国家近年出台了一系列科技伦理相关标准、意见[1-2]以提升科技伦理治理能力。试验动物科技伦理遵循“3R”原则，优化研究方案，以最大限度地提高科学效益并减少动物的痛苦。手术使动物机体产生创伤，发生应激反应。应激状态下的试验动物在不同疼痛程度下产生的试验数据不同，忽视此差异会直接影响科研质量[3]。改善术后疼痛反应与动物的术后恢复密不可分[4]，选择合适的术后镇痛药对动物福利伦理、术后恢复和科研质量具有重要意义。目前传统的镇痛药大部分是管制药物，购买困难而且有眩晕、恶心、呕吐及排尿困难、成瘾、耐受、呼吸抑制等副作用[5-8]，限制了临床中的应用，寻找副作用少、疗效确切的镇痛替代药物或方法非常重要。冰片是一种易购买的常用中药，具有开窍醒神、清热止痛、生肌的功效以及抗炎、抗菌、镇痛作用。目前冰片应用于动物术后的镇痛相关报道很少，本研究将中药冰片用于大鼠术后镇痛，了解镇痛效果及对血液生化、血常规等指标影响，为IACUC伦理审查、动物术后镇痛及临床术后镇痛用药提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物试验所用SPF级雄性SD大鼠初始体重为（375.0±24.9）g，由广东省医学实验动物中心提供[SCXK（粤）2022-0002]，饲养于屏障设施[SYXK（粤）2022-0002]。动物试验经广东省医学实验中心实验动物伦理委员会审查批准。1.1.2主要试剂中药冰片（批号：10917，龙脑含量63.2%）由福建南平青松化工有限公司提供。中药冰片4%和8%分别用于中药冰片低剂量组和高剂量组，采用75%乙醇作为溶媒进行药物配制。异氟烷（批号：20080701，深圳市瑞沃德生命科技有限公司）、乌来糖（氨基甲酸乙酯，批号：20201030，国药集团化学试剂有限公司）、M52LH溶血剂（批号2021101501，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、M-52DIFF溶血剂（批号2021090301，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、DS稀释液（批号2021110401，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、复方利多卡因乳膏（批号：220117，同方药业集团有限公司）。总胆红素试剂盒（TBIL，批号20210712）、碱性磷酸酶试剂盒（ALP，批号2021091）、尿素氮试剂盒（BUN，批号20210722）、肌酸激酶试剂盒（CK，批号20210512）均购自上海科华生物工程股份有限公司。1.1.3主要仪器BC5000全自动血细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、7020全自动生化分析仪（株式会社日立高新技术）、BS-3000A电子天平（感量0.1 g，上海友声衡器有限公司）、KDC-2046低速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）、R550lP小动物麻醉机（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）。1.2试验设计50只大鼠按体重区组随机分为假手术组、模型组、复方利多卡因乳膏组、中药冰片低剂量组、中药冰片高剂量组，每组10只。参考Brennan等[9]的方法制备足底切口痛大鼠模型，大鼠异氟烷吸入麻醉，4%~5%诱导，1%~2%维持。从足底近端0.5 cm处向趾部做一长约1 cm的切口，用眼科镊挑起足底肌肉并纵向切割，保持肌肉的起止及附着完整，丝线缝合皮肤。假手术组大鼠采用异氟烷吸入麻醉，4%~5%诱导，1%~2%维持。术后连续3 d给药，中药冰片低剂量组、中药冰片高剂量组和复方利多卡因乳膏组分别局部表面给予4%、8%中药冰片溶液（0.2 mL/只）及复方利多卡因乳膏（0.2 g/只），每天2次，单次3 s，间隔1 h。假手术组、模型组局部给予溶媒，浸润约2 cm×2 cm，术后2 h及术后1 h、2 d各1次。1.3试验方法1.3.1热板试验术前1 d，测定大鼠热痛阈值，剔除在热板上反应过激的大鼠，术后2、24、36 h各1次，测定大鼠的热痛阈值，试验时将大鼠置于（52.0±0.5）℃热板上，记录大鼠舔咬脚或跳起前在热板上的耐热时间即为大鼠的热痛阈值，设置自动终止时间为30 s。1.3.2血液生化及血常规检查试验第3 d给药1 h后，大鼠20%乌来糖麻醉后腹主动脉采血，全血进行血常规11项检测，另取血以3 000 r/min离心15 min，取血清检测TBIL、ALP、BUN、CK及钾离子（K+）、钠离子（Na+）、氯离子（Cl-）等指标。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 21.0软件进行统计分析，热痛阈值采用重复测量资料方差分析方法，LSD法进行组间比较。各组血生化和血常规使用多因素方差分析，S-N-K检验法进行组间比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1一般状态假手术组大鼠精神状态良好，毛色光滑，反应灵敏。足底切口大鼠术后0.5 h手术侧后足无运动障碍，且手术侧后足出现不愿着地及舔咬等现象。术后1 d，模型组大鼠出现竖毛、弓背、稀便及手术部位触摸敏感、回缩等现象。各给药组部分大鼠出现竖毛、弓背。术后2、3 d各组大鼠均未见明显异常。2.2中药冰片对足底切口痛大鼠热痛阈值的影响（见表1）由表1可知，术后2 h的假手术组、复方利多卡因乳膏组、中药冰片高剂量组和术后1、2 d各组的热痛阈值均显著高于模型组（P0.05），而术前各组热痛阈值与模型组相比差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.10.003.T001表1中药冰片对足底切口痛大鼠热痛阈值的影响Tab.1Effect of borneol on thermal pain threshold in plantar incisional pain rats组别术前术后2 h术后24 h术后36 h假手术组8.47±2.4011.10±2.02*9.41±1.83*9.02±2.00*模型组7.41±2.017.81±1.707.04±1.526.65±1.16复方利多卡因乳膏组8.18±1.7910.07±1.00*9.80±1.46*8.72±2.18*中药冰片低剂量组7.62±2.128.79±2.168.51±1.35*8.68±1.16*中药冰片高剂量组7.60±1.709.94±2.29 *9.32±1.04*9.45±2.22*注 ：*表示与模型组相比，同列数据差异显著（P0.05）。s2.3中药冰片对足底切口痛大鼠血清生化指标的影响（见表2）由表2可知，与模型组相比，各组大鼠血清TBIL、ALP、BUN、CK、K+、Na+、Cl-差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.10.003.T002表2中药冰片对足底切口痛大鼠血清生化指标的影响Tab.2Effect of borneol on serum biochemical indicators of plantar incisional pain rats项目假手术组模型组复方利多卡因乳膏组中药冰片低剂量组中药冰片高剂量组TBIL/(μmol/L)0.18±0.150.10±0.160.24±0.180.30±0.290.28±0.19ALP/(U/L)163.00±47.00166.00±86.00134.00±31.00156.00±40.00152.00±27.00BUN/(mmol/L)6.87±0.737.00±1.157.05±1.017.45±1.027.88±1.16CK/(U/L)1 011.00±429.001 201.00±452.00847.00±353.001 256.00±300.001 137.00±499.00K+/(mmol/L)5.17±0.325.17±0.305.32±0.435.28±0.375.16±0.39Na+/(mmol/L)137.00±1.00137.00±1.00136.00±1.00138.00±3.00137.00±3.00Cl-/(mmol/L)109.00±2.00110.00±3.00108.00±3.00110.00±3.00111.00±3.002.4中药冰片对足底切口痛大鼠血常规指标的影响（见表3）由表3可知，与模型组相比，各组大鼠血常规指标差异均不显著（P0.05）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.10.003.T003表3中药冰片对足底切口痛大鼠血常规指标的影响Tab.3Effect of borneol on blood routine indicators in plantar incisional pain rats项目假手术组模型组复方利多卡因乳膏组中药冰片低剂量组中药冰片高剂量组白细胞/(×109/L)14.70±1.9011.10±4.2612.60±3.4614.14±3.1412.62±3.13中性粒细胞/(×109/L)2.34±1.391.38±0.602.20±0.951.91±0.502.27±1.57淋巴细胞/(×109/L)12.35±1.309.72±3.8910.40±2.7712.23±2.7910.35±2.19红细胞/(×1012/L)8.35±0.657.98±2.258.60±0.608.69±0.438.41±0.54血红蛋白/(g/L)160.00±13.00151.00±43.00163.00±8.00168.00±9.00161.00±7.00平均红细胞体积/fL56.80±2.3056.50±2.1055.80±2.8057.00±1.7056.90±2.00平均红细胞血红蛋白量/pg19.10±0.6018.90±0.6019.00±0.9019.30±0.6019.20±0.80红细胞平均血红蛋白浓度/(g/L)337.00±5.00335.00±10.00339.00±4.00340.00±7.00337.00±5.00血小板/(×109/L)1 199.00±145.001 104.00±348.001 255.00±116.001 226.00±127.001 164.00±108.00平均血小板体积/fL6.30±0.306.50±0.406.40±0.306.40±0.306.40±0.20血小板分布宽度15.30±0.2015.20±0.2015.30±0.1015.30±0.1015.30±0.103讨论术后切口疼痛是临床中常见的一种急性锐痛，持续时间通常较短，若在疼痛起初发生阶段未能得到良好控制，围术期切口痛可能引起外周和中枢神经系统疼痛传导通路敏化[10]。目前最常用的镇痛药是非甾体类抗炎药（如复方阿司匹林、布洛芬等）和阿片类镇痛药（如哌替啶、芬太尼、吗啡等），虽然两类药物均具有不同程度的镇痛作用，但作用机制和应用指征以及不良反应不同[11-13]。非甾体类消炎药可产生胃肠道不良反应，阿片类药物则存在不同程度的成瘾性，而且常用的镇痛药多采用灌服或注射给药，对心血管系统、消化系统等具有不同程度的影响，在试验研究中可能影响数据的准确性，因而在临床和研究上的应用受到了一定限制。中药冰片可以开窍醒神、清热止痛，使用领域非常广，可应用于热病神昏、痉厥与痰厥等多种疾病的治疗。此外，冰片还能够起到抑杀细菌、镇痛抗炎以及对保护中枢神经的作用[14-16]。赵雨千等[17]研究发现，冰片能够减少损伤组织处伤害性感受器传入脊髓的伤害性刺激信号，对大鼠后肢穿刺伤急性疼痛具有抑制作用。张丹等[18]研究提示冰片对脊柱肿瘤术后病人切口疼痛具有镇痛作用。本研究选用中药冰片，采用局部给药方式，结果提示，中药冰片可显著增加足底切口痛大鼠热痛阈值，具有明显的镇痛效果，血常规和血生化无显著性差异，安全性高。冰片调节急性疼痛更多机制、组织病理和多模式镇痛等有待进一步研究。4结论本研究结果表明，中药冰片可明显提高足底切口痛大鼠术后热痛阈值，能够有效缓解足底切口痛大鼠术后疼痛，对大鼠血常规和血清生化指标未见明显影响，可作为相关试验研究、临床动物术后局部镇痛的药物选择。