复方中草药作为新型绿色添加剂广泛应用于畜禽生产。研究表明，复方中草药添加剂在提高动物生产性能、促进营养物质消化代谢和调节肠道菌群结构等方面具有良好效果[1-3]。本课题组前期使用10 g/(头·d)复方中草药饲喂生茸期梅花鹿，发现可显著提高鹿茸产量[4]。本试验在原有复方中草药组成及添加剂量的基础上，进一步从营养物质表观消化率、直肠菌群结构等方面研究复方中草药添加剂对育成期梅花鹿生产性能的影响，为复方中草药在梅花鹿生产实践中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复方中草药由黄芪、当归、人参、枸杞、益母草、五味子、淫羊藿等按一定比例组成，购自安徽亳州中药材市场。1.2试验地点本试验在长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站进行。1.3试验设计选取1岁龄、体重（55.75±0.75）kg、健康雄性梅花鹿12头，随机分为2组，每组6个重复，每个重复1头鹿。对照组（YC组）梅花鹿饲喂基础日粮，试验组（YT组）梅花鹿饲喂添加10 g/(头·d)复方中草药的基础日粮。预试期7 d，试验期60 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米42.02干物质/%88.83青贮秸秆21.76有机物/%79.12棕榈粕13.67粗蛋白质/%14.83酒糟蛋白8.75粗脂肪/%3.10豆粕6.56钙/%0.75苜蓿粉5.47磷/%0.26预混料1.10中性洗涤纤维/%45.31食盐0.67酸性洗涤纤维/%12.59总能/(MJ/kg)16.04注：1.预混料为每千克日粮提供：MgO 0.083 g、ZnSO4·H2O 0.039 6 g、MnSO4·H2O 0.047 3 g、FeSO4·H2O 0.058 3 g、Na2SeO3 0.034 g、VA 532.4 IU、VD3 546.48 IU、VE 0.911 IU、VK3 0.253 mg、VB1 0.101 mg、VB2 0.759 mg、VB12 0.002 mg、叶酸0.025 3 mg、烟酸1.782 mg、泛酸1.265 mg、CaHPO4 5.687 mg、CaCO3 5.027 mg。2.营养水平均为实测值。1.4饲养管理梅花鹿按照养殖场统一饲养模式管理，每天4：30和15：30定量饲喂，自由饮水。1.5测定指标及方法1.5.1生产性能试验结束，锯茸后使用电子秤称量茸重。1.5.2营养物质表观消化率试验结束前3 d连续收集粪样，每日4：00~5：00在每个鹿圈定点收集粪样，每圈舍定点6个，每个定点采集100 g粪样。去除明显杂质，将收集的粪样分成两份。1份喷洒10%稀硫酸固氮，65 ℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，制成的风干样品测定粗蛋白含量；另一份85 ℃烘箱内灭菌2 h，65 ℃烘干恒重，粉碎，过18目筛，测定纤维含量。饲料及粪样营养物质含量参考张丽英《饲料分析及饲料质量检测技术》[5]测定。营养物质表观消化率=100%-(100%×A/A1×B1/B)(1)式中：A为日粮中2 mol/L盐酸不溶灰分百分含量，A1为粪中2 mol/L盐酸不溶灰分百分含量，B1为粪中某营养物质百分含量，B为日粮中某营养物质百分含量。1.5.3粪便微生物试验最后1 d，晨饲前对梅花鹿进行颈静脉麻醉，采取的梅花鹿直肠末端粪便样本放入液氮保存。将直肠粪便样本送至北京诺禾致源生物信息科技有限公司进行16S rDNA高通量测序。利用Uparse软件进行OTU聚类，Qiime软件计算α-多样性指数。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 26.0软件进行独立样本t检验。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复方中草药对育成期梅花鹿生产性能的影响（见表2）由表2可知，与YC组相比，YT组梅花鹿茸重显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.T002表2复方中草药对育成期梅花鹿生产性能的影响项目YC组YT组P值茸重66.68±4.25b95.66±4.83a0.002注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05）。g2.2复方中草药对育成期梅花鹿营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，与YC组相比，YT组梅花鹿粗蛋白质、粗脂肪、有机物、干物质的表观消化率显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.T003表3复方中草药对育成期梅花鹿营养物质表观消化率的影响项目粗蛋白质粗脂肪中性洗涤纤维酸性洗涤纤维有机物干物质P值0.0250.0160.0950.3270.0070.049YC组83.45±0.51b88.67±1.09b79.21±1.1059.18±1.7082.28±0.27b80.40±0.50bYT组85.05±0.34a92.48±0.94a77.04±0.4357.11±1.1783.80±0.33a81.77±0.35a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%2.3复方中草药对育成期梅花鹿直肠菌群结构的影响（见表4、图1~图4）由表4可知，两组Shannon指数、Simpson指数、Chao1指数、ACE指数及覆盖率差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.T004表4复方中草药对育成期梅花鹿直肠菌群α-多样性的影响项目Shannon指数Simpson指数Chao1指数ACE指数覆盖率P值0.6990.9170.5080.3580.207YC组8.75±0.080.99±0.002 411.71±63.902 499.73±53.860.99±0.00YT组8.63±0.260.99±0.002 315.81±122.632 359.32±128.810.99±0.00本研究共收集到10个直肠粪便样本。由图1可知，基于97%相似度聚类后得到4 688个OTUs，YC组独有OTUs为872个，YT组独有OTUs为1 147个。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.F001图1OTU Venn图由图2可知，主坐标分析（PCoA）显示两组之间菌群组成存在显著差异，表明日粮添加复方中草药对育成期梅花鹿直肠的菌群组成具有一定的影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.F002图2主坐标分析由图3、图4可知，两组优势菌门为厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）。其中YT组的拟杆菌门显著高于YC组（P0.05），厚壁菌门显著低于YC组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.F003图3育成期梅花鹿直肠菌群门水平相对丰度10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.013.F004图4育成期梅花鹿直肠菌群属水平相对丰度属水平上，两组中相对丰度较高的细菌分别为杆菌属瘤胃球菌科_UCG-005（Ruminococcaceae_UCG-005）、理研菌科RC9（Rikenellaceae_RC9）、拟杆菌（Bacteroides）、另枝菌属（Alistipes）、克里斯滕菌属（Christensenellaceae_R-7）和Monoglobus。与YC组相比，YT组的理研菌科RC9显著提高（P0.05），瘤胃球菌科_UCG-005显著降低（P0.05）。YC组和YT组的直肠菌群在其他属水平上无明显区别。3讨论3.1复方中草药对育成期梅花鹿生产性能的影响鹿茸产量是梅花鹿生产性能的重要体现，也是决定经济效益的重要因素。研究表明，日粮中添加复方中草药能够显著提高梅花鹿鹿产茸量[6-7]。本试验结果表明，日粮添加复方中草药提高了育成期梅花鹿茸重。原因可能是中草药中含有丰富的营养物质，能够供给梅花鹿自身所需营养，还可提供鹿茸生长所需的一部分营养，进而促进鹿茸生长。也可能是复方中草药能够促进动物胃肠道消化液的分泌，提高胃脂肪酶和蛋白酶的活性，提高饲料的转化率，促进动物生长，进而促进鹿茸生长。关于复方中草药促进鹿茸生长的机制仍需进一步研究。3.2复方中草药对育成期梅花鹿营养物质表观消化率的影响营养物质表观消化率与动物的生长密切相关[8]。动物对日粮营养物质表观消化率越高，其生长性能越好[9]。本试验中，添加复方中草药育成期梅花鹿的粗蛋白质、粗脂肪、有机物和干物质表观消化率均显著提高，可能是因为复方中草药中的活性成分能够使日粮中的营养物质更好地被消化吸收和利用[10]。此外，也可能由于经粉碎中草药中的有效成分得到更好地释放，提高了中草药中有效成分的利用率，从而促进梅花鹿机体对饲料中营养物质的消化与吸收。3.3复方中草药对育成期梅花鹿直肠菌群结构的影响肠道菌群对宿主物质代谢、营养吸收、免疫调节和保护屏障等方面具有重要作用[11]。研究表明，添加复方中草药可改善肉鸡[12]、仔猪[13]、宠物犬[14]、獭兔[15]和小鼠[16]肠道菌群多样性。前人在梅花鹿[17]、白唇鹿[18]、驯鹿[19]等鹿科动物粪便中检测优势菌门为厚壁菌门和拟杆菌门。本试验结果与上述结论相似，表明直肠细菌与粪便细菌在优势细菌门一致。刘成武等[20]研究发现，复方中草药能够提高幼犬粪便中门水平上梭杆菌门、变形菌门和属水平上梭形杆菌属、乳酸杆菌属和副萨特氏菌的相对丰度。本试验中，日粮添加复方中草药提高了育成期梅花鹿直肠中门水平上拟杆菌门和属水平上理研菌科RC9的相对丰度，与上述研究结果不同，造成差异的原因可能与日粮结构、中草药组成及动物种类不同有关。拟杆菌门能够促进饲料碳水化合物和蛋白质的降解和胃肠道免疫系统的发育[21]。理研菌科菌属对维护肠道健康具有重要作用[22]。本试验结果表明，日粮添加复方中草药能够改善育成期梅花鹿直肠菌群结构，促进肠道健康发育。4结论本试验条件下，日粮添加复方中草药可以提高育成期梅花鹿的生产性能和营养物质的表观消化率，提高直肠拟杆菌门和理研菌科RC9的相对丰度。