随着饲料端禁抗政策实施,开发新型、安全、绿色、高效的替代抗生素的饲料添加剂成为饲料行业的研究重点[1]。植物提取物在替代抗生素的研究中已经取得较好的应用效果,已逐渐应用于单胃动物、反刍动物及水产生物等领域中。其中多糖类物质凭借天然、无毒副作用、无残留等特点逐渐应用于动物养殖生产[2-3]。岩藻多糖主要由岩藻糖和硫酸基组成,主要存在于褐藻类植物细胞壁[4-5]。岩藻多糖具有改善动物肠道健康[6-7]、增强机体免疫力及抗氧化功能[8-9]、提高生产性能[10]等多种生物学功能。目前,岩藻多糖的研究应用主要集中于家禽、猪等单胃动物的养殖生产中。在肉鸡生产中使用500 mg/kg的岩藻多糖可显著提高免疫器官指数[11]。在仔猪生产中使用500 mg/kg的岩藻多糖,不仅提高机体对饲料中养分的利用率,增加了肠道中微生物种群的丰富度[6]。岩藻多糖在反刍动物生产中的应用研究成果并不多。因此本试验在湖羊羔羊日粮中添加不同水平的岩藻多糖,研究其对羔羊生长性能、免疫力及抗氧化功能的影响,为岩藻多糖在湖羊生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验岩藻多糖购自青岛某生物科技有限公司(含量98%);试验所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.2试验设计试验选择健康2月龄,体重20 kg左右羔羊80只,试验设3个处理组,1组为对照,每组重复5个,4只羔羊为1个重复。试验1组、2组、3组羔羊分别在基础日粮中添加岩藻多糖200、400、800 mg/kg,对照组羔羊仅饲喂基础日粮[12-13]。试验期共77 d,其中预试期7 d,正式试验期70 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.004.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0苜蓿草粉20.0代谢能/(MJ/kg)10.24玉米25.0粗蛋白/%14.75麸皮5.0粗脂肪/%3.68玉米胚芽粕13.0粗灰分/%7.10膨化大豆5.0中性洗涤纤维/%30.48棉籽粕6.5酸性洗涤纤维/%15.19菜籽粕7.5钙/%0.90豆粕15.0磷/%0.48食盐0.3磷酸氢钙1.2小苏打0.5预混料1.0注:1.预混料为每千克日粮提供:VA 5 500 IU、VD3 2 300 IU、VE 25 mg、Mn 62 mg、Fe 53 mg、Cu 13 mg、Zn 62 mg、Co 1.1 mg、Se 0.26 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理养殖试验开始前7 d,试验羔羊进行统一驱虫处理,预试期前4 d所有羔羊饲喂基础日粮,后3 d分别饲喂各处理日粮。试验期间羔羊自由采食饮水。每日观察羔羊的健康状况,保持养殖舍的环境卫生。保持养殖舍的温度、湿度等环境条件符合羔羊养殖标准。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验第1 d和最后1 d,羔羊空腹12 h,称重。每日准确记录各组湖羊羔羊的耗料量,根据体重和耗料量计算各组羔羊的生长指标。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=羔羊总耗料量/(试验天数×各组试验羔羊数量)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清免疫指标正式试验第70 d,于晨饲前各组选择10只羔羊,采集颈静脉血约10 mL,使用离心机在转速为4 000 r/min条件下离心6 min,收集血清保存于-20 ℃冰箱,测定血清中免疫球蛋白、细胞因子等免疫指标。各组试验湖羊羔羊的血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、免疫球蛋白-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白-1β(IL-1β)指标测定参考试剂盒说明书进行。1.4.3血清抗氧化指标各组湖羊羔羊血清丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)及超氧化物歧化酶(SOD)指标的测定参考试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析采用SPSS 26软件对羔羊生长性能、免疫指标、抗氧化指标数据进行单因素方差分析,Duncan's法进行组间多重比较。P0.05表示具有显著性差异。2结果与分析2.1岩藻多糖对湖羊羔羊生长性能的影响(见表2)由表2可知,各试验组羔羊末重分别比对照组提高了4.69%、10.51%、6.53%(P0.05),腹泻率比对照组降低了27.12%、50.78%、41.07%(P0.05)。试验2组羔羊的平均日增重比对照组提高了22.73%(P0.05),料重比降低了14.90%(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.004.T002表2岩藻多糖对湖羊羔羊生长性能的影响项目初重/kg末重/kg平均日增重/[kg/(只·d)]平均日采食量/[kg/(只·d)]料重比腹泻率/%对照组19.8035.20c0.22b1.587.18a6.38a试验1组19.5536.85b0.25ab1.606.40ab4.65b试验2组20.1038.90a0.27a1.656.11b3.14b试验3组20.1537.50b0.25ab1.636.52ab3.76bSEM0.971.280.080.250.310.27P值0.8190.0390.0470.3190.0280.011注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),相同字母或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.2岩藻多糖对湖羊羔羊免疫指标的影响(见表3)由表3可知,试验2组和试验3组羔羊血清IgG含量分别比对照组提高了48.48%、33.33%(P0.05);各试验组羔羊血清IL-10含量分别比对照组提高了25.39%、52.53%、32.12%(P0.05);试验2组和试验3组羔羊血清TNF-α含量分别比对照组降低了16.03%、12.99%(P0.05);试验2组羔羊血清IL-1β含量比对照组降低了16.75%(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.004.T003表3岩藻多糖对湖羊羔羊免疫指标的影响项目IgA/(g/L)IgM/(g/L)IgG/(g/L)IFN-γ/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-10/(ng/L)TNF-α/(ng/L)IL-1β/(ng/L)对照组0.370.813.63b620.34186.7028.08c170.32a94.28a试验1组0.430.854.52ab612.01194.0335.21b156.28a87.30a试验2组0.480.885.39a594.30204.5042.83a143.02b78.49b试验3组0.440.864.84a604.75197.8637.10b148.19b89.12aSEM0.100.481.8424.937.471.833.972.84P值0.5100.6130.0210.8360.7030.0130.0170.0352.3岩藻多糖对湖羊羔羊抗氧化指标的影响(见表4)由表4可知,与对照组相比,各试验组羔羊血清T-AOC分别提高了13.33%、22.67%、29.33%(P0.05),MDA含量分别降低了29.47%、35.44%、36.84%(P0.05);试验2组和试验3组羔羊血清SOD活性提高了28.74%、26.08%(P0.05),CAT活性提高了11.23%、21.6%(P0.05);试验2组羔羊血清GSH-Px活性显著提高了35.16%(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.17.004.T004表4岩藻多糖对湖羊羔羊血清抗氧化指标的影响项目T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)对照组0.75c42.17b2.85a210.34b4.63c试验1组0.85b47.10b2.01b253.04ab4.52c试验2组0.92a54.29a1.84b284.29a5.15b试验3组0.97a53.17a1.80b260.37ab5.63aSEM0.022.580.065.290.32P值0.0370.0140.0160.0210.0333讨论3.1岩藻多糖对湖羊羔羊生长性能的影响因断奶导致的应激可导致羔羊在断奶后的阶段生长缓慢、腹泻率升高[14]。断奶后,羔羊的养殖管理及日粮营养水平会影响后期的育肥效果,对养殖的生产效益及经济效益具有重要作用。因此,需要重视断奶羔羊的饲养管理。本研究中,使用适量岩藻多糖可促进羔羊生长,提高饲料转化率,显著降低仔猪腹泻率。本试验结果表明,在羔羊养殖阶段使用岩藻多糖可以起到替代抗生素的效果。在肉仔鸡和断奶仔猪生产中,使用岩藻多糖可以降低料重比,促进机体对日粮中营养物质的消化吸收,提高肠道中菌群丰富度,改善肠道健康[15-16]。郭广振等[17]研究发现,使用适量岩藻多糖可显著提高羔羊的试验末重、平均日增重及平均日采食量。上述研究结果与本研究结论类似。岩藻多糖提高动物生长性能、降低腹泻率的原因可能是岩藻多糖富含岩藻糖、硫酸酯、半乳糖、鼠李糖等成分,能够被动物肠道微生物降解为对机体有用的短链脂肪酸,降低了肠道pH值,不利于肠道有害菌的定植与生长,改变了肠道菌群结构比例,利于机体对日粮中养分的消化吸收,使羔羊生长性能得到改善[18]。3.2岩藻多糖对湖羊羔羊免疫指标的影响动物机体的免疫功能与体内的免疫球蛋白和细胞因子含量息息相关。IgM在动物机体发育中合成分泌最早,可预示机体受感染的程度;IgG是机体再次免疫应答的主要抗体,含量最高。细胞因子是免疫应答反应中的主要介质,包括促炎因子和抗炎因子,当机体出现炎症时,抗炎因子会大量分泌,提高机体抵抗病原菌的能力。本试验中,日粮中添加适量岩藻多糖明显提高了羔羊血清IgG含量及抗炎因子IL-10含量,显著降低了TNF-α和IL-1β含量,表明岩藻多糖能够通过调节羔羊血清中免疫球蛋白及细胞因子含量,增强机体免疫力。张磊等[19]使用适量岩藻多糖可显著提高肉兔免疫器官指数,且岩藻多糖的最适添加量为300 mg/kg。O'Shea等[20]研究发现,在日粮中添加240 mg/kg的岩藻多糖可有效降低仔猪的腹泻率,抑制促炎因子IL-6表达。郭广振等[17]研究发现,岩藻多糖能够显著提高羔羊的脾脏指数,显著提高血清IgG、IgM及IL-10含量,降低TNF-α和IL-1β含量。上述结果表明,岩藻多糖可通过促进动物机体免疫器官的发育,刺激T细胞和B细胞增殖,抑制促炎因子分泌,进而提高机体免疫功能。3.3岩藻多糖对湖羊羔羊抗氧化指标的影响动物机体因一些不适的因素(环境、日粮营养、养殖管理)会导致氧化应激,使体内氧化与抗氧化失衡,过量自由基不能及时清除时,会损伤细胞膜,进而对机体健康产生不利影响。体内抗氧化系统的抗氧化酶主要包括CAT、SOD、GSH-Px等,在保护动物机体免受氧化损伤方面起重要作用。本研究中,岩藻多糖显著提高了羔羊血清中抗氧化酶活性,降低了MDA含量,表明岩藻多糖在增强机体抗氧化性能方面起积极作用。动物机体出现应激会导致体内的氧化与抗氧化系统失衡,产生大量的自由基,但无法及时清除,从而使机体发生氧化应激反应,破坏细胞膜完整性,产生大量的脂质氧化物,损害机体健康。本研究中,岩藻多糖显著提高了羔羊血清中抗氧化酶的活性,降低了脂质氧化产物——MDA含量,表明岩藻多糖能够显著增强羔羊机体的抗氧化功能。研究发现,岩藻多糖可显著提高羔羊血清中及小肠中抗氧化酶活性,增强血清及小肠的抗氧化功能[17,21]。岩藻多糖提高动物机体的抗氧化功能可能作用机制为:岩藻多糖与能够形成产生自由基的金属离子络合,间接抑制自由基的产生;岩藻多糖通过提高抗氧化酶活性,提高清除自由基能力[22-23]。4结论本试验中,在湖羊羔羊养殖生产中使用一定剂量的岩藻多糖可促进羔羊生长,提高饲料转化率,降低羔羊腹泻率,提高羔羊生长性能,提高羔羊免疫功能,增强羔羊的抗氧化性能。本试验条件下,湖羊羔羊生产中岩藻多糖的最适添加量为400 mg/kg。
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