保加利亚乳杆菌是我国《饲料添加剂品种目录》中允许应用于饲料生产的益生菌之一。保加利亚乳杆菌在发酵过程中合成的胞外多糖具有抗氧化、抗病毒等功效[1-2]。保加利亚乳杆菌可以抑制有害细菌以及腐败菌生长[3]，提高机体免疫机能[4]，产生多种风味化合物，促进机体消化，进而保护肠胃健康[5]。保加利亚乳酸杆菌制剂能够促进动物生长，提高机体免疫力，在动物饲料生产中具有广泛的应用价值[6-8]。目前，关于保加利亚乳杆菌对保育猪生长性能及血清生化指标影响的研究报道较少。因此，本试验研究保加利亚乳杆菌微囊制剂对保育猪生长性能和血清生化指标的影响，为提高猪的生长性能、开发新型的猪用益生菌添加剂提供参考。1材料与方法1.1试验材料28日龄、体重7.3 kg左右的“杜×长×大”三元杂仔猪200头。保加利亚乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理中心，菌株保藏编号CICC 20247，由江苏康雅生物科技公司使用微囊化包被技术制成保加利亚乳杆菌微囊制剂，保加利亚乳杆菌活菌数达2×1011 CFU/g。1.2试验设计试验于湖南某规模化猪场进行，200头保育猪随机分为4组，每组5个重复，每个重复10头猪。对照组（CON组）保育猪饲喂基础日粮（玉米-豆粕型），试验组分别在基础日粮中添加0.2%（LB1组）、0.5%（LB2组）、0.8%（LB3组）的保加利亚乳杆菌。试验期28 d。基础日粮依据保育猪所需的营养水平，参考NRC（2012）饲养水平配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.007.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.000玉米45.800消化能/(MJ/kg)14.23小麦麸10.000粗蛋白质/%15.50面粉2.800粗脂肪/%2.00豆粕24.200干物质/%88.50麸皮8.500钙/%1.30米糠粕5.000赖氨酸/%0.70磷酸氢钙0.600总磷/%0.75石粉0.450蛋氨酸+胱氨酸/%0.65L-赖氨酸盐酸盐0.215DL-蛋氨酸0.085食盐0.350预混料2.000注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 12 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 30 IU、VK3 2 mg、VB1 2.5 mg、VB2 4 mg、VB6 3 mg、VB12 0.02 mg、泛酸12 mg、烟酸40 mg、叶酸0.7 mg、生物素0.12 mg、Mn 80 mg、Fe 60 mg、Cu 10 mg、I 0.2mg、Se 0.2mg。2.营养水平中消化能和赖氨酸为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验期间保证4组试验猪管理标准一致，所有猪自由饮水、采食。仔猪分栏饲养，舍内温度维持在20~24 ℃，保证环境干燥卫生，按照猪场饲养管理要求严格消毒。日常记录猪的采食和精神状况。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始及结束，每头仔猪空腹称重，统计各组保育猪的采食量，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/(仔猪数×试验天数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化、免疫和抗氧化指标试验最后1 d，仔猪空腹12 h，颈静脉采血10 mL，室温静置10 min，5 500 r/min离心8 min，分离上层血清，-80 ℃保存，用于血清免疫指标、生化和抗氧化指标的测定。使用全自动生化分析仪测定血清总蛋白（TP）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）含量以及谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）活性；使用试剂盒测定血清中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量；使用酶联免疫试剂盒测定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）含量。上述检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行整理，SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析，LSD法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，LB2组、LB3组保育猪的末重、平均日增重显著升高（P0.05）；LB2组保育猪的末重和平均日增重最高，分别比对照组提高了11.54%和23.00%（P0.05）。与对照组相比，各试验组保育猪的料重比均显著降低（P0.05），其中LB2组仔猪的料重比最低，显著低于LB1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.007.T002表2日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比CON组7.29±2.6114.64±0.53b262.50±7.88b467.25±12.561.78±0.03aLB1组7.24±2.2115.11±0.32b281.07±9.50b466.58±9.401.66±0.04bLB2组7.29±1.6916.33±0.74a322.86±10.39a497.20±11.171.54±0.03cLB3组7.34±1.5316.30±0.86a320.00±10.71a505.60±18.661.58±0.04bc注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，LB3组保育猪血清TP含量显著提高（P0.05），血清BUN含量显著降低（P0.05）；LB2组保育猪血清TP含量显著升高（P0.05）。随着日粮中保加利亚乳杆菌水平升高，保育猪血清ALP和ALT活性有升高的趋势，但各组间差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.007.T003表3日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清生化指标的影响组别TP/(g/L)BUN/(mmol/L)TG/(mmol/L)GLU/(mmol/L)TC/(mmol/L)ALP/(U/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)CON组52.30±1.42b3.37±0.26a0.40±0.125.26±0.212.54±0.61380.41±15.6357.33±24.85105.33±31.21LB1组52.77±0.98b3.01±0.47a0.38±0.106.30±0.332.77±0.47402.56±10.9857.35±25.16101.23±15.86LB2组58.61±3.10a3.17±0.31a0.31±0.044.29±0.212.51±0.30415.73±21.7457.52±30.34101.30±21.31LB3组57.74±1.39a2.66±0.14b0.36±0.206.02±0.112.34±0.22419.10±18.6666.69±13.92104.32±20.112.3日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，LB3组猪血清T-AOC显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）；LB3组猪血清CAT活性极显著高于对照组（P0.01），LB2组猪血清CAT活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.007.T004表4日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)T-AOC/(U/mL)GSH-Px/((U/mL)MDA/(μmol/L)CAT/(U/mL)CON组95.70±0.361.59±0.09b654.33±158.362.89±0.83a45.33±7.41BcLB1组95.14±0.621.67±0.11ab670.28±89.252.82±0.56a50.20±5.58BcLB2组96.01±0.301.67±0.09ab669.44±143.582.84±0.96a59.56±9.02BbLB3组95.84±1.021.78±0.31a651.47±67.142.70±0.64b68.03±11.20Aa2.4日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，LB1组、LB2组、LB3组保育猪血清IgM含量分别提高9.1%、12.1%和15.2%（P0.05），血清IgG分别提高了5.4%、10.8%和13.5%（P0.05）；血清IgA含量分别提高了10.5%、21.1%和5.3%，其中LB2组保育猪血清IgA含量显著高于其他3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.007.T005表5日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清免疫指标的影响组别IgM/(g/L)IgA/(g/L)IgG/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)A/GCON组0.30±0.05b1.15±0.05b3.10±0.15b31.25±0.3728.52±0.301.09±0.02LB1组0.36±0.06a1.15±0.04b3.08±0.04a30.03±0.5529.03±0.341.03±0.02LB2组0.37±0.04a1.33±0.02a3.12±0.05a31.33±0.4128.80±0.441.09±0.03LB3组0.38±0.04a1.14±0.06b3.08±0.01a30.71±0.3629.14±0.941.05±0.023讨论3.1日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪生长性能的影响生长性能可以反映保育猪的健康程度和营养状况，提高保育猪的生长性能也是提高养殖经济效益的有效措施之一。在动物饲粮中添加保加利亚乳杆菌能够使饲粮产生特殊的香气，提高动物采食量[9]。乳酸菌中含有大量的有机酸、微生物和酶等生物活性物质，能够促进动物生长、提高饲料利用率，改善动物的健康水平[7,10-11]。本试验结果表明，在不影响平均日采食量的情况下，日粮中添加保加利亚乳杆菌可提高保育猪的平均日增重，显著降低料重比，类似结果在其他动物试验中也有报道。刘衍芬等[12]在肉仔鸡基础日粮中添加保加利亚乳杆菌及其代谢产物后，发现肉仔鸡的成活率有所提高，腹泻率显著降低。王东等[13]在54日龄的保育后期仔猪日粮中添加500 mg/kg的乳酸菌制剂，结果发现，与对照组相比，试验组仔猪的日采食量提高3%，平均日增重显著提高10.4%，料重比降低6.2%，在一定程度上提高了经济效益，与袁世超等[14]研究结果一致，表明乳酸菌制剂可以替代抗生素在保育猪生产中应用，与本试验研究结果相似。林水中等[15]发现，在日粮中补充1.5 g/kg的枯草芽孢杆菌、乳酸菌等复合益生菌可提高育肥猪的平均日增重，显著降低料重比。3.2日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清生化指标的影响血液是机体内环境稳定的关键因素，血清生理生化参数的动态变化可反映保育猪的代谢能力及健康状况[16]。血清BUN含量能够反映猪对蛋白质的吸收利用情况；ALT和AST作为动物体内重要的氨基转移酶，会影响氨基酸的合成代谢水平，也是反映动物心脏和肝脏功能的重要指标[17]。血清TC含量可以反映血脂代谢情况，本试验中各组保育猪血清TC含量无明显差异。本试验结果表明，与对照组相比，在保育猪基础日粮中添加0.5%和0.8%的保加利亚乳杆菌可显著提高保育猪血清TP含量，添加0.8%的保加利亚乳杆菌能够显著降低保育猪血清BUN含量，表明保加利亚乳杆菌可促进保育猪对饲料中蛋白质的吸收，从而提高其生长性能。丁浩等[18]研究表明，保育猪日粮中添加不同水平的乳酸杆菌制剂可显著提高血清TP含量。刘辉等[19]研究也发现，与基础日粮相比，乳杆菌发酵饲粮可使生长猪血清中TP含量提高18.85%。本研究中，日粮添加保加利亚乳杆菌可使保育猪血清ALT和AST活性略有降低趋势，与张俊瑜等[20]、白培钿等[21]研究结果一致。3.3日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪血清抗氧化指标的影响动物产生应激后，体内自由基大量聚集，打破自由基代谢原有的平衡状态，损伤细胞中的核酸、蛋白质等，进而危害动物健康[22]。血清中含有大量的抗氧化指标（如T-AOC、SOD、GSH-Px等），能够阻止肌肉发生氧化反应，清除·O2-进而维持机体自由基代谢平衡[23]。T-AOC是评价机体抗氧化能力的综合指标；SOD和GSH-Px是动物体内重要的抗氧化酶，能够稳定脂质过氧化物的水平[24]。MDA作为一种脂质氧化产物，会对肉质产生不良影响[25]，MDA含量越低说明肉的品质越好。因此，MDA含量可反映细胞的受损程度，也是评价肉品氧化变质程度的关键指标[26]。目前有关保加利亚乳杆菌对保育猪血清抗氧化指标影响的研究相对较少，其具体机制尚不清晰。本试验结果显示，日粮中添加0.8%的保加利亚乳杆菌可显著降低育肥猪血清MDA含量，显著提高T-AOC，极显著提高血清CAT活性，但对SOD和GSH-Px活性无显著影响，与朱瑾等[27]、王煜琦等[8]得出的日粮中添加益生菌能够显著降低商品猪血清MDA含量，提高机体T-AOC的研究结果类似，表明乳酸菌制剂饲料可提高猪对血清中氧化产物的清除能力，增强机体的抗氧化能力。3.4日粮添加保加利亚乳杆菌对保育猪免疫指标的影响动物血清免疫指标受营养水平、生长发育等多种因素的影响。免疫球蛋白主要包括IgM、IgG和IgA，是体液免疫的主要抗体，也是衡量机体免疫水平的重要指标[24,28]，可以与抗原特异性结合，具有抗病毒和预防感染的能力。其中IgM是机体初次抵御外界抗原产生的重要产物，主要介导抗感染免疫[29]；IgA主要参与非特异性免疫，属于保护性抗体[30]；IgG作为血液中含量最高的球蛋白，可以抵御肠道内细菌的侵袭，保护机体健康。血清ALB含量能够反映机体对蛋白质的合成状况，ALB含量升高表明合成蛋白质的能力增强，促进动物的生长发育[31]。与机体防御抗原的能力与血清GLB含量呈正相关，含量越高，机体的免疫能力就越强。有研究发现，益生菌可增强血清中可溶性抗原的抗体反应，调节动物免疫作用[32]。王煜琦等[8]在育肥猪日粮中添加复合乳酸菌制剂，发现试验组育肥猪血清中IgG含量显著增加。本研究结果显示，试验组保育猪血清中IgG、IgM和IgA含量显著高于对照组，表明日粮中添加保加利亚乳杆菌在一定程度上可以提高保育猪血清的免疫球蛋白含量，增强保育猪的免疫力和抗病力。4结论日粮中添加保加利亚乳杆菌可以明显提高保育猪的生长性能，改善血清生化指标，提高保育猪的抗氧化和免疫能力。根据各项指标的测定结果，本研究认为保加利亚乳杆菌微囊制剂的适宜添加量为0.5%。