犊牛一般分为哺乳期和断奶期犊牛，其生理功能处于急剧变化的阶段，身体各个系统发育不完全，尤其是消化和免疫系统，导致免疫力低下，易受到外界病菌、病毒、环境等因素的影响，引发腹泻、感冒等疾病[1]。而犊牛的生长发育情况直接影响其后期的生产性能。益生菌（probiotics）是一种有益于动物机体生理作用的活菌微生物，能够促进动物机体对营养的消化吸收以及动物机体发育，具有调节胃肠道内菌群平衡、抑制致病菌、提高免疫能力、维持肠道健康等多种功效[2]。由于不同菌属益生菌间存在一定协同作用，研究热点现已从单一益生菌向复合型益生菌方向发展。益生菌在动物生产中具有积极作用，日粮中添加益生菌有助于增加肉鸡体重，降低料重比，提高产蛋性能[3]。陈国福等[4]研究表明，日粮中添加益生菌制剂能够降低育肥猪料重比，降低血清尿素氮含量，提高总蛋白含量。杜瑞[5]研究表明，益生菌能够提高肉羊的增重和肠道菌群α的多样性，增大眼肌面积。赵飞燕[6]研究表明，添加益生菌制剂能够改善奶牛产奶的奶品质、提高产奶量等积极作用。目前，益生菌应用于犊牛的相关研究较少，本试验探究复合益生菌对奶犊牛生长性能和血液生化指标的影响，为其在动物生产养殖中的合理利用提供参考，以提高犊牛健康水平，提高牛场养殖效益。1材料与方法1.1试验材料复合益生菌由浙江大学叶均安老师提供。复合益生菌中含有地衣芽孢杆菌（活菌数≥1.0×109 CFU/g）、枯草芽孢杆菌（活菌数≥2.0×109 CFU/g）和米曲霉（活菌数≥2.0×104 CFU/g）。试验动物为平均出生30日龄的荷斯坦母犊牛。1.2试验设计本试验在2020年11月于贺兰县宁夏合牧农业科技有限公司奶牛场进行。试验采用单因素试验设计，随机选取品种一致、健康良好且出生日龄相近的荷斯坦母犊牛20头，随机分为对照组和试验组（添加复合益生菌），每组10个重复，每个重复1头牛。哺乳期对照组饲喂代乳粉+犊牛精料补充料，试验组则在犊牛精料补充料中添加1.5%的复合益生菌，代乳粉定量饲喂。试验期间自由采食精料补充料、自由饮水。哺乳期阶段犊牛全部转移至犊牛岛单栏饲喂，转移前对犊牛岛进行彻底杀菌消毒处理。试验期78 d，其中预试期10 d，哺乳期40 d，断奶期28 d。精料补充料组成及营养水平见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.09.005.T001表1哺乳期犊牛精料补充料组成及营养水平Tab.1Composition and nutritional level of lactating calf concentrate supplements项目对照组试验组原料组成/%玉米45.045.0利牧菌01.5豆粕（43%)30.330.3棉粕5.05.0麸皮11.09.5石粉1.01.0磷酸氢钙1.71.7白糖2.02.0食盐0.60.6预混料3.43.4合计100.0100.0营养水平综合净能/(MJ/kg)8.528.50粗蛋白/%20.1019.96干物质/%89.6289.87酸性洗涤纤维/%5.816.14中性洗涤纤维/%25.4325.01钙/%0.690.73磷/%0.900.93粗脂肪/%2.392.48粗灰分/%7.898.04注 ：1.精料补充料由宁夏大北农科技实业有限公司生产提供。2.营养水平为实测值，综合净能为计算值；下同。断奶期试验所用日粮由燕麦草和精料补充料组成，精粗比为75∶25，精料补充料配方不变，其日粮组成及营养水平见表2，以全混合日粮（TMR）形式饲喂。试验犊牛由犊牛岛转移至犊牛舍饲喂，转移前对犊牛舍进行彻底消毒清粪，自由采食饮水。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.09.005.T002表2断奶后日粮组成及营养水平Tab.2Diet composition and nutritional levels after weaning项目对照组试验组原料组成/%燕麦草2525精料补充料7575合计100100营养水平综合净能/(MJ/kg)8.348.40粗蛋白/%17.3017.40干物质/%87.8087.60酸性洗涤纤维/%11.6411.40中性洗涤纤维/%31.7632.23钙/%0.640.61磷/%0.740.72粗脂肪/%1.981.91粗灰分/%8.968.851.3测定指标及方法1.3.1生长性能在试验各阶段正式开始晨饲前对犊牛进行空腹称重，记为初重；试验最后1 d清晨空腹称重，记为末重。试验期间每日记录犊牛日粮添加量及剩余料，并计算平均日采食量、平均日增重等指标。平均日采食量=总采食量/试验天数（1）平均日增重=（末重-初重）/试验天数（2）料重比=平均日采食量/平均日增重（3）1.3.2血清免疫指标在试验最后1 d晨饲前，在颈静脉处采集血样样品约10 mL，并置于含有肝素钠抗凝剂的采血管。静置10 min后，于4 ℃条件下，4 000×g离心20 min，取上清液-20 ℃保存。白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总蛋白（TP）及白球比（A/G）通过日立7180全自动生化分析仪用光电比色原理测定；白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）采用ELISA试剂盒测定。1.3.3血清抗氧化指标血清抗氧化指标包括总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及丙二醛（MDA）。操作步骤按照试剂盒说明书进行（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件进行初步整理，SPSS 21.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA）。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮中添加复合益生菌对奶犊牛生长性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，在荷斯坦母犊牛哺乳期日粮中添加复合益生菌对其末重、日增重均无显著影响（P0.05）。但在犊牛断奶期日粮中添加复合益生菌显著提高了断奶期的末重和平均日增重（P0.05）。整个试验期内（0~68 d），与对照组相比，试验组犊牛的增重和平均日增重显著提高（P0.05）。结果表明，日粮中添加复合益生菌有助于犊牛对饲料中各种营养成分的吸收，提升饲料转化率，促进犊牛健康生长。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.09.005.T003表3添加复合益生菌对犊牛生长性能的影响Tab.3Effects of dietary compound probiotics in diet on growth performance of calves项目对照组试验组哺乳期初重/kg57.70±8.6160.89±10.11末重/kg101.60±12.02107.33±11.92平均日增重/[g/(头·d)]1 097.50±150.201 161.11±101.63断奶期初重/kg101.60±12.02107.33±11.92末重/kg123.00±10.59b133.75±12.87a平均日增重/[g/(头·d)]764.29±40.17b943.57±86.85a平均日采食量/[g/(头·d)]3.46±5.343.54±9.81料重比4.53±1.323.75±3.250~68 d增重/(kg/头)63.88±7.04b73.50±8.77a平均日增重/[g/(头·d)]939.34±36.60b1 080.88±45.58a注 ：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2日粮中添加复合益生菌对犊牛血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，犊牛日粮中添加复合益生菌可显著提高血清IFN-γ含量（P0.05），促进免疫器官发育，增强犊牛的免疫功能。与对照组相比，添加复合益生菌显著降低了血清IL-2含量（P0.05），对IL-4含量无显著影响（P0.05）。添加复合益生菌对血清TP、ALB、GLB的含量和A/G均无显著影响（P0.05）。结果表明，日粮中添加复合益生菌对犊牛的免疫力具有一定的改善作用。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.09.005.T004表4日粮中添加复合益生菌对犊牛血清免疫指标的影响Tab.4Effects of addition of compound probiotics in diet on serum immune indices of calves组别IFN-γ/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-4/(ng/L)TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)A/G对照组1 145.91±9.91b167.76±4.30a9.38±1.2253.10±3.2331.20±1.1422.66±3.441.39±0.25试验组1 183.03±14.56a153.24±5.28b9.18±0.4854.68±5.0430.66±2.3721.80±4.541.37±0.422.3日粮中添加利牧菌对犊牛血清抗氧化指标含量的影响（见表5）由表5可知，在奶犊牛日粮中添加复合益生菌对犊牛血清MDA含量、GSH-Px活性及T-AOC均无显著影响（P0.05）。与对照组相比，添加复合益生菌的试验组CAT活性显著升高（P0.05）。结果表明，日粮中复合益生菌能够改善犊牛抗氧化性能。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.09.005.T005表5日粮中添加复合益生菌对犊牛血清抗氧化指标的影响Tab.5Effects of addition of compound probiotics in diet on antioxidant indexes of calf serum组别MDA/(μmol/L)T-AOC/(mmol/L)GSH-Px/(μg/L)CAT/(U/mL)对照组2.62±0.630.30±0.1011.63±1.292.97±0.95b试验组2.62±0.590.31±0.0211.13±1.064.35±0.95a3讨论3.1日粮中添加复合益生菌对奶犊牛生长性能的影响有研究发现，添加益生菌能够帮助幼龄动物促进有益消化道菌群繁殖、维持菌群稳定、调节消化道pH值，还有助于机体对饲料中各种营养成分的消化吸收、产生大量的菌体蛋白和多肽活性物质，进而促进动物机体的生长发育的消化吸收、产生大量的菌体蛋白和多肽活性物质，进而促进动物机体的生长发育[7-9]。本试验中，与对照组相比，在犊牛日粮中添加复合益生菌显著提高了断奶期犊牛末重和平均日增重，且显著提高了整个试验期犊牛的增重和平均日增重。结果表明，在犊牛日粮中添加复合益生菌能够提升犊牛对饲料的消化吸收，降低料重比，促进犊牛的生长性能。孟竞尧等[10]研究发现，在4~6月龄犊牛日粮中添加不同剂量的复合益生菌（主要成分为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和米曲霉）显著提高了犊牛的平均日增重、颗粒料采食量，降低了料重比。乌日勒格[11]研究发现，在育肥羊日粮中添加枯草芽孢杆菌能够显著提升肉羊的增重效益及生产性能。季彬等[12]在荷斯坦犊牛日粮中添加不同剂量的复合益生菌（主要成分枯草芽孢杆菌、乳酸菌、曲霉发酵物和复合酶制剂，活菌总数≥1.6×109 CFU/g），结果表明，与对照组相比，日粮中添加复合益生菌显著提高了中剂量和高剂量组的末重和平均日增重，降低了料重比。上述研究结果均与本试验结论相似。3.2日粮中添加复合益生菌对犊牛血清免疫指标的影响血清生化指标能够反映机体组织、器官的功能以及机体的营养代谢和生产性能等情况。血清TP含量高时，蛋白质代谢旺盛，利于提高动物新陈代谢和免疫力，促进动物健康和快速生长提高饲料转化率[13]。IL-2、IL-4和IFN-γ是反映加强机体免疫功能的指标。其中IL-2是淋巴细胞活化过程中由细胞膜分泌的一种糖蛋白，是重要的免疫增强因子[12]；IFN-γ能够促进抗体的生成，提高机体免疫能力[14]。本研究显示，日粮中添加复合益生菌显著提高了犊牛血清IFN-γ的含量，显著降低了IL-2的含量，表明日粮中添加复合益生菌能够改善犊牛血清免疫指标。3.3日粮中添加利牧菌对犊牛血清抗氧化指标含量的影响动物机体的抗氧化能力对自身健康至关重要。氧化应激指机体遭受各种应激刺激时，体内高活性分子如活性氧自由基大量产生，其氧化程度超出氧化物的清除能力范围，氧化系统和抗氧化系统失衡，导致细胞死亡和组织损伤[15]。梁金逢等[16]研究表明，日粮中添加复合益生菌剂可以提高育成牛的抗氧化能力。本研究表明，日粮中添加复合益生菌可一定程度上改善犊牛机体的抗氧化能力。4结论综上所述，在本试验条件下，日粮中添加复合型益生菌可以提高犊牛的生长性能，提升犊牛的免疫力，减少犊牛腹泻发生，改善机体抗氧化性能。