绿原酸是存在于多种植物中的一种次级代谢产物，属于多酚类。绿原酸具有多种生物学功能，如抗菌、抗氧化、抗炎、调节免疫、调节血脂、血糖等[1-3]。随着禁抗政策实施，关于绿原酸作为植物提取物的一种活性成分的研究较多，绿原酸可以作为替抗产品在动物生产中应用[4-5]。绿原酸能够通过调节动物机体免疫，增强抗氧化能力，调整肠道微生物菌群丰度变化，进而提高动物的生长性能，改善畜产品品质[6-7]。但目前关于绿原酸的研究集中于家禽、猪、水生动物的生产中[8-10]，在反刍动物养殖中的应用较少。本试验以荷斯坦犊牛为研究对象，探究不同水平的绿原酸对犊牛生长性能、血清生化指标及免疫功能的影响，为绿原酸在幼龄反刍动物生产中的进一步利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料绿原酸由某生物科技集团股份有限公司提供，有效含量大于90%。血清免疫指标和生化指标的试剂盒均由北京诚林生物科技有限公司生产。1.2试验设计试验选择体重相近、体况良好、健康无病的荷斯坦犊牛120头，随机分成4组，每组5个重复，每个重复6头牛。各组犊牛分别饲喂含有0（对照组）、1 000（试验1组）、2 000（试验2组）、3 000 mg/kg（试验3组）绿原酸的基础日粮。试验期60 d。犊牛采用全混合日粮饲喂，主要粗饲料为苜蓿。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.003.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00苜蓿35.00代谢能/(MJ/kg)10.31麸皮15.00粗蛋白/%16.17脂肪粉0.45粗脂肪/%3.54玉米39.65粗灰分/%6.03豆粕7.00中性洗涤纤维/%30.10磷酸氢钙0.75酸性洗涤纤维/%15.62食盐0.43钙/%0.91石粉0.72磷/%0.39预混料1.00注：1.预混料由青海铁骑力士饲料有限公司提供。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验开始前，犊牛的试验场地进行消毒处理，一周后进行7 d的预试验，使犊牛适应养殖环境。预试验期间，所有犊牛饲喂基础全混合日粮。正式试验期内，每组犊牛分别饲喂含有不同水平的绿原酸全混合日粮。试验期内，犊牛自由采食、饮水。驱虫、免疫程序按照常规日常管理进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始及结束时对犊牛进行称重，称重前禁食12 h。记录试验期内每组犊牛的采食量，计算平均日增重、平均日采食量及料重比。平均日采食量=总采食量/(试验天数×试验犊牛数)(1)平均日增重=(末重-初重)/(试验天数×试验犊牛数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化指标每组挑选10头与组内均重相近的犊牛采血10 mL，静置2~3 h，3 500 r/min离心6 min，取血清，用于检测免疫指标和生化指标。使用试剂盒检测血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）含量以及谷丙转氨酶（AST）、谷草转氨酶（ALT）活性、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。1.4.3免疫指标使用试剂盒检测犊牛血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、抗炎因子白细胞介素-10（IL-10）和促炎因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）以及补体C3、补体C4含量。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 20软件进行单因素方差分析，LSD法进行差异显著性比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平绿原酸对犊牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛的平均日增重提高了12.17%、12.17%（P0.05），料重比降低了10.53%、11.18%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.003.T002表2不同水平绿原酸对犊牛生长性能的影响项目初重/kg末重/kg平均日增重/[kg/(头·d)]平均日采食量/[kg/(头·d)]料重比P值0.8360.0570.0260.6390.043对照组95.42±4.20164.31±6.301.15±0.18b5.25±0.734.56±0.62a试验1组95.83±4.58168.27±6.841.21±0.19ab5.24±0.704.33±0.58ab试验2组94.85±3.71172.50±7.051.29±0.23a5.26±0.744.08±0.55b试验3组94.96±3.21172.29±6.731.29±0.25a5.23±0.724.05±0.51b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2不同水平绿原酸对犊牛生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛血清中TC、LDL-C含量显著降低（P0.05），HDL-C含量显著升高（P0.05）；试验2组犊牛血清ALB含量显著升高（P0.05）。各组犊牛血清TG、GLU、BUN、TP含量以及AST、ALT活性差异均不显著（P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.003.T003表3不同水平绿原酸对犊牛生化指标的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组P值TG/(mmol/L)0.23±0.030.22±0.030.22±0.030.21±0.020.104TC/(mmol/L)5.73±0.61a5.14±0.56ab4.29±0.53b4.04±0.50b0.039GLU/(mmol/L)3.05±0.463.16±0.503.27±0.553.24±0.530.317LDL-C/(mmol/L)2.69±0.37a1.95±0.31ab1.57±0.25b1.55±0.21b0.038HDL-C/(mmol/L)3.16±0.52b3.53±0.57ab4.05±0.63a4.16±0.70a0.025BUN/(mmol/L)5.42±0.725.38±0.695.33±0.615.26±0.580.517TP/(g/L)71.31±5.0571.60±5.1372.05±5.2871.85±5.310.931ALB/(g/L)30.42±3.84b31.85±4.02ab33.04±4.29a31.41±4.53ab0.035AST/(U/L)60.45±7.0460.14±6.9559.07±6.5659.47±6.420.649ALT/(U/L)35.96±4.0436.15±3.8535.77±3.6036.06±3.150.593注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3不同水平绿原酸对犊牛免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛血清中IgG、IL-10含量显著升高（P0.05）；各组犊牛血清中IgA、IgM含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.003.T004表4不同水平绿原酸对犊牛免疫指标的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组P值IgA/(g/L)0.85±0.100.85±0.130.88±0.150.89±0.170.105IgG/(g/L)6.43±0.62b7.26±0.70ab8.03±0.77a8.15±0.80a0.021IgM/(g/L)2.04±0.172.11±0.202.15±0.232.17±0.260.095IL-10/(ng/L)235.94±12.41b274.05±12.83ab319.31±13.63a323.95±14.04a0.043IL-6/(ng/L)176.54±7.74174.96±7.30169.08±6.88165.83±7.050.837TNF-α/(ng/L)219.41±10.53215.65±9.42207.58±9.21205.56±9.040.085C3/(g/L)0.92±0.130.94±0.140.94±0.120.96±0.130.382C4/(g/L)2.50±0.282.43±0.222.55±0.242.59±0.310.5173讨论3.1不同水平绿原酸对犊牛生长性能的影响本研究中，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛的平均日增重比显著提高了12.17%、12.17%，料重比显著降低了10.53%、11.18%，表明在犊牛养殖中使用2 000 mg/kg剂量的绿原酸可以有效促进犊牛的生长。目前，绿原酸在犊牛养殖中的研究应用较少，主要集中于单胃动物生产中应用。周博文[11]研究发现，从蒲公英中提取的绿原酸对犊牛的生长性能无显著影响，与本试验研究结果不同，原因可能是绿原酸的添加量较少没有对犊牛的生长造成影响。刘静慧[12]研究发现，添加2 000 mg/kg的绿原酸可提高肉兔的试验末重和平均日增重，提高机体对粗脂肪和钙的消化率。周双等[13]研究发现，杜仲叶中的绿原酸可提高运输应激绵羊的生长性能。本研究结果与上述研究结果类似，表明在动物养殖中使用适量的绿原酸可以促进动物生长发育。绿原酸提高动物生长性能的结果可能与其具有抗菌、抗炎的功能有关[14]。绿原酸能够通过提高机体的抗病力，改善肠道健康，从而促进机体健康生长。3.2不同水平绿原酸对犊牛生化指标的影响动物机体的血清生化指标可反映动物机体的健康状况。本试验中，试验2组和试验3组犊牛血清TC和LDLC含量显著低于对照组，HDL-C含量显著高于对照组，表明犊牛养殖中使用2 000mg/kg的绿原酸具有改善血脂的作用。本试验中，使用2 000 mg/kg绿原酸的犊牛血清ALB含量显著高于对照组，表明绿原酸可以提高犊牛机体的免疫力。本试验中，添加不同水平的绿原酸对血糖和肝功能未产生负面影响。杨天俊等[15]研究发现，使用一定剂量的绿原酸可降低草鱼血清TC和LDL-C含量，显著提高HDL-C含量，改善草鱼的血脂健康。王多伽[16]研究表明，在吉戎兔的养殖中使用一定剂量的绿原酸可以提高其血清中白蛋白含量，且绿原酸的最适添加量为0.15%。绿原酸改善动物血脂主要是由于绿原酸抑制了与脂肪代谢相关酶的活性，调控了脂肪合成、代谢、脂肪酸氧化的相关基因的表达[17-18]，进而改善了动物机体的健康。3.3不同水平绿原酸对犊牛免疫指标的影响本试验中，与对照组相比，试验2组和试验3组犊牛血清中的IgG和IL-10含量显著升高，表明犊牛日粮添加2 000 mg/kg绿原酸可提高犊牛机体的体液免疫和细胞免疫。绿原酸增强动物机体的免疫力的作用机制为：绿原酸抑制了核转录因子kap-paB和Toll样受体4的信号通路活性，促炎细胞因子、趋化因子、细胞黏附分子等基因表达，进而调节机体的炎症反应[19]。绿原酸提高动物机体免疫力的研究结果较多。伏桂华等[20]研究发现，适量的绿原酸可以提高黄河鲤鱼机体非特异性免疫功能。刘佳等[9]研究发现，使用一定剂量的绿原酸可提高断奶仔猪血清中IgG含量，显著降低IL-6和TNF-α含量，增强断奶仔猪机体的免疫力。4结论本研究表明，在犊牛养殖中使用2 000~3 000 mg/kg绿原酸可促进犊牛生长，增强机体免疫力，改善血脂代谢，且绿原酸的适宜添加量为2 000 mg/kg。