许多中草药具有抑菌和抗病毒功能，对鸡的疾病防治具有良好作用。中草药所含的多糖、黄酮、精油等生物活性物质能够增强动物机体的免疫力，提高淋巴细胞转化率，促进抗体形成，进而提高动物的生长性能[1-3]。如连翘含有黄酮类、萜类、有机酸等化合物，具有抗炎、抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等活性[4]；当归含有挥发油、多糖、有机酸和黄酮等有机物，具有补血、活血、止痛、润肠等功能，对机体各系统的药理作用较显著[5]；而黄芪的主要活性成分有多糖、皂苷类、黄酮类、氨基酸、微量元素等，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托疮生肌等功能，在抗肿瘤、保护心脑血管、提高免疫功能、保护肺肾功能、抵抗肝损伤和抗氧化作用方面效果显著[6]。有研究表明，两种或两种以上中草药构成的复方方剂药用效果更好[7]。东兰乌鸡是广西优良地方品种，主要分布于广西东兰县及周边县乡，年出栏100万羽以上。东兰乌鸡属中小体型，成年（150 d）公鸡体重1.3~2.5 kg，母鸡体重1.1~2.0 kg；120 d时公鸡平均体重1 336.6 g，平均日增重11.1 g；母鸡平均体重913.9 g，平均日增重8.4 g[8]。东兰乌鸡全身黑色，皮肤、肉、骨、内脏为浅黑色[9]，因具有耐粗饲、抗病力强、肉质细嫩、肉味鲜美及药用价值高等优点而广受青睐[10]。本研究拟用连翘、当归、黄芪、山楂等中草药组成添加剂，观察其对东兰乌鸡生长性能以及血清生化、免疫、抗氧化指标的影响，为中草药作为“替抗”物质的研究与应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1中草药添加剂本试验采用连翘、当归、黄芪、陈皮、山楂、甘草等10味中草药（其中每种组分占组方总量的10%，按重量计）构成添加剂（以下称为“连黄”中草药添加剂），购自广西南宁市一心医药有限公司，使用前粉碎，过100目筛，装袋。1.1.2试验动物试验1日龄东兰乌鸡480羽（均为母鸡）由广西立滕农牧发展有限公司提供。试验于2020年11月9日在广西畜牧研究所养禽研究室试验鸡场进行。1.2试验日粮试验用基础日粮由南宁市漓源粮油饲料有限公司提供，主要原料组成为玉米、小麦、高粱等谷物、豆粕、鱼粉、磷酸氢钙、L-赖氨酸硫酸盐、蛋氨酸羟基类似物等，基础日粮营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T001表1基础日粮营养水平（风干基础）项目鸡花料（1~15 d）小鸡料（16~35 d）中鸡料（36~49 d）代谢能/(MJ/kg)12.3112.1311.98干物质/%89.8289.8989.49粗蛋白质/%21.7120.8918.22粗脂肪/%4.124.574.74粗纤维/%3.673.844.37粗灰分/%6.816.947.31钙/%1.341.421.46有效磷/%0.430.410.40食盐/%0.380.460.48赖氨酸/%1.281.191.14蛋氨酸/%0.560.510.48蛋氨酸+胱氨酸/%0.890.840.791.3试验设计试验鸡随机分4组，每组6个重复，每重复20羽。A组为对照组，乌鸡饲喂基础日粮；B组、C组、D组分别在基础日粮中加入0.25%、0.50%和1.00%的“连黄”中草药添加剂。试验期49 d。试验前21 d，试验鸡养在育雏室，人工控温，初始室温33 ℃，1周后每2 d降1 ℃，最终（21 d前）维持在30 ℃；试验期间鸡自由采食和饮水；前21 d 24 h光照，21 d后采用与自然通风和光照；其他饲养管理及免疫程序按生产常规进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能分别于试验开始以及试验第21、35、49 d的8：00称各组试验鸡空腹体重，计算平均日增重；期间测定试验鸡的采食量，计算平均日采食量和料重比。平均日增重=(阶段末重-阶段初重)/试验阶段天数(1)平均日采食量=总采食量/(试验鸡数×试验阶段天数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化、免疫、抗氧化指标各组随机抽取6羽试验鸡，翅下静脉采血约5 mL，分离血清，-20 ℃保存，送至南京建成生物工程研究所检测血清生化、免疫及抗氧化指标。检测指标包括：血清葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）；免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）；谷胱甘肽（GSH）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和总抗氧化能力（T-AOC）。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行初步处理，SPSS 16.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡生长性能的影响2.1.1“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡平均日增重的影响（见表2）由表2可知，1~21 d，B组乌鸡平均日增重显著高于对照组和C组（P0.05），极显著高于D组（P0.01）；22~35 d，B组平均日增重显著高于其他3组（P0.05）；36~49 d，B组乌鸡的平均日增重显著高于对照组（P0.05）；1~49 d，B组乌鸡平均日增重显著高于对照组和D组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T002表2“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡平均日增重的影响组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(羽·d)]1~21 d22~35 d36~49 d1~49 dA组（对照组）30.70±0.28473.17±15.49b6.87±0.18bc8.09±0.17b13.22±0.55b9.03±0.21bB组30.68±0.20503.04±11.75a7.22±0.14a8.83±0.17a14.07±0.51a9.64±0.13aC组30.65±0.22484.88±10.63ab6.83±0.37bc8.21±0.73b14.00±0.67ab9.27±0.23abD组30.63±0.20478.49±18.48b6.69±0.31c8.25±0.48b13.70±0.88ab9.14±0.25b注：同列数据肩标相邻字母表示差异显著（P0.05），相隔字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表4与此同。2.1.2“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡平均日采食量的影响（见表3）由表3可知，22~35 d，B组乌鸡的平均日采食量显著高于C组（P0.05），但与对照组和D组差异不显著（P0.05）；36~49 d，B组乌鸡的平均日采食量极显著低于对照组（P0.01），C组、D组乌鸡的平均日采食量显著低于对照组（P0.05）；1~49 d，C组乌鸡的平均日采食量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T003表3“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡平均日采食量的影响组别1~21 d22~35 d36~49 d1~49 dA组（对照组）14.70±0.2826.40±1.12ab42.31±1.26a25.93±0.71aB组15.45±0.4926.97±1.09a39.90±0.84c25.64±0.32abC组14.84±0.7425.71±0.82b40.25±1.04bc25.21±0.55bD组15.15±0.9526.50±0.92ab40.63±1.83bc25.67±0.69abg/(羽·d)2.1.3“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡料重比的影响（见表4）由表4可知，1~21 d，D组乌鸡的料重比显著高于B组、对照组（P0.05）；22~35 d，B组乌鸡料重比显著低于对照组（P0.05）；36~49 d，B组乌鸡料重比极显著低于对照组（P0.01），C组、D组乌鸡料重比显著低于对照组（P0.05）；1~49 d，B组、C组乌鸡料重比均极显著低于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T004表4“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡料重比的影响组别1~21 d22~35 d36~49 d1~49 dA组（对照组）2.142±0.046b3.261±0.102a3.203±0.082a2.871±0.041aB组2.140±0.060b3.055±0.107b2.837±0.066c2.661±0.030cC组2.174±0.111ab3.148±0.219ab2.878±0.109bc2.719±0.059cD组2.265±0.085a3.218±0.101ab2.970±0.107b2.811±0.090ab2.2“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，49 d，B组、D组乌鸡血清AST活性显著高于C组（P0.05）；对照组乌鸡血清TG含量极显著高于C组（P0.01），显著高于B组、D组（P0.05）；对照组乌鸡血清TC含量极显著高于B组、C组（P0.01），显著高于D组（P0.05）。21、35 d，对照组乌鸡血清BUN含量极显著高于B组（P0.01），显著高于C组、D组（P0.05）；49 d，对照组乌鸡血清BUN含量显著高于其他3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T005表5“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清生化指标的影响项目日龄/dA组（对照组）B组C组D组GLU/(mmol/L)2111.85±2.7211.89±2.3612.63±2.5711.46±2.203512.74±2.3912.64±2.0313.52±2.1312.00±2.224915.64±1.7416.20±1.5316.17±1.6016.52±1.54续表5　“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清生化指标的影响21 d，对照组乌鸡血清ALB含量显著低于C组、D组（P0.05）；49 d，对照组、D组乌鸡血清ALB含量显著低于B组、C组（P0.05）。49 d，对照组乌鸡血清ALT活性显著低于C组、D组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T006项目日龄/dA组（对照组）B组C组D组TP/(g/L)2123.75±3.7623.50±2.8624.78±2.1923.43±1.553525.97±2.5426.35±3.3025.81±1.5226.04±3.754930.54±3.6032.11±2.9731.06±2.8831.05±2.57AST/(U/L)2135.88±2.6238.41±6.0237.50±4.5937.33±3.753541.43±5.0140.38±4.3940.69±7.3739.48±3.744938.21±4.19ab40.30±3.00a35.61±5.94b40.78±3.87aTG/(mmol/L)210.63±0.160.52±0.080.60±0.110.54±0.05350.60±0.100.49±0.070.51±0.130.52±0.05490.69±0.07a0.55±0.07bc0.49±0.04c0.56±0.13bcTC/(mmol/L)213.90±0.513.73±0.603.55±0.503.31±0.54353.93±0.343.60±0.473.61±0.423.76±0.52494.75 ±0.58a3.51±0.47c3.60±0.32c3.89±0.44bcBUN/(mmol/L)210.90±0.04a0.62±0.07c0.77±0.13bc0.71±0.10bc350.59±0.06a0.32±0.05c0.45±0.10b0.38 ±0.10bc490.78±0.07a0.47±0.05b0.50±0.18b0.39 ±0.13bcALB/(g/L)219.11±1.45b9.83±0.96ab11.03±1.38a11.09±0.85a3511.48±2.0111.89±0.8911.92±1.4512.54±1.634912.75±1.54b14.00±1.21a14.03±1.07a12.20±1.16bALT/(U/L)211.55±0.251.23±0.241.26±0.241.28±0.25351.20±0.231.24±0.201.19±0.321.38±0.22490.69±0.11b0.90±0.25ab0.96±0.23a0.95±0.26a注：同行数据肩标相邻字母表示差异显著（P0.05），相隔字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表6、表7与此同。2.3“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清免疫指标的影响（见表6）由表6可知，49 d，B组乌鸡血清的IgM和IL-2含量均显著高于对照组（P0.05），C组乌鸡血清IL-2含量显著高于对照组（P0.05）。各组乌鸡血清IFN-γ与IgG含量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T007表6“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清免疫指标的影响项目日龄/dA组（对照组）B组C组D组IgG/(g/L)218.13±0.747.37±0.867.20±1.207.30±0.98358.87±1.108.38±1.158.51±0.589.34±1.13499.87±1.589.79±0.888.97±1.398.94±0.95IgM/(g/L)211.82±0.311.72±0.251.67±0.351.64±0.28352.13±0.272.10±0.332.04±0.202.11±0.30492.11±0.34b2.50±0.23a2.35±0.38ab2.39±0.24abIFN-γ/(ng/L)21143.53±21.01144.88±28.31143.37±24.66142.46±24.3135169.95±14.07171.88±23.90167.45±14.03176.02±25.6449180.88±17.58185.76±15.94176.33±9.31169.54±15.95IL-2/(ng/L)2127.94±3.4427.84±2.7126.60±3.4326.76±2.353532.69±3.8631.86±3.7232.87±1.9432.74±3.424931.69±4.08b34.55±2.97a34.28±4.44a31.80±2.58b2.4“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，21 d，C组乌鸡血清GSH含量极显著高于对照组（P0.01），显著高于D组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.16.008.T008表7“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清抗氧化指标的影响项目日龄/dA组（对照组）B组C组D组GSH/(μmol/L)2112.94±0.52c15.20±0.38ab17.00±1.66a15.02±1.24bc357.13±0.47c8.63±0.44a9.05±0.79a8.09±0.76ab4912.09±0.80c13.59±0.46b14.98±0.75a13.37±1.36bT-SOD/(U/mL)21386.46±12.67c426.19±9.37a428.08±16.32a394.78±37.21bc35370.15±9.69c394.74±7.11a393.77±7.72a385.12±17.89ab49420.60±66.15429.60±31.50428.23±47.02425.86±30.24T-AOC/(mmol/L)210.80±0.100.84±0.090.85±0.140.81±0.08350.70±0.090.75±0.170.76±0.120.71±0.17490.60±0.110.66±.0140.65±0.080.63±0.1235 d，B组、C组乌鸡血清GSH含量极显著高于对照组（P0.01）；49 d，C组乌鸡血清GSH含量极显著高于对照组（P0.01），显著高于B组、D组（P0.05）。21 d，B组、C组乌鸡血清T-SOD活性极显著高于对照组（P0.01），显著高于D组（P0.05）。35 d，B组、C组乌鸡血清T-AOC极显著高于对照组（P0.01），D组血清T-A0C显著高于对照组（P0.05）。3讨论3.1“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡生长性能的影响本研究中，B组乌鸡平均日增重、料重比显著降低；在整个试验期间，3个试验组乌鸡的平均日采食量均未提高的情况下，B组平均日增重显著提高，表明B组乌鸡生长性能的提高通过饲料转化效率的提高而实现。因此，日粮添加0.25%“连黄”中草药添加剂对乌鸡的生长具有促进作用。李姣清等[11]、于佳楠等[12]和贾玉刚等[13]以黄芪、当归、陈皮、山楂、甘草等作为主要组分构成的中草药添加剂饲喂肉仔鸡时，对鸡的生长性能均表现良好的促进作用，与本研究结果相似。3.2“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清生化指标的影响本研究中，日粮添加“连黄”中草药添加剂显著降低了血清BUN含量及49 d时，乌鸡血清TG、TC含量，显著提高了21 d时C组、D组以及49 d时B组、C组血清ALB含量，表明“连黄”中草药添加剂对试验鸡的部分血清生化指标已产生了不同程度的影响，且0.25%和0.50%添加量的影响幅度较大。BUN是机体蛋白质代谢的终产物，血清BUN含量与体内氮沉积和蛋白质的利用效率呈负相关，BUN含量降低表明机体蛋白质利用效率高，体内氮沉积增加[14]。血清TG和TC含量是机体脂类代谢水平的重要指标，其含量反映机体内脂类的吸收与代谢状况[15-16]，血清TG和TC含量降低，表明体内的脂类代谢良好。血清ALB是机体血浆蛋白的重要组成部分，约占机体血浆蛋白总量的60%，不仅在维持血液容量和血液胶体渗透压的稳定具有重要作用，还可清除体内的自由基，调节凝血功能和体液酸碱平衡[17-18]。本研究结果表明，日粮中添加0.25%和0.50%“连黄”中草药添加剂能够提高东兰乌鸡机体蛋白质的利用效率，提升后期体内的脂类代谢，在一定程度上改善其血液的生理机能。3.3“连黄”中草药添加剂对东兰乌鸡血清免疫与抗氧化性能的影响本研究中，0.25%“连黄”中草药添加剂提高了49 d时乌鸡血清IgM和IL-2含量，0.50%的添加量也提高了血清IL-2含量，表明日粮中适量添加“连黄”中草药可在一定程度上提高乌鸡的免疫性能；3种添加量的“连黄”中草药添加剂均不同程度地提高了3个阶段乌鸡血清GSH含量，添加0.25%和0.50%的“连黄”中草药添加剂还极显著提高了21和35 d时血清T-SOD活性。GSH是机体内一种作用较强的抗氧化剂，其分子结构中特有的巯基（—SH）具有很强的提供电子和质子氢能力，可在机体氧化还原过程中有效地清除体内的自由基。此外，GSH还能够促进机体免疫细胞的增长，提升免疫细胞活性，可在一定程度上提高机体的免疫性能[19-20]。T-SOD是广泛存在于机体组织内的抗氧化酶，能够直接清除机体新陈代谢过程中产生的·O2-，是体内抗氧化系统的第一道防线[21-22]。GSH和T-SOD的共同作用，组成了机体抗氧化系统的重要组成部分，保护机体免受自由基的氧化伤害。本研究中，试验鸡的血清GSH含量和T-SOD活性显著提高，表明适量添加“连黄”中草药可有效提高乌鸡的抗氧化性能。原因可能与本添加剂中各种中草药组分所含有的多糖、黄酮、挥发油（精油）、生物碱、有机酸等生物活性物质有关。有研究表明，日粮中适量添加多糖[23]、黄酮[24-25]、挥发油[26-27]及生物碱[28-29]等活性物质均能够有效提高肉仔鸡的T-SOD和GSH-Px的活性以及GSH的含量。孟令楠等[30]研究发现，使用黄芪、山楂、连翘等复合中草药制剂饲喂肉仔鸡可以提高肉仔鸡血清中T-SOD、GSH-Px活性。本研究所使用的“连黄”中草药添加剂由连翘、当归、黄芪[4-6]以及陈皮、山楂、甘草[31-33]等10味中草药组成，每一种组分均含有超过一种的生物活性物质，正是上述活性物质的协同作用有效地提高了乌鸡的抗氧化能力及免疫性能，从而确保乌鸡的正常生长发育。4结论本研究结果表明，“连黄”中草药添加剂能够明显提高东兰乌鸡的生长性能，可在一定程度上改善东兰乌鸡的蛋白质和脂肪代谢，显著提高其抗氧化性能。本试验条件下，“连黄”中草药添加剂最适添加量为0.25%。