中药饮片和中成药生产过程中会产生大量的副产物和废弃物,如茎叶、药渣、沉淀物、清洗废水等。传统的焚烧、填埋和堆放的处理方式已造成严重的环境污染和资源浪费[1]。因此,科学合理地利用中药生产副产物,实现废弃物绿色循环利用,是实现中药产业可持续性发展的必然要求,也是目前众多学者共同关注的焦点问题。目前,中药废弃物资源化利用途径包括用于栽培基质、废水处理、催化裂解制取燃油、制造生物乙醇以及禽畜的饲料生产等[2]。中药废弃物不仅含有大量碳水化合物、粗脂肪、粗蛋白、矿物质、氨基酸等营养物质,还包含未提取完全的药用活性成分,包括黄酮类、萜类、甾类及苷类等。生血宝合剂是由何首乌、女贞子、桑椹、墨旱莲、白芍、黄芪、狗脊等七味中药材制成的补益类中成药,临床上常用于治疗贫血[3]。在制药过程中,药物提取液由于性质不稳定会产生大量废弃的沉淀物(SXBS),目前尚缺乏SXBS的有效利用途径。本研究对SXBS进行营养成分和小分子活性成分分析,并以新西兰兔为试验对象,考察日粮中添加SXBS对兔生长性能、消化功能、肠道菌群等方面的影响,考察SXBS的饲用安全性,为进一步开发为禽畜饲料原料或饲料添加剂提供参考。1材料与方法1.1仪器与材料1.1.1试验仪器超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱仪(AB SCIEX公司)、十万分之一电子天平(Sartorius科学仪器有限公司)、TQ-200高速多功能粉碎机(上海市天祺盛世科技有限公司)、Milli-Q超纯水制备系统(Millipore公司)、YZ-160饲料颗粒机(安徽扬子工业科技有限公司)、YS6060台式分光测色仪(深圳市三恩时科技有限公司)、S210 pH计(梅特勒-托利多仪器有限公司)、BS-330E型全自动生化分析仪(迈瑞医疗国际有限公司)、BC-5300Vet血液细胞分析仪(迈瑞医疗国际有限公司)。1.1.2试验材料SXBS(清华德人西安幸福制药有限公司)、苜蓿草(新沂市乐泽宠物用品有限公司)、燕麦(河北西麦食品有限公司)、PK0807T3兔浓缩饲料(Supreme Selective公司)。兔免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒(艾莱萨生物科技(上海)有限公司);铵态氮含量检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)。1.2SXBS营养成分含量测定依照《中国药典》(2020版)中的烘干法和灼烧法对SXBS进行水分(W)和灰分(Ash)测定,计算SXBS干物质(DM)和有机物(ORG)含量。DM=(1-W)×100%(1)ORG=DM-Ash(2)SXBS粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、粗纤维(CF)含量分别依照国家标准《饲料中粗蛋白的测定》(GB/T 6432—2018)、《饲料中粗脂肪的测定》(GB/T 6433—2006)、《饲料中粗纤维的含量测定》(GB/T 6434—2006)中的凯氏定氮法、石油醚提取法以及过滤法进行测定。总碳水(TC)、总能量(NRG)参照国家标准《预包装食品营养标签通则》(GB 28050—2011)进行计算。TC=DM%-Ash%-CP%-CFA%(3)NRG=17×CP%+37×CFA%+17×TC%(4)1.3SXBS次生代谢产物鉴定SXBS打粉后称取50 mg,加入50 mL甲醇超声提取40 min,过0.22 μm微孔滤膜,进行液-质联用分析。使用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(1.8 µm,2.1 mm 150 mm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),按梯度条件进行洗脱:0~25 min,2%~10%B;25~75 min,10.0%~24.5%B;75~77 min,24.5%~40.0%B;77~97 min,40%B;97~102 min,40%~48%B;102~132 min,48%~80%B;132~133 min,80.00%~80.03%B;133~138 min,80.03%~2.00%B;138~140 min,2%B。进样5 μL,流速0.3 mL/min。质谱条件:AB SCIEX 5600+ QTOF三重四级杆质谱仪,采用电喷雾离子源、正负离子模式,开启信息依赖采集(IDA,默认采集前10个最高峰度母离子)、动态背景扣除(DBS,间隔30 s)和高灵敏度模式采集数据。1.4动物试验1.4.1饲料制备与试验设计预混浓缩饲料、苜蓿草、燕麦、SXBS分别打成粗粉混匀,制成4 mm直径的圆柱形颗粒料,晾干。将12只180日龄新西兰兔随机分为4组,每组3个重复,每个重复1只兔。预试期7 d,试验期60 d。每只兔每天分4次定量饲喂共90 g颗粒料,自由饮水。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T001表1试验日粮组成及营养水平项目SXBSc(对照组)SXBSlSXBSmSXBSh原料组成/%浓缩饲料70.070.070.070.0苜蓿25.020.020.020.0燕麦5.07.55.00SXBS02.55.010.0合计100.0100.0100.0100.0营养水平DM/%90.3292.9592.4098.49ORG/%85.1187.4086.6091.86TC/%66.8664.2466.9967.61CF/%16.5017.3016.7018.00CP/%13.8514.0813.8813.85EE/%4.404.404.203.60NRG/(MJ/kg)15.3515.7415.5616.341.4.2测定指标及方法1.4.2.1生长性能试验结束测定每只兔子初重、末重,记录采食量,计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(5)平均日采食量=总采食量/试验天数(6)料重比=平均日采食量/平均日增重(7)1.4.2.2屠宰性能试验结束以戊巴比妥钠麻醉动物,取血液以及各器官组织进行分析。称量兔子去皮、头、四肢及内脏后的重量,计算屠宰率[4]。取兔背腰最长肌约3.0 g,称重,使用胶线将肌肉竖直悬挂在纸杯中,密封,4 ℃冰箱冷藏24 h,使用吸水纸拭去样品表面渗出的液体,称重,计算滴水损失率[5]。称取背腰最长肌1.0 g,加入5.0 mL去离子水,匀浆,使用pH测定仪测定pH值。分别在屠宰后45 min和24 h制样并测定肉样pH值;利用肉色测定仪在暗室中测定肉样的红度值、黄度值和亮度值[6]。1.4.2.3营养物质表观消化率采用全粪法测定营养物质消化率(AD)[7]:在试验30 d连续6 d收集全部粪便,以10%盐酸固氮,-20 ℃保存,合并6 d粪便65 ℃烘干至恒重,测定DM、ORG、TC、CP、EE及CF含量,计算AD。AD=[(M×y)-(N×z)]/(M×y)×100%(8)式中:M为6 d内摄入饲料总质量,y为饲料中各营养物质含量,N为6 d内粪便总质量,z为粪便中各营养物质含量。1.4.2.4肠道菌群16S rDNA和ITS1 DNA测序收集兔新鲜粪便并转移至-80 ℃保存。提取粪便总DNA,利用1%琼脂糖凝胶电泳检测抽提的基因组DNA。对16S V3~V4区和ITS1区进行PCR扩增,使用Agencourt AMPure XP试剂盒纯化后建立Miseq文库,在Illumina MiSeq平台进行测序[8]。下机数据利用Trimm有机物含量atic软件进行质控过滤,Flash、Pear进行双端拼接,UPARSE软件进行聚类(相似度阈值97%)[9],得到操作分类单元(OTUs)。1.4.2.5饲料安全性测定饲喂周期结束后,取动物心、肝、脾、肺、肾等脏器,清洗并称重,计算脏器指数,以多聚甲醛固定液固定24 h,HE染色切片观察。取血,离心,制备血清进行血清生化分析,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、尿素(UREA)、血糖(GLU)、肌酐(CREA)、C-反应蛋白(CRP)、肌酸磷酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)指标。取全血测定白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、单核细胞(Mon)、嗜酸性粒细胞(Eos)、嗜碱性粒细胞(Bas)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积大小的变异系数(RDW-CV)、红细胞分布宽度(RDW-SD)、血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)和血小板压积(PCT)血常规指标。使用试剂盒测定各组新西兰兔血清IgA、IgM和IgG水平。1.5数据统计与分析采用AB SCIEX Peakview 2.2软件分析液-质联用数据,以内置的Master View 1.1.0.0模块结合中药成分数据库(library 1.0)鉴定SXBS中的小分子化学成分,匹配检索条件参考前期研究进行设定[10],采用R预言软件以OTUs和属水平丰度数据进行主成分分析(PCA)、聚类分析、热图分析,采用在线工具进行LefSe分析,以PICRUSt2软件进行宏基因组功能预测分析,以STAMP软件进行White's non-parametrict-test比较组间丰度数据并可视化作图。其他数据均采用克鲁斯卡尔-沃里斯检验进行组间比较,折线图和柱形图使用GraphPad Prism 9.0或R语言软件制作。P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1SXBS营养、功能性成分分析(见图1、表2)由图1可知,在13种饲料原料中,SXBS的DM含量和ORG含量最高,TC含量高达755.75 g/kg,高于小麦和米糠。CP含量介于玉米秸秆和玉米之间,EE仅次于豆粕,CF略低于甘薯。由聚类分析可知,SXBS整体营养物质含量与玉米秸秆和玉米较为相似。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F001图1SXBS和常规饲料营养物质含量聚类分析由表2可知,SXBS中含有黄酮类、氨基酸类、萜类、多酚类和皂苷类等药物活性成分,具有促进采食、调节肠道代谢、抗菌抗炎等多种药理作用。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T002表2SXBS功能性成分表征名称分子式类型去氢二异丁香酚C20H22O4黄酮L-色氨酸C11H12N2O2氨基酸苯丙氨酸CHNO氨基酸异贝壳杉烯酸C20H30O2二萜α-香附酮C15H22O倍半萜羟基芫花素C16H12O6黄酮常春藤皂苷元C30H48O4甾体皂苷左旋肉碱C7H15NO3氨基酸姜黄素C21H20O6多酚肌酸C4H9N3O2氨基酸2.2SXBS对新西兰兔生长性能、屠宰性能及肉色的影响(见表3~表5)由表3~表5可知,与SXBSc相比,各SXBS添加饲料组动物平均日增重、料重比、屠宰率以及肉样滴水损失率、pH值和肉色等指标均未发生明显变化。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T003表3SXBS对新西兰兔生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比SXBSc2 453.33±208.152 839.33±90.896.43±2.2090.00±0.0013.99±4.80SXBSl2 777.33±231.743 054.67±192.444.62±1.3890.00±0.0019.48±7.23SXBSm2 267.33±330.402 745.33±171.287.96±2.8190.00±0.0011.31±3.62SXBSh2 530.50±37.482 903.50±26.166.22±0.1990.00±0.0014.47±0.4410.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T004表4SXBS对新西兰兔屠宰性能的影响组别屠宰率/%滴水损失率/%pH45 min值pH24 h值SXBSc53.45±2.195.01±1.066.56±0.266.36±0.34SXBSl53.22±1.012.79±1.426.35±0.106.12±0.12SXBSm51.62±4.294.84±1.326.52±0.156.36±0.09SXBSh52.60±2.163.98±0.796.36±0.066.22±0.0910.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T005表5SXBS对新西兰兔肉色的影响组别背腰最长肌腿肌红度黄度亮度红度黄度亮度SXBSc0.61±0.197.10±0.6784.51±2.130.75±0.166.61±0.3784.61±0.50SXBSl0.85±0.186.81±0.6983.55±0.691.33±0.246.62±0.1584.23±0.34SXBSm0.45±0.255.93±0.6084.89±2.070.98±0.106.31±0.4185.04±1.74SXBSh0.39±0.146.65±1.0083.13±1.430.73±0.296.56±0.2784.55±0.342.3SXBS对新西兰兔各营养物质表观消化率的影响(见表6)由表6可知,随着SXBS添加比例的增加,各组新西兰兔的DM、ORG、TC、CF、CP、EE的AD值均未发生明显变化。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T006表6SXBS对新西兰兔营养物质表观消化率的影响组别DMORGTCCFCPEESXBSc69.06±1.9970.62±2.0067.57±2.2566.28±1.2772.56±3.4489.11±0.75SXBSl69.14±0.2370.67±0.3669.53±0.9068.38±0.3970.90±1.1786.83±1.95SXBSm68.04±1.0269.53±0.9067.04±0.8267.04±0.8271.09±1.8485.85±1.43SXBSh66.28±1.2767.54±1.0785.85±1.4366.09±1.2866.43±1.4983.26±3.87%2.4SXBS对新西兰兔肠道菌群的影响(见图2~图4)由图2可知,测序共获得1 934个细菌OTUs和343个真菌OTUs,大部分OTUs为组间共有,表明各组肠道菌群环境总体相似。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F002图2新西兰兔肠道细菌(16S)和真菌(ITS1)测序OTUs韦恩图由图3可知,根据各组细菌属水平PCA分析和聚类柱状图,SXBS各处理组细菌结构轮廓与SXBSc相比表现出微弱差异。进而采用PICRUSt2分析细菌代谢功能,发现各SXBS处理组与SXBSc相比存在显著差异,其中牛磺酸和亚牛磺酸代谢、青霉素和头孢菌素生物合成代谢通路显著增强,而含硒化合物代谢、二噁英降解、亚油酸代谢、丙酸代谢、氮代谢、半乳糖代谢等均明显减弱。图3SXBS对新西兰兔肠道细菌群落结构和代谢功能的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F3a1a.各组细菌种属PCA分析10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F3a2b.细菌种属OUT聚类分析10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F3a3c.细菌代谢功能变化肠道氮代谢主要是蛋白质或氨基酸在肠道菌群的发酵作用下转变为氨气或铵盐等含氮物质的过程,这些含氮物质随粪便排出后往往会造成严重的饲养环境污染,对人与禽畜健康造成影响。本研究进一步测定各组新西兰兔粪便中铵态氮含量,结果表明,随着SXBS添加比例增加,粪便中铵态氮含量出现减少趋势,从71 μg/g降至41 μg/g,此结果与SXBS减弱肠道菌群氮代谢功能一致。虽然SXBS对新西兰兔肠道细菌结构影响有限,但ITS1 DNA测序发现肠道真菌群落发生了明显变化。由图4可知,真菌属水平PCA-Biplot分析表明SXBSc以及各SXBS处理组之间菌群轮廓明显分离,且对样本间差异贡献最大的菌属主要为接合酵母菌属(Zygosaccharomyces)、石耳属(Umbilicaria)以及小毛盘菌属(Cistella)等。图4SXBS添加饲料对新西兰兔肠道真菌群落结构的影响10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F4a1(a)真菌属水平PCA-Biplot分析10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F4a2(b)真菌种属进化分支10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F4a3(c)真菌属水平聚类分析10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F4a4(d)鲁氏接合酵母和放射盘石耳的相对丰度聚类分析也表明SXBSc与其他各组存在明显差异。LefSe分析显示,石耳科(Umbilicariaceae)、石耳目(Umbilicariales)和茶渍纲(Lecanoromycetes)丰度在SXBSc中明显富集,而在其他各组中丰度较低。由种水平群落丰度对比可知,放射盘石耳(Umbilicaria muhlenbergii)从40%以上降低至几乎消失,鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)丰度则升高至约80%,成为丰度最高的菌种。研究表明,SXBS具有调节肠道菌群、促进肠道碳水化合物代谢等作用。2.5SXBS对新西兰兔血液指标、脏器功能的影响(见表7~表10、图5)饲用安全性是禽畜饲料长期应用的前提。本研究在60 d饲养周期的基础上,对新西兰兔进行脏器指数测定、组织病理切片观察、血清生化指标测定和血常规测定等多方面分析。由表7可知,新西兰兔心、肝、肾等脏器功能均未见明显改变。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T007表7SXBS对新西兰兔血清生化结果的影响项目SXBScSXBSlSXBSmSXBShALT/(U/L)51.5±5.042.5±9.341.5±3.440.3±6.7AST/(U/L)22.0±3.625.8±4.829.2±1.526.1±6.1ALP/(U/L)87.3±19.992.3±17.148.9±13.954.5±7.2UA/(μmol/L)25.1±1.116.5±4.626.3±0.817.6±2.9UREA/(mmol/L)9.50±0.768.47±0.877.91±0.628.02±0.52GLU/(mmol/L)6.27±1.135.81±0.936.73±1.055.33±0.78CREA/(μmol/L)140.0±17.8143.3±13.8144.0±13.2112.4±26.6CRP/(mg/L)1.4±0.40.8±0.12.2±0.10.4±0.3CK/(U/L)1 021.1±208.81 035.8±89.71 073.4±47.01 246.1±276.6LDH/(U/L)265.1±42.3358.8±57.1351.1±27.4371.2±39.0由表8~表9可知,血常规分析、血清免疫因子测定结果表明,新西兰兔血常规指标和血清免疫球蛋白水平均未受到明显干扰。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T008表8SXBS对新西兰兔血常规结果的影响项目SXBScSXBSlSXBSmSXBShWBC/(×109/L)9.85±1.488.59±1.647.50±2.598.04±1.86Neu/%29.1±4.8027.10±3.0023.70±7.5019.10±7.60Lym/%60.30±1.6056.90±9.9066.40±5.1055.50±9.20Mon/%7.40±2.109.60±0.906.60±1.807.70±1.80Eos/%1.30±0.301.60±0.501.20±0.101.30±0.60Bas/%1.90±1.403.70±1.302.10±0.402.20±0.80RBC/(×1012/L)4.87±0.085.60±0.685.40±0.574.90±0.29HGB/(g/L)111.00±1.00119.00±2.00120.00±9.00109.00±3.00HCT/%33.70±0.6035.40±1.2036.70±2.1033.70±1.30MCV/fL69.30±0.3063.60±5.4068.20±3.4068.90±2.40MCH/pg22.90±0.5021.50±2.2022.40±0.7022.20±1.20MCHC/(g/L)330.00±7.00337.00±6.00328.00±6.00322.00±7.00RDW-CV11.40±0.4011.50±0.5013.30±2.2011.40±0.40RDW-SD33.20±1.2030.90±1.5038.20±4.4033.20±0.80PLT/(×109/L)403.00±136.00401.00±204.00415.00±10.00453.00±119.00MPV/FL5.00±0.305.40±0.105.10±0.305.70±0.50PDW/%14.80±0.4015.40±0.6014.70±0.1015.40±0.80PCT/%0.202±0.0750.181±0.0570.211±0.0180.241±0.05710.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T009表9SXBS对新西兰兔血清免疫球蛋白水平的影响组别IgAIgGIgMSXBSc10.51±1.772.39±0.26243.89±65.50SXBSl10.02±0.732.54±0.28234.67±35.16SXBSm12.88±1.112.76±0.34255.78±17.21SXBSh10.59±1.942.63±0.12230.67±42.90mg/L由表10可知,SXBS对新西兰兔心、肝、脾、肺、肾等脏器指数均无显著影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.T010表10SXBS对新西兰兔脏器指数的影响组别心肝脾肺肾SXBSc1.94±0.2119.05±0.390.31±0.093.75±0.254.16±0.76SXBSl2.26±0.2819.54±1.850.35±0.083.90±0.294.38±0.53SXBSm1.88±0.1720.82±3.010.36±0.093.48±0.274.57±0.60SXBSh2.11±0.2721.56±3.090.45±0.103.88±0.174.83±0.63g/kg由图5可知,各组新西兰兔的脏器病理切片均未见异常。图5新西兰兔各脏器组织病理切片10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a1(a)心 (b) 肝10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a2(c)脾 (d) 肺10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a3(e)肾 (f) 胃10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a4(g)十二指肠(h)回肠10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a5(i)盲肠10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.18.012.F5a6(j)结肠研究表明,SXBS对新西兰兔机体各器官代谢等功能无不良影响,无明显毒害作用,安全性良好,具有较好的饲用安全性。3讨论3.1SXBS的营养价值分析发酵中药药渣作为饲料添加剂具有抗氧化、调节免疫、促生长等作用。有研究表明,在仔猪日粮中添加“十全大补”发酵药渣能够显著提高断奶仔猪生长性能和抗氧化能力,降低腹泻率[11]。在麻鸭日粮中添加人参、黄芪、当归等中药药渣发酵物可提高麻鸭产蛋水平,并延迟换羽[12]。在反刍动物养殖中,发酵中药渣可促进湖羊生长并增强其免疫功能[13]。本研究结果表明,中药制药过程中药物提取液经过放置后产生的沉淀物,除含有较多碳水化合物和脂肪之外还富含功能性小分子化学成分。生血宝合剂制备过程中提取液经过自然沉淀,其中的大量多糖等大分子物质发生聚沉,可能通过吸附、包合、改变溶液pH值等作用将部分小分子物质共同挟带到沉淀中[14]。碳水化合物是新西兰兔摄取能量的主要来源,适量的碳水化合物可维持机体血糖水平和脂质代谢水平,过量将导致肠道菌群紊乱,增加肝脏负担,降低采食量,提高死亡率。Oboh等[15]研究表明,含有85%高碳水化合物的日粮会导致高甘油三酯血症,造成肝损伤。本研究中SXBS总碳水含量为75.42%,在添加量10%以内对机体健康无影响,具有良好的饲用价值。3.2SXBR对新西兰兔生长性能、屠宰性能和营养物质表观消化率的影响在湖羊及断奶仔猪的日粮中添加中药渣可显著提高湖羊平均日增重,降低料重比[16-17]。中药渣中富含氨基酸、多糖及各类有益活性成分,具有改善肠道菌群结构,促进益生菌生长,减少病原菌数量,增强动物免疫,促进动物生长的保健功效[18]。本研究中,各试验组兔的平均日增重、料重比差异均不显著,试验期内未出现饲料剩余情况,可见新西兰兔对SXBS添加饲料适口性良好,其原因可能是中药残渣中含有具芳香气味的姜黄素等多酚类物质,改善了饲料风味,促进了动物消化液的分泌[19],从而使兔子对SXBS添加饲料进行充分利用。SXBS具有直接在饲料中添加、无需发酵处理的优势。与常规饲料相比,中药渣可调节肌内蛋白水平,增加屠宰率,改善肉品质[20]。肉样滴水损失率、pH值和肉色是衡量肉质的重要指标,动物受到一些外在刺激会产生氧化应激,降低有氧代谢水平,导致糖酵解增加,肌内脂肪沉积,表现为宰后24 h的pH值降低,滴水损失增加[21]。肉色中红度值与肌红蛋白含量呈正相关,其值越大肉色越好;黄度值与亮度值与肌红蛋白含量成反比,其值越大肉色越差[22]。由屠宰性能指标测定结果可知,各组兔的屠宰性能相差不大,可能是饲养周期较短所致。动物对营养物质的吸收消化是保证体重增长、维持机体健康的基础,营养物质表观消化率是反映饲料饲用价值的重要指标[23]。各组新西兰兔对饲料中各营养物质的表观消化率测定结果表明,SXBS对新西兰兔各营养物质的吸收消化不会产生太大影响,但各营养物质的表观消化率呈现略微降低的趋势,原因可能是由于兔子是食草动物,对碳水和脂肪的消化能力有限。有研究表明,过多的碳水和脂肪会导致兔子消化道功能紊乱[24],从而影响其他营养物质的消化吸收。但SXBS添加量较少,且SXBS对新西兰兔肠道菌群的调节作用可促进碳水吸收,可能是尽管SXBS含有较多碳水和脂肪但并未对新西兰兔各营养物质表观消化率产生较大影响的原因。3.3SXBS对新西兰兔肠道菌群的影响肠道菌群与机体消化系统、免疫系统、内分泌系统等正常运转息息相关。健康稳定的肠道菌群可减少动物疾病,提高胃肠道功能,促进营养物质吸收利用[25-27]。亚油酸、丙酸、牛磺酸、半乳糖等均与肠道内碳水化合物的吸收代谢相关。亚油酸能够促进能量摄入,调节葡萄糖水平[28];丙酸能够增强胰岛素敏感性,降低机体血液葡萄糖浓度,从而增加胰岛素刺激的葡萄糖摄取[29];牛磺酸可调节脂质代谢,减少肠道损伤并促进肠道运动和消化功能[30-31]。SXBS调节这些代谢过程与其促进新西兰兔对碳水的消化作用二者之间一致。鲁氏接合酵母是发酵工业中常用的菌种,能够产生大量淀粉酶等酶类将碳水化合物水解并代谢为多元醇类、脂类等物质[32]。SXBS增加鲁氏接合酵母菌的数量与其促进肠道碳水化合物消化代谢功能一致。3.4SXBS对新西兰兔脏器功能及血液指标的影响中药药渣在一定程度上带有药物的特殊性,其饲用安全性极为重要。由于生血宝合剂原料中含有何首乌等药材,其中的蒽醌类物质可通过抑制CYP450酶系活性产生肝毒性[33]。本研究经过60 d的饲喂周期,发现经目前的生产工艺所产生的药液沉淀物并未对新西兰兔脏器功能、组织形态和免疫功能造成明显影响,故认为其安全性良好。因此,SXBS可作为调节肠道微生态的兔饲料添加剂或饲料原料应用于家兔养殖。本研究为生血宝合剂制药过程副产物和废弃物的资源化利用提供了参考。4结论本研究对SXBS进行了成分表征,结果表明,SXBS营养价值高,富含小分子活性物质。动物试验结果表明,SXBS不影响新西兰兔生产性能及屠宰性能,且能够改善肠道菌群结构,对机体各器官代谢等功能无不良影响,安全性良好,具有潜力开发为优质的兔饲料原料或饲料添加剂。
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