2021年我国进口大豆高达8 989万t，巨大的蛋白质饲料消耗量加剧了蛋白质饲料资源紧缺的情况[1]。此外，我国自2020年7月1日起实施饲料端禁抗，因此拓宽猪饲料的来源、提高猪饲料蛋白质的利用效率、增强猪的抗病能力及降低饲料成本是畜牧生产面临的挑战。微生态制剂发酵作用可显著提高基础日粮营养物质的消化率，显著改善猪肠道健康，降低腹泻率，其提高仔猪生长性能的效果相当于或优于添加金霉素的日粮[2]。微生态制剂还能够降低非常规生物饲料的抗营养因子，提高非常规生物饲料的蛋白质水平和饲用价值[3]。我国非常规饲料资源丰富，年产近40亿t[4]，且收购成本低。微生态制剂对非常规饲料的发酵作用可提高饲料资源的利用率，降低饲料成本。但微生态制剂对不同类型及组合的非常规饲料的发酵作用不同，非常规饲料的饲用价值也不同。本研究以基础日粮为对照，以芒果渣及大蒜皮为饲料原料，采用微生物制剂对基础日粮与非常规饲料组成的日粮进行发酵，研究不同饲料组合的非常规发酵饲料对猪生长状况及抗病效果的影响，以寻找最佳的非常规发酵饲料组合。1材料与方法1.1试验动物试验在广西畜牧所规模化养殖场进行。随机选取体重相近、3个月左右的健康的“长白×大白”育肥猪48头，平均体重（44.97±6.15）kg，平均分配到4组栏舍中。所有试验猪出生当天注射一剂PR Bartha-K61弱毒株，注射6 d后产生免疫，免疫期为12个月；出生第7 d注射一剂CSFV兔化弱毒株（CVCC AV1412），注射4 d后产生免疫，免疫期为12个月。以上两种疫苗均由浙江诗华诺倍威生物技术有限公司生产。1.2试验设计试验将48头育肥猪随机分为4组，每组12个重复，每个重复1头猪。按照美国NRC（1998）猪的营养标准，以常规饲料原料玉米、豆粕、鱼粉、麸皮与非常规饲料鱼露、大蒜皮、芒果皮为原料，配制4种不同组合的日粮。试验组取30%原料进行发酵，试验B组发酵组成为3%豆粕＋10%玉米＋10%鱼露＋3%大蒜皮＋4%预混料，试验C组发酵料组成为3%豆粕＋11%玉米＋12%芒果皮＋4%预混料，D组发酵料组成为15%玉米＋11%芒果皮＋4%预混料。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.19.006.T001表1试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组试验B组试验C组试验D组原料组成/%基础日粮（70%）玉米69535147豆粕23171822鱼粉1011麸皮3000预混料4000发酵料（30%）豆粕0330玉米0101115鱼露01000芒果皮001211大蒜皮0300预混料0444合计100100100100营养水平消化能/(MJ/kg)14.012.412.512.6干物质/%88.384.183.384.1粗蛋白质/%17.218.516.816.6粗脂肪/%4.12.52.62.2粗纤维/%3.23.63.03.8粗灰分/%5.96.25.85.7总磷/%0.540.590.440.48钙/(g/kg)10.012.010.09.4无氮浸出物/%57.953.355.155.8注：1.每千克预混料为日粮提供：VA 1.62~4.80 mg、VD3 0.031 2~0.125 0 mg、VE 24.8 mg、VK3 2 mg、VB1 2 mg、VB2 2.2 mg、VB6 2.2 mg、VB12 0.024 mg、烟酸 22.8 mg、D-泛酸 13.4 mg、叶酸0.8 mg、生物素0.12 mg、抗氧化剂0.16 mg、食盐2.4~4.4 g、水1 g、Fe 0.12~0.52 g、Cu 0.052~0.2 g、Mn 0.04~0.15 g、Zn 0.048~0.15 g、I 0.8~10 mg、Se 0.2~0.5 mg、Ca 4.8~8.4 g，P 0.8~2.8 g。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。试验按表1发酵料的组成及配比，将非常规饲料（鱼露、大蒜皮、芒果皮）与玉米、豆粕混合，并按照25 g/kg混合料比例加入发酵菌剂，混匀，置于密闭发酵罐发酵15~20 d，制成3种非常规发酵饲料。发酵后与70%的常规日粮混合。本试验使用的鱼露由失去市场价值的全鱼或鱼加工剩余部分磨成浆后制成。与鱼粉不同，鱼露不去油脂，水分含量高，加工工艺简单。芒果皮磨成浆后使用，大蒜皮粉碎后使用。发酵菌为活力99增香青贮微贮剂（200 g/包，宜春微生物强微生物科技有限公司），主要菌种有产朊假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌，其中各菌浓度为产朊假丝酵母菌≥40×108 CFU/g，枯草芽孢杆菌≥40×108 CFU/g，乳酸片球菌≥20×108 CFU/g。1.3饲养管理对照组饲料直接饲喂，各试验组饲料蒸煮消毒60 min，放凉后饲喂。所有组猪均自由采食，并通过饮水定期添加复合维生素。预饲期7 d，正式试验期30 d。试验结束后，统计每组的采食量、增重，采集血液样本。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始及结束，各组猪空腹称重，统计采食量、增重，计算料重比、饲料增重成本。料重比=每头猪全期采食量×饲料干物质含量/每头猪全期增重(1)饲料增重成本=每头猪全期采食量×饲料干物质含量×每千克饲料价格(2)1.4.2血清生化指标试验结束，空腹抽取各组猪前腔静脉血10 mL，室温静置30 min，4 ℃、2 500 r/min离心15 min取上清检测血清生化指标及抗体水平。血清生化指标包括：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、乳酸脱氢酶（LDH）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、葡萄糖（GLU）。血清生化指标均采用迈瑞BS2000M仪器及配套试剂盒检测。1.4.3血清抗体水平抗体指标包括：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS）抗体、猪瘟病毒（CSFV）抗体、猪伪狂犬病毒gB（PR-gB）抗体、猪伪狂犬病毒gE（PR-gE）抗体、猪圆环病毒（PCVD）抗体。抗体检测试剂盒均由河南猪拱门生物科技有限公司生产。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 16.0软件Means对基础日粮与3种非常规发酵饲料对猪生长指标及血清生化指标和抗体水平进行均值方差分析，Independent-Sample T test模块进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.13种非常规发酵饲料对育肥猪生长性能及饲料成本的影响（见表2）由表2可知，非常规发酵料组育肥猪的采食量均高于对照组，其中，试验B组、试验C组、试验D组的采食量分别提高了14.49%、5.65%、35.94%，且试验B组和试验D组的采食量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.19.006.T002表23种非常规发酵饲料对育肥猪生长性能及饲料成本的影响组别初重/kg末重/kg增重/(kg/头)采食量/kg料重比日粮价格/(元/kg)饲料增重成本/(元/kg)对照组46.55±4.0972.75±6.8726.20±3.52Aa54.09b2.062.905.99试验B组44.18±6.1764.79±7.7020.61±3.61Bb58.99a2.862.527.21试验C组43.20±4.9466.83±7.5423.63±3.43ABab53.92ab2.282.545.80试验D组46.83±6.4867.92±8.8121.09±3.24Bb70.04a3.322.578.53注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4与此同。各非常规发酵料组增重均低于对照组，试验B组、试验C组、试验D组分别降低了21.34%、9.81%、19.50%，且试验B组和试验D组增重极显著低于对照组（P0.01）。各非常规发酵料组料重比均高于对照组，其中试验B组和试验D组的料重比分别比对照组高18.85%和61.17%。根据试验同期的市场价格，对照组、试验B组、试验C组、试验D组日粮的价格分别为2.90、2.52、2.54、2.57元/kg，据此计算得饲料增重成本分别为5.99、7.21、5.80、8.53元/kg，试验B组和试验D组饲料增重成本分别比对照组高20.37%和42.40%，试验C组饲料增重成本比对照组降低3.17%。2.23种非常规发酵饲料对育肥猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验B组猪血清TP、TC、TG含量显著升高（P0.05），LDH活性、LDL-C含量极显著升高（P0.01）；试验D组HDL-C含量显著降低（P0.05），LDL-C含量显著升高（P0.05）。与试验B组相比，试验C组TC、LDL-C含量显著降低（P0.05），LDH活性、TG含量极显著降低（P0.01）；试验D组TP、ALB、GLB、TG的含量及LDH活性显著降低（P0.05）。与试验C组相比，试验D组HDL-C含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.19.006.T003表33种非常规发酵饲料对育肥猪血清生化指标的影响项目对照组试验B组试验C组试验D组TP/(g/L)52.93±6.20b58.29±2.92a55.94±6.64ab51.77±7.34bALB/(g/L)36.23±4.01ab36.82±1.27a35.10±3.57ab33.42±4.34bGLB/(g/L)16.69±2.84ab21.48±2.09a20.84±3.53ab18.35±4.19bALB/GLB2.171.711.681.82ALT/(U/L)53.83±13.0961.68±13.1261.98±13.7153.54±13.17AST/(U/L)30.03±6.9050.29±36.7032.15±7.1539.01±13.71ALP/(U/L)204.42±40.64210.05±29.89228.81±57.75193.92±41.86LDH/(U/L)531.43±81.88Bbc756.14±192.28Aa543.18±83.85Bbc611.73±115.33ABbTC/(mmol/L)2.04±0.35b2.65±0.67a2.19±0.36b2.21±0.42abTG/(mmol/L)0.23±0.06ABb0.34±0.12Aa0.22±0.07Bc0.23±0.10ABbHDL-C/(mmol/L)0.90±0.14a0.89±0.14ab0.90±0.11a0.80±0.10bLDL-C/(mmol/L)1.00±0.20Bc1.54±0.50Aa1.13±0.23ABbc1.25±0.3ABabGLU/(mmol/L)4.78±0.415.12±0.784.88±0.564.61±0.64注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.33种非常规发酵饲料对育肥猪血清抗体水平的影响（见表4）由表4可知，各组间的CSFV抗体水平差异均不显著（P0.05），非常规发酵料组CSFV抗体水平均达到阳性水平。与对照组相比，试验D组PR-gB抗体水平显著升高（P0.05），且达到阳性水平。试验B组PR-gB抗体水平显著高于试验C组（P0.05），极显著低于试验D组（P0.01）。试验C组PR-gB抗体水平极显著低于试验D组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.19.006.T004表43种非常规发酵饲料对育肥猪血清抗体水平的影响组别CSFVPR-gBPR-gEPRRSPCVD对照组2.92±0.13－2.93±0.13Bbc－2.80±0.03Aa－1.07±0.69ABab－2.59±0.53Aa－试验B组3.02±0.32＋2.91±0.04Bb－2.64±0.08Bb－0.57±0.68Bb－1.77±0.18Bb－试验C组3.03±0.12＋2.86±0.03Bc－2.78±0.05Aa－0.96±0.87ABab－1.80±0.94ABab－试验D组3.10±0.17＋3.49±0.22Aa＋2.77±0.05Aa－1.60±0.36Aa－2.20±1.36ABab－注：“-”表示抗体水平为阴性，“＋”表示抗体水平为阳性。试验B组血清PR-gE抗体、PRRS抗体和PCVD抗体水平在所有组别中最低，且PR-gE抗体和PCVD抗体水平极显著低于对照组（P0.01）。试验C组和试验D组血清PR-gE抗体、PRRS抗体和PCVD抗体水平与对照组差异不显著（P0.05）。试验B组血清PR-gE抗体水平极显著低于试验C组和试验D组（P0.01），PRRS抗体水平极显著低于试验D组（P0.01）。各组野毒抗体水平均为阴性水平。3讨论3.13种非常规发酵饲料对育肥猪生长性能及饲料成本的影响猪的生长性能与饲料的来源、粗蛋白质的吸收效率、物理结构、化学成分等因素关系密切[5-6]。研究表明，同一水平的蛋白质来源不同，仔猪的生长性能、腹泻率和蛋白质的表观消化率也不同[7]。本研究中，在饲料蛋白质水平相近的情况下，不同组合非常规发酵饲料对猪的生长性能和饲料成本的影响差异显著，非常规发酵饲料的生长效果均低于基础日粮。对照组的日粮组合是近年养猪行业常用的优质蛋白质源组合，其营养组成接近猪的营养需求，易消化吸收，但成本较高。非常规发酵饲料组使用的鱼露、芒果皮和大蒜皮的营养价值远低于对照组，但成本较低。鱼露与鱼粉成分相同，但制作方式不同。鱼露由全鱼粉碎发酵而成，不去除油脂和水分，加工工艺简单，制作成本低。鱼粉则是由全鱼粉碎去油脂而成，水分含量低，加工工艺复杂，制作成本高。本试验中，试验B组的日粮蛋白质水平比对照组高1.3%，但增重却极显著低于对照组，表明猪对鱼露蛋白质的消化吸收效果低于鱼粉。由此可见，同种饲料原料的加工方式不同，猪对其蛋白质利用效率不同，其营养价值也不相同[8-9]。此外，本试验中以芒果皮为主发酵饲料的试验C组和试验D组蛋白质水平略低于以鱼露为主发酵的试验B组，但猪的增重却高于试验B组。芒果皮蛋白质含量较低，纤维含量较高，且含有多种抗营养因子，其饲养效果比基础日粮差，但收购成本低，且经发酵的饲养效果好于鱼露。可见，本试验采用的复合菌剂对植物饲料源的发酵效果好于动物饲料源，日粮组成及加工方式比蛋白质水平对动物的生产更重要。微生物发酵作用可改变饲料的分子结构，将饲料中高分子蛋白质转变为低分子蛋白质[10]，显著提高低分子肽的含量，提高饲料的营养价值[11-12]。但微生物发酵的影响因素很多，原料的碳氮比、能量及孔隙度均可影响微生物的发酵效果[13]。适当的原料发酵组合才能够为微生物提供最优的发酵条件，得到营养价值更高的发酵饲料[8]。本研究中，试验C组和试验D组日粮原料组合一致，但发酵组合不同，对猪的生长效果也不同。试验C组的发酵组合的育肥猪的生长效果和成本效益远高于试验D组，且其增重效果已经接近对照组，饲料成本比对照组低，可能是因为试验C组的发酵组合中的碳氮比更接近微生物的需求，提供的营养更全面。综上所述，采用不同发酵组合的日粮，对育肥猪的生长和成本效益也不同，且微生物发酵可提高非常规饲料的营养价值。试验C组的发酵组合可作为对照组日粮的替代配方，芒果皮可作为育肥猪日粮的蛋白质来源。3.23种非常规发酵饲料对育肥猪血清生化指标的影响饲料营养的消化与吸收离不开血液运输。血清生化指标的变化能够直接反映动物机体的营养及健康状况[14]。血清TP是ALB和GLB的总和，其含量与动物代谢水平和免疫力呈正相关[15-16]。ALB/GLB值与机体免疫功能呈负相关[17]。适度高水平的TP、ALB和GLB可增强仔猪抵抗应激的能力，且不影响仔猪的生长性能；但当ALB和GLB异常升高或降低时，猪的生长性能会下降，并出现病态反应。血清ALP主要来自动物肝脏与骨骼，高活性的ALP可促进动物体内蛋白质、脂肪的合成，提高增重[18]。ALT与AST的活性可反映动物肝脏功能状况及抗应激能力[19]。TC含量反映体内脂质代谢的状况。HDL-C能够清除组织细胞中的胆固醇，确保体内胆固醇浓度稳定。TG含量异常升高表明脂蛋白代谢异常。本试验中，试验B组TP含量显著高于对照组。根据血清TP的含量，试验B组的增重应高于对照组，但其实际增重却极显著低于对照组。且试验B组的ALB/GLB值低于对照组，LDH活性及TC、TG、LDH-C的含量均高于对照组，表明试验B组的蛋白质更多用于免疫应激和脂肪合成。日粮中脂肪和蛋白质含量过多会提高血清脂肪含量，而在猪饲料中添加大蒜素可明显降低腹泻率[20]。可见，试验B组未去脂肪的鱼露促进了育肥猪体内脂肪的合成，而蒜皮提高了育肥猪的免疫能力。试验C组血清各项指标均与对照组差异不显著，可见试验C组饲料组合对育肥猪生长无不利影响，是对照组日粮很好的替代配方。试验D组HDL-C含量显著低于对照组，LDH-C含量显著高于对照组，其他指标差异均不显著，可见试验D组饲料组合对猪生长无有害影响，但生长效果低于对照组。各非常规发酵组ALT、AST、ALP的活性及GLU含量与对照组相比差异均不显著，表明发酵组的饲料组合对猪心脏、肝脏均无有害影响。在发酵组中，试验B组血清LDH活性及TC、TG、LDH-C含量显著高于试验C组，表明试验B组的脂肪沉积高于试验C组。试验B组TP、ALB、GLB、TG的含量及LDH活性显著高于试验D组，表明试验B组的抵抗力及脂肪沉积均高于试验D组。试验C组只有HDL-C含量显著高于试验D组，表明试验C组的脂肪沉积高于对照组。综上可知，非常规发酵饲料对育肥猪的健康无有害影响，试验B组的抗病力较强及脂肪沉积量最高，其次是对照组和试验C组，最后是试验D组。3.33种非常规发酵饲料对育肥猪抗体水平的影响产朊假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌多种代谢产物是良好的免疫激活剂，能够有效地提高机体巨噬细胞和干扰素的活性，激活机体免疫系统，从而增强家畜的免疫功能和抗病能力。研究表明，饲喂益生菌可提高猪体内免疫球蛋白和细胞因子等免疫指标的含量，能够有效缓解仔猪的应激与免疫功能下降，增强猪对致病因子的抵抗[21-22]。在断乳仔猪的基础日粮中添加枯草芽袍杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母和产肮假丝酵母复合菌剂，在饲喂第60及第120 d，CSFV的抗体水平均显著高于未添加组[23]。本研究中，非常规发酵饲料组使用产朊假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸片球菌为主的复合菌剂发酵，非常规发酵饲料组所有试验育肥猪在试验期内均健康，无腹泻情况，可见3种菌的复合菌有利于提高猪的抵抗力。此外，微生物的繁殖和代谢需要合适的营养条件，发酵底物原料组合不同，微生物的生长和代谢活动也不同，进而对机体免疫和疾病产生不同的影响。本试验所选取的试验猪未注射PR-gE抗体、PRRS抗体、PCVD抗体疫苗，而其从母猪初乳获得的PR-gE抗体、PRRS抗体、PCVD抗体均已超过母源抗体的保护期，其自然抗体水平均处于较低水平。饲喂非常规发酵饲料之后，3种非常规发酵饲料对PRRS抗体均无影响，但试验B组和试验D组PCVD抗体水平降低，表明降低了猪感染PCVD的风险。而试验B组PR-gE抗体、PRRS抗体、PCVD抗体水平在所有组中最低，且PR-gE和PCVD野毒抗体水平极显著低于对照组，表明试验B组饲料对野毒的抵抗效果最好。对于疫苗抗体，不同的发酵组合产生的影响也不同。仔猪从已免疫的母猪初乳中获得的母源抗体可维持60 d，随着仔猪日龄增长，母源抗体呈缓慢下降趋势[24]。猪接受疫苗免疫后，抗体水平持续上升，一段时间之后，抗体水平开始逐渐下降，直至失去保护效果。本研究中，试验育肥猪注射了CSFV和PR疫苗，试验期内处于疫苗免疫保护期内，抗体水平处于开始下降的时段。饲喂非常规发酵饲料之后，非常规发酵饲料所有组别CSFV抗体水平均升高，且达到阳性水平，疫苗仍具有保护效果。而PR-gB抗体除试验D组抗体效价提高外，其余两组的效价均降低，可见3种非常规发酵饲料对CSFV抗体均具有良好的增强作用，且试验B组和试验C组增强作用更高，与前人的研究结果一致[25]。试验D组对PR抗体具有增强作用。综上所述，试验B组的发酵组合更有利于提高育肥猪疫苗抗体效价和抗病能力，大蒜皮有利于提高育肥猪的抗病能力。4结论本研究结果表明，以鱼露、芒果皮、大蒜皮配制的3种非常规发酵饲料均可应用于生猪养殖，对生猪健康无不良影响。其中，试验C组生产效果、成本效益最好，试验B组抗病效果最好。综上，试验C组的发酵组合可作为基础日粮的替代配方，芒果皮可作为育肥猪新的饲料来源，发酵大蒜皮可提高猪的抗病能力。