程序免疫。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.010.T001表1基础饲粮组成及营养水平（风干基础）项目1~3周4~6周原料组成/%玉米60.0062.00豆粕34.3030.50豆油2.004.00石粉1.451.40磷酸氢钙1.331.28DL-蛋氨酸0.250.15食盐0.350.35预混料0.220.22氯化胆碱0.100.10合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.5412.96粗蛋白质/%21.5020.00钙/%1.000.90有效磷/%0.450.40蛋氨酸/%0.500.40注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 8 000 IU、VB1 4.2 mg、VB2 4 mg、VB6 4.5 mg、VB12 0.02 mg、VD3 3 000 IU、VE 20 IU、VK3 2 mg、生物素 0.15 mg、叶酸 1.0 mg、D-泛酸 11 mg、烟酸 10 mg、抗氧化剂 100 mg、Cu 10 mg、Fe 80 mg、Mn 80 mg、Zn75 mg、I 0.40 mg、Se 0.30 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第1 d和最后1 d对各重复试验肉鸡称重并记录，统计整个试验期内每个重复的采食量，计算对照组和各试验组肉鸡的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。ADG=(末重-初重)/试验天数(1)ADFI=试验全期采食量/试验天数(2)料重比=ADFI/ADG(3)1.3.2血清指标试验最后1 d，各重复选2只均重肉鸡翅静脉采血，3 000 r/min离心15 min得到血清，-20 ℃冰箱保存。使用酶标仪测定血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和血清总蛋白（TP）、尿素氮（BUN）含量，上述指标检测试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.3.3肠道微生物指标试验最后1 d，各重复挑选2只均重肉鸡，麻醉，剖开腹腔分别结扎盲肠、空肠和回肠两端，取盲肠、空肠和回肠，-4 ℃保存。在无菌室中提取各肠段1.0 g内容物置于10 mL玻璃试管内，加入0.9%生理盐水9.5 mL，使用涡旋振荡器振荡3~5 min，稀释至10-1倍，1 000 r/min离心，取上清液1.0 mL加入装有9.0 mL 0.9%生理盐水的玻璃试管中稀释至10-2倍，同样方法依次稀释至10-3~10-10倍。接种与培养：抽取每种肠段内容物的10-3~10-10倍稀释液各10 μL，分别在3个胰蛋白胨大豆琼脂培养皿上进行涂布接种，37 ℃恒温培养24~48 h进行菌落计数。大肠杆菌和沙门氏菌：抽取每种肠段内容物的10-3~10-10倍稀释液各10 μL，分别在3个麦康凯No.3培养皿上进行涂布接种，37 ℃恒温培养24 h进行菌落计数。乳酸杆菌：抽取每种肠段内容物的10-3~10-10倍稀释液各10 μL，分别在3个乳酸杆菌选择性培养皿上进行涂布接种，37 ℃厌氧培养48 h进行菌落计数。采用平板菌落计数法统计各培养皿中菌落数，使用lgCFU计量各肠道内容物中每种菌落数量。1.4数据统计与分析对各项试验数据采用SPSS 20.0进行单因素方差分析，Tukey's HSD进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合植物精油对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验组肉鸡的平均日增重显著提高（P0.05），且D4组效果优于D1抗生素组（P0.05）；D1组、D3组和D4组肉鸡的料重比均低于对照组，且D3组、D4组均优于D1组（P0.05）。与对照组相比，试验组肉鸡的末重均显著提高（P0.05），且D4组优于D1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.010.T002表2复合植物精油对肉鸡生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量[g/(只·d)]料重比对照组42.46±0.931 972.22±58.53b45.95±1.40b78.11±5.181.70±0.09D1组42.32±0.502 011.11±58.53a46.88±1.39a79.22±3.021.69±0.07D2组43.08±1.082 022.22±75.15a47.12±1.78a80.57±4.281.71±0.05D3组42.68±1.022 000.00±16.67a46.60±0.42a78.28±5.521.68±0.06D4组42.78±0.202 033.33±60.09a47.39±1.43a79.14±3.391.67±0.03注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复合植物精油对肉鸡血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，D1组肉鸡血清ALT、AST活性以及TP、BUN含量显著提高（P0.05），其中ALT和AST活性分别提高了21.30%和33.85%，TP含量增加了42.47%。与对照组相比，D2、D3和D4组肉鸡血清ALT、AST活性及TP、BUN含量显著降低（P0.05）。其中D4组肉鸡血清的ALT和AST活性分别比对照组降低21.68%和14.75%，BUN含量减少21.44%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.010.T003表3复合植物精油对肉鸡血清生化指标的影响组别ALT/(U/L)AST/(U/L)TP/(mg/L)BUN/(mmol/L)对照组7.84±0.76b138.88±21.90b41 788.24±3 109.22b7.37±0.79aD1组9.51±1.22a185.89±16.41a59 533.87±2 094.35a7.48±1.35aD2组6.89±1.63c121.16±16.70c39 971.89±2 764.80c5.54±0.87cdD3组6.82±1.04c122.83±9.12c37 452.19±1 818.54c5.88±0.56cD4组6.14±0.83d118.40±16.33c38 755.31±2 860.15c5.79±1.17c2.3复合植物精油对肉鸡抗氧化功能的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，D1组肉鸡血清GSH-Px和T-SOD活性显著降低（P0.05）；D2组、D3组和D4组肉鸡血清T-SOD活性显著提高（P0.05），其中D4组效果最好，T-SOD活性比对照组增加32.87%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.010.T004表4复合植物精油对肉鸡抗氧化功能的影响组别GSH-PxT-SOD对照组2 337.31±88.32a237.67±26.22cD1组2 130.64±42.80b189.33±19.46dD2组2 583.52±35.25a308.34±23.90abD3组2 686.50±56.77a288.85±34.43bD4组2 420.69±82.32a315.79±25.10aU/mL2.4复合植物精油对肉鸡肠道微生物的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组肉鸡空肠需养菌总数、大肠杆菌数和沙门氏菌数均显著降低（P0.05），其中D1组的抑菌效果最好。与对照组相比，试验组肉鸡回肠需养菌总数、大肠杆菌数、沙门氏菌数量均显著降低（P0.05），且D4组抑菌效果最好，可达到与抗生素相似的效果。试验组对乳酸杆菌均具有抑制作用。与对照组相比，试验组肉鸡盲肠需养菌总数、大肠杆菌数和沙门氏菌数均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.010.T005表5复合植物精油对肉鸡肠道微生物的影响组别空肠回肠盲肠需氧总菌数大肠杆菌沙门氏菌乳酸杆菌需氧总菌数大肠杆菌沙门氏菌乳酸杆菌需氧总菌数大肠杆菌沙门氏菌乳酸杆菌对照组7.91±0.71a8.87±0.72a5.86±0.31a8.40±0.65a8.85±0.85a9.56±0.72a6.65±0.47a8.64±0.87a9.43±0.80a9.88±0.52a7.93±0.93a9.14±0.47aD1组5.69±0.82c6.62±0.66c3.34±0.24c6.38±0.82c6.02±0.91c5.88±0.66c4.38±0.54c7.13±0.70c7.41±0.72c6.67±0.86d5.34±0.24c6.97±0.72dD2组6.76±0.64b7.34±0.42b4.88±0.55b8.05±0.48ab7.24±0.45b6.94±0.92b5.23±0.55b7.97±0.48a8.76±0.93ab8.39±0.71b6.88±0.55b9.05±0.48abD3组6.22±0.49bc6.95±0.68bc3.74±0.28c7.93±0.81b6.43±0.79bc6.35±0.68bc4.86±0.28bc8.02±0.90a8.22±0.88b7.96±0.56bc6.74±0.28b8.93±0.81abD4组5.71±0.66c7.03±0.61b3.47±0.74c8.37±0.52a6.21±0.72c6.03±0.75b4.27±0.74c7.84±0.52ab8.11±0.46b8.08±0.82bc6.47±0.74b8.37±0.52blgCFU3讨论3.1复合植物精油对肉鸡生长性能的影响植物精油对畜禽的平均日增重和平均日采食量方面均具有明显的改善作用，能够降低料重比。Denli等[8]研究表明，饲粮中添加百里香、黑籽精油能够显著提高鹌鹑的平均日增重，降低料重比和腹脂率。Tiihonen等[9]研究发现，植物精油能够使0~42 d肉鸡增重提高45%，盲肠微生物中乳酸杆菌和大肠杆菌比例显著增加。Ornaghi等[10]研究表明，与对照组相比，添加植物精油试验组犊牛的日增重明显提高。Zheng等[11]研究表明，添加香芹酚、百里香酚等天然成分的牛至油，能够提高斑点叉尾鮰的生长性能。严霞等[12]在利用植物精油研究对竹丝对肉鸡生产性能的影响时发现，添加植物精油能够显著提高肉鸡的ADG，比对照组提高5.4%，F/G比对照组降低4.9%。毛红霞等[13]研究表明，饲粮中添加160 mg/kg植物精油混合物具有提高肉鸡生长性能的作用，与对照组相比，试验组肉鸡的ADG、ADFI和F/G均有改善趋势，且效果优于金霉素。张文静[14]研究发现，添加80、160 mg/kg的复合植物精油能够显著提高肉鸡的平均日增重，显著降低料重比。周洪彬等[15]研究抗生素替代物时发现，与对照组相比，植物精油试验组肉鸡的ADG显著增加，肉鸡42日龄体重也显著升高。本试验中，饲粮添加复合植物精油能够显著提高肉鸡平均日增重和42日龄体重，降低料重比，添加量为150 mg/kg时得到较优的试验结果，与上述研究相似。因此，植物精油作为绿色添加剂能够有效替代抗生素，促进动物的生长性能，特别是对肉鸡的平均日增重和料重比具有明显的改善作用。3.2复合植物精油对肉鸡血清生化指标的影响抗生素、黄曲霉毒素、重金属等物质及其代谢物均能够对畜禽肝脏造成破坏，引发系列疾病[16]。血清中ALT和AST活性是肝脏损伤程度的敏感指标，活性越高，表明肝脏损伤程度越高。刘星等[17]研究表明，百里香精油对肝损伤小鼠具有良好的保护效果，其中高剂量精油对小鼠肝损伤的保护效果最显著。李鹏等[18]在研究植物精油对仔猪肝脏的保护作用时发现，添加适量的复合植物精油可有效减轻仔猪肝脏发生病变，促进肝脏内多种细胞的生长和增殖，提高仔猪抗氧化功能。本试验发现，在日粮中添加不同剂量的复合植物精油能够显著降低肉鸡血清ALT、AST活性，与上述研究结果一致。表明植物精油具有缓解肉鸡肝脏损伤的作用。肝脏是动物机体新陈代谢的主要场所之一，具有抵抗病原体及毒素和抗感染免疫的功能器官，因此研究植物精油对肝脏损伤的影响，对保障肉鸡肝脏健康、维持肉鸡体内正常新陈代谢具有重要作用。血清中TP和BUN含量能够反映机体蛋白代谢程度，含量越高代表蛋白利用率越低。本试验发现，添加复合植物精油能够显著降低肉鸡血清中TP和BUN含量，表明复合植物精油能够提高肉鸡对饲料蛋白的利用率。Garcia等[19]研究发现，在肉鸡饲粮中添加200 mg/kg精油混合物，可显著提高肉鸡回肠粗蛋白的消化率。严霞等[12]研究发现，复合植物精油能够降低肉鸡血清中BUN含量。汪天龙等[20]发现，植物精油能够提高动物的饲料粗蛋白的利用率，降低饲料营养成分的浪费，与本试验的结果一致，表明复合植物精油在肉鸡生产中能够有效提高养分利用率，对促进机体生长具有重要作用。3.3复合植物精油对肉鸡抗氧化功能的影响T-SOD和GSH-Px是有效清除氧自由基的重要物质，对保护体内组织减少氧化应激损伤具有重要作用，其活性越高反映体内器官的抗氧化功能越强。王兰等[21]研究发现，在肉鸡饲粮中添加100 mg/kg植物精油，能够显著提高肉鸡血清T-SOD和GSH-Px活性。夏梦芳[22]在研究植物精油水剂对肉鸡抗氧化性影响，发现添加植物精油水剂组能够显著提高爱拔益加肉鸡血清、肝脏、胸肌和腿肌的T-SOD活性。罗作明[23]研究表明，在断奶仔猪日粮中添加200 mg/kg的植物精油可以有效提高仔猪的生长性能，改善血清生化指标，增强机体的抗氧化功能。本试验中，在肉鸡饲粮中添加复合植物精油均显著提高了肉鸡血清T-SOD和GSH-Px活性，与上述研究结果一致。3.4复合植物精油对肉鸡肠道微生物的影响肠道是畜禽消化吸收营养、抵抗外源侵害的重要组织器官，肠道中存在多种微生物，如大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌和双歧杆菌等，肠道健康水平对畜禽的健康和生产性能起关键作用[24-25]。田娟等[26]研究表明，一些外源性饲料添加剂对动物的肠道菌群具有显著影响，可以抑制病原菌和增加有益菌数量，对肠道健康起有效的保护作用。陶春卫等[27]研究发现，牛至香酚能够有效降低鸡肠道中致病菌含量，促进有益菌增殖。阮栋[28]研究表明，日粮添加复合植物精油可以使肠道中有益菌数量增加，致病菌数量减少。韩乾杰等[29]研究发现，植物精油能够有效抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌增殖，改善动物肠道微生态平衡。杨晋青等[30]研究发现，饲粮添加复合植物精油能够有效阻止动物体内大肠杆菌等致病菌增殖。刘仲昊等[31]研究发现，复合植物精油能够有效抑制动物肠道内致病菌定植，提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量。本试验结果表明，复合植物精油能够显著抑制肉鸡空肠、回肠和盲肠需养菌总数、大肠杆菌、沙门氏菌数量，使肠道内有益菌数量的比例提高，与上述研究结果相似。4结论肉鸡饲粮中添加复合植物精油能够提高肉鸡生长性能、抗氧化功能，保护肠道健康，提高机体对蛋白质的利用率，且添加150 mg/kg复合植物精油效果较好。