中华绒螯蟹（Eriocheir Sinensis）俗称河蟹，具有耐饥能力强、生长快、营养丰富等特点，是中国特有的传统水产养殖珍品，具有较高的营养及经济价值[1-2]。在中华绒螯蟹传统养殖模式中，传统饵料系数高、消化率低、适口性差[3-4]。随着中华绒螯蟹市场需求量增加，仅投喂传统饵料难以满足中华绒螯蟹养殖业的发展[5]。探索适合中华绒螯蟹生长发育且营养均衡的优质饵料成为水产养殖业的研究热点。中华绒螯蟹的幼蟹期处于营养转型阶段，不具备良好的摄食能力[6]，此阶段的幼蟹对饵料的营养配比非常敏感。因此，幼蟹期摄入饵料的营养和品质是保证幼蟹成活率的关键[7]。小球藻含有丰富的营养活性化合物，广泛应用于饲料、医药和食品等领域，其中蛋白核小球藻中蛋白含量超过50%，是优良的单细胞饲料蛋白源[8]，适量添加蛋白核小球藻对动物的生长和饲料利用效率具有促进作用[9]。黄文庆等[10]报道，饵料中添加1.5%小球藻醇提取物能够提高黄颡鱼幼鱼的生长性能，调节免疫力和抗氧化功能。雨生红球藻是自然界中最好的虾青素来源，虾青素可以保护细胞免受活性氧的胁迫[11]。饵料中添加雨生红球藻粉可提高中华绒螯蟹的生长性能，改善色泽，提高机体抗氧化力和非特异性免疫力[12]。本试验以中华绒螯蟹幼蟹为试验对象，探讨蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对幼蟹的生长性能、体成分及生理生化等指标变化的影响，为中华绒螯蟹幼蟹生物配合饵料的搭配选择提供参考。1材料与方法1.1试验材料中华绒螯蟹幼蟹购自天津市水产研究所稻蟹养殖基地，养殖试验于天津市水产生态及养殖重点实验室进行。蛋白核小球藻藻粉和雨生红球藻藻粉由天津农学院水产学院渔业资源与环境课题组提供。1.2试验设计选取108只体重（7.56±0.03）g、附肢健全、规格相似、强壮活泼、处于褪壳间期的幼蟹，随机分为3组，每组3个重复，每个平行12只。T1组中华绒螯蟹幼蟹饲喂基础饵料，T2组中华绒螯蟹幼蟹饲喂基础饵料+15%蛋白核小球藻粉，T3组中华绒螯蟹幼蟹饲喂基础饵料+15%的雨生红球藻粉。试验期42 d。基础饵料由天津通威饲料提供，原料组成为面粉、大豆粕、菜籽粕、花生粕、玉米蛋白粉、乌贼膏、鱼粉、大豆磷脂油，矿物质元素、微量元素、维生素等，基础饵料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T001表1基础饵料营养水平项目粗蛋白粗脂肪粗纤维水分粗灰分总磷赖氨酸含量42.05.08.012.018.01.032.4%将基础饵料粉碎，过60目筛，在基础饵料中分别添加15%蛋白核小球藻粉和雨生红球藻，混匀，以挤压机制成直径2 mm的饵料，自然晾干，搓碎，制成直径约为2 mm的硬颗粒状饵料，放入自封袋内，4 ℃保存。1.3饲养管理幼蟹养殖试验于聚丙烯水箱（600 mm×490 mm×340 mm）中进行，每天11：00和21：00各喂食1次，日投喂量约为体重的2%~3%，根据生长、摄食情况即时调整。定期检查水质，记录水温、死亡数量及饲料投喂量。养殖水温为24~28 ℃，每天换水一次，换水量为1/4~1/2，24 h曝气。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验结束后，对每组中幼蟹进行称重，计算增重率、特定生长率和饵料系数。增重率(WGR)=(Wt-W0)/W0×100%(1)特定生长率(SGR)=(lnWt-lnW0)/t×100%(2)饵料系数（FCR）=总摄食量/(Wt-W0)(3)肥满度（CF）=W/L3 (4)式中：W0为初重（g）；Wt为末重（g）；t为养殖时间（d）；W为体重（g）；L为头胸甲长（cm）。1.4.2生理生化指标采用南京建成生物工程研究的试剂盒测定幼蟹肝胰腺样品的超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量。1.4.3体成分测定中华绒螯蟹幼蟹体成分参照文献[13]方法进行测定，采用105 ℃烘干恒重法测定水分含量，采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量，采用索氏抽提法测定粗脂肪含量；采用550 ℃马弗炉灼烧法测定灰分含量，使用Agilent 1260液相色谱仪测定氨基酸含量。采用气相质谱法测定样品中脂肪酸含量。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2016整理，GraphPad Prism 8绘制图形，SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对中华绒螯蟹幼蟹生长性能的影响（见表2）由表2可知，与T1组相比，T2组和T3组幼蟹的末重、增重率与特定生长率均显著增加（P0.05），T2组和T3组幼蟹的末重分别比T1组提高了46.50%和39.87%。T2组幼蟹的饵料系数最低，其次是T3组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T002表2蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对中华绒螯蟹幼蟹生长性能的影响组别初重/g末重/g增重率/%特定生长率/(%/d)饵料系数肥满度/(g/cm3)T1组9.19±1.0510.56±0.50b13.20±11.27b0.28±0.23b2.37±0.980.45±0.06T2组8.92±0.6715.47±0.63a63.03±29.65a1.13±0.42a1.22±0.620.43±0.08T3组8.94±0.8614.77±0.45a57.27±17.14a0.94±0.26a1.25±0.780.46±0.05注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对幼蟹肝胰腺生理生化指标的影响（见表3）由表3可知，各组幼蟹肝胰腺SOD活性排序为T2T3T1，T2组幼蟹肝胰腺SOD活性比T1组提高36.00%（P0.05），T3组SOD活性比T1组提高16.59%。各组幼蟹肝胰腺GSH-Px活性排序为T3T2T1。与T1组相比，T2和T3组幼蟹肝胰腺GSH-Px活性分别提高了34.82%和39.41%（P0.05）。与T1组相比，T2组幼蟹肝胰腺ACP活性提高了35.63%（P0.05）。与T1组相比，T2和T3组幼蟹肝胰腺AKP活性分别升高了87.30%和80.42%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T003表3蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对中华绒螯蟹幼蟹肝胰腺生理生化指标的影响组别SOD/(U/mg)GSH-Px/(U/mg prot)MDA/(mol/g)ACP/(U/L)AKP/(U/L)T1组3.88±0.14b23.52±2.38b1.65±0.110.80±0.05b1.89±0.06bT2组5.28±0.58a31.71±1.50a1.62±0.181.09±0.08a3.54±0.33aT3组4.52±0.53ab32.80±1.12a1.63±0.100.89±0.05b3.41±0.15a2.3蛋白核小球粉和雨生红球藻粉对幼蟹体成分的影响（见表4~表6）由表4可知，与T1组相比，T2组和T3组幼蟹体粗蛋白含量分别提高了19.86%和23.35%（P0.05），蟹体粗脂肪、水分含量差异均不显著（P0.05）。T2组幼蟹体粗灰分含量显著低于T3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T004表4蛋白核小球藻和雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹体成分的影响组别水分粗灰分粗脂肪粗蛋白T1组71.47±5.1813.17±0.90ab0.93±0.6110.32±0.84bT2组70.20±3.0512.10±0.57b0.80±0.3612.37±0.33aT3组69.90±3.0713.43±1.15a0.97±0.3812.73±1.03ag/100 g由表5可知，与T1组相比，T2组幼蟹的总饱和脂肪酸（∑SFA）含量略有下降；T2和T3组幼蟹的总单不饱和脂肪酸（∑MUFA）含量均有升高；T3组幼蟹的EPA和DHA含量及总多不饱和脂肪酸（∑PUFA）均有所增加，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T005表5蛋白核小球藻和雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹脂肪酸含量的影响项目T1组T2组T3组合计0.738±0.6200.741±0.2690.896±0.371棕榈酸（C16∶0）0.118±0.1160.114±0.0760.150±0.079硬脂酸（C18∶0）0.055±0.0340.054±0.0190.060±0.017花生酸（C20∶0）0.010±0.0030.008±0.0010.008±0.002山萮酸（C22∶0）0.017±0.0070.011±0.0040.011±0.002总饱和脂肪酸（∑SFA）0.191±0.1660.184±0.1030.226±0.103棕榈烯酸甲酯（C16∶1）0.042±0.0570.043±0.0020.042±0.032油酸甲酯（C18∶1n9c）0.217±0.1890.264±0.0170.265±0.110二十碳烯酸甲酯（C20∶1）0.010±0.0070.008±0.0040.012±0.004芥酸（C22∶1n9）0.031±0.0160.029±0.0070.030±0.009总单不饱和脂肪酸（∑MUFA）0.299±0.2670.330±0.0480.349±0.153亚油酸（C18∶2n6c）0.148±0.1280.129±0.0950.203±0.094α-亚麻酸（C18∶3n3）0.021±0.0170.019±0.0060.021±0.011二十碳二烯酸甲酯（C20∶2）0.017±0.0090.015±0.0040.020±0.003EPA（C20∶5n3）0.036±0.0170.037±0.0070.039±0.008DHA（C22∶6n3）0.033±0.0160.033±0.0060.039±0.007总多不饱和脂肪酸（∑PUFA）0.247±0.1870.227±0.1200.321±0.116∑（EPA+DHA）0.069±0.0320.070±0.0130.078±0.015g/100 g由表6可知，T2组幼蟹氨基酸总量最高，T3组次之，二者均显著高于T1组（P0.05）。T2组幼蟹丝氨酸和甘氨酸含量显著高于T1组（P0.05）。必需氨基酸含量排序为T2组T3组T1组。T2组和T3组幼蟹EAA/TAA显著高于T1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.010.T006表6蛋白核小球藻和雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹氨基酸含量的影响项目T1组T2组T3组必需氨基酸（EAA）/(mg/kg)苏氨酸（Thr）3 464.42±10.88c7 940.23±50.18a5 363.82±24.48b缬氨酸（Val）3 932.04±14.50c8 960.14±103.21a5 837.05±35.14b蛋氨酸（Met）1 524.17±5.64c3 644.24±42.05a2 378.63±12.37b异亮氨酸（Ile）3 258.37±21.16c7 881.83±92.16a5 041.37±29.72b亮氨酸（Leu）5 520.05±45.29c13 516.14±154.27a8 662.29±50.60b苯丙氨酸（Phe）4 088.72±15.34c9 029.88±93.93a6 155.53±30.45b赖氨酸（Lys）4 879.64±27.19c12 290.19±82.51a7 676.31±27.69b非必需氨基酸（NEAA）/(mg/kg)组氨酸（His）2 667.06±4.54c5 783.69±66.83a3 951.27±24.42b丝氨酸（Ser）9 088.06±68.77b16 131.72±208.97a9 532.20±85.12b甘氨酸（Gly）6 266.80±18.79b11 314.89±120.02a6 964.31±57.13b精氨酸（Arg）7 668.66±39.30c17 168.67±125.14a11 217.40±72.80b丙氨酸（Ala）4 515.61±15.49c10 208.49±118.68a6 726.24±34.22b脯氨酸（Pro）3 971.06±20.87c10 230.91±107.04a6 115.57±46.53b酪氨酸（Tyr）3 436.99±13.33c7 706.17±88.74a6 133.17±26.71b天冬氨酸（Asp）1 209.47±57.682 959.55±59.722 236.79±53.34谷氨酸（Glu）3 428.39±73.14c8 360.89±49.69a5 240.18±57.60b氨基酸总量（TAA）68 919.51±191.49c153 127.64±1 318.12a99 232.14±437.56bEAA/TAA/%38.69b41.31a41.43a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。3讨论3.1蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉对中华绒螯蟹幼蟹生长性能的影响蛋白核小球藻含有丰富的游离氨基酸、肽、糖蛋白、矿物质和维生素等活性物质[14-15]，小球藻生长因子（CGF）可以有效促进动物生长。研究表明，在鲫鱼（Carassius Auratus）饵料中添加20~40 g/kg的小球藻粉可以提高饵料利用率，促进个体生长[16]。饵料中添加含有小球藻的复合微藻可以显著提高半滑舌鳎的生长性能[17]。黄文庆等[10]研究表明，随小球藻醇添加水平上升，黄颡鱼的增重率和特定生长率呈上升趋势，饵料系数呈下降趋势。饵料中添加10%~15%的小球藻粉可以有效促进牙鲆（Paralichthys olivaceus）生长[18]。本研究中，添加15%小球藻可显著增加中华绒螯蟹幼蟹的体重，改善幼蟹的生长性能，与上述研究结果一致。表明小球藻内丰富的生物活性物质具有促进甲壳动物生长的作用[19]。雨生红球藻是一种单细胞绿藻，含有诸多营养物质，是已知天然虾青素积累量最高的生物。雨生红球藻能够影响水生生物的新陈代谢，促进肠道细菌分解难以消化的饲料成分，汲取更多营养物质。雨生红球藻对中华绒螯蟹生长性能的影响可能与其含有虾青素有关，而虾青素作为雨生红球藻的提取物，对水产动物生长性能具有促进作用[20]。陈秀梅等[21]研究表明，饵料中添加100~200 mg/kg的虾青素对黄颡鱼的生长性能和饲料利用率具有显著的促进作用。饵料中添加25 g/kg的雨生红球藻，可提高红白锦鲤的生长性能[22]。饵料添加0.1%~1.0%的雨生红球藻可有效改善虹鳟的免疫指标[23]。饵料中添加适量雨生红球藻粉可改善大黄鱼（Pseudosciaena crocea）的生长性能[24]，与本研究结果类似。3.2蛋白核小球藻粉和雨生红球藻对幼蟹肝胰腺生理生化的影响总超氧化物歧化酶（SOD）活性可反映抗氧化系统清除氧自由基的能力[25]。丙二醛（MDA）是机体脂质过氧化作用的终产物，其含量可反映机体脂质过氧化水平和细胞受损程度[26]。GSH-Px是生物体抗氧化防御系统的关键酶[27]，能够催化GSH将机体代谢过程中产生的脂质过氧化物或过氧化氢还原成无害醇类或H2O，从而达到减轻和阻断脂质过氧化目的，起到保护细胞免受氧化损伤的作用[28]。吴仁福等[29]研究发现，添加雨生红球藻可以提高三疣梭子蟹肝胰腺中的SOD活性。本研究中，添加小球藻粉可以显著提高中华绒螯蟹幼蟹SOD和GSH-Px活性，添加雨生红球藻可以显著提高幼蟹GSH-Px活性，表明小球藻和雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹抗氧化酶活力均具有一定的促进作用，能够提高机体抗氧化能力，但是机制可能存在差异。ACP和AKP主要在免疫反应中负责转运与代谢磷酸基团，通过巨噬细胞溶酶体对细胞体起到重要的代谢调控作用，是免疫防御体系中重要的水解酶[30]。Khani等[31]研究表明，摄食小球藻粉可以提高鲤鱼（Cyprinus carpio）、ACP和AKP活性。Abdelhamid等[32]研究表明，添加小球藻可以提高尼罗罗非鱼（Oreochromis Niloticus）ACP和AKP活性，增强免疫功能。本研究中也得到了相似结果，添加小球藻可以显著提高中华绒螯蟹幼蟹ACP和AKP活性，表明添加小球藻可增强中华绒螯蟹幼蟹免疫力。本研究中，添加雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹ACP活性无显著影响，可提高AKP活性，与吴仁福等[29]研究结果不完全一致，可能是本研究中添加的雨生红球藻粉而非虾青素。3.3蛋白核小球藻粉和雨生红球藻对中华绒螯蟹幼蟹体成分的影响中华绒螯蟹幼蟹的生长发育与其体成分的粗蛋白含量密不可分，蛋白质是生物机体内部各种生理生化活动的基础。幼蟹体脂肪沉积量主要体现在粗脂肪含量，粗灰分能够代表幼蟹头胸甲的坚硬程度，可反映其对饲料中矿物质成分的吸收转化率。研究发现，牙鲆摄食含有小球藻藻粉的饵料后体内粗蛋白质含量增加，粗脂肪含量减少[33]。有研究表明，在饵料中添加适量雨生红球藻粉可以提高对虾性腺中的粗蛋白含量，促进肝胰腺中脂肪的沉积[34]。本试验中，添加蛋白核小球藻粉和雨生红球藻粉均可显著增加中华绒螯蟹幼蟹粗蛋白含量，饵料中添加小球藻藻粉组能够降低幼蟹粗脂肪含量，而雨生红球藻粉组幼蟹的粗脂肪含量增加，与上述研究结果一致。养殖蟹类的营养价值、口感风味、品质等特性与脂肪酸的组成和含量密切相关[35]。小球藻具有丰富的不饱和脂肪酸[36]，如C20∶5n3（EPA）和C22∶6n3（DHA）为代表的多不饱和脂肪酸（PUFA）。雨生红球藻中含有丰富的虾青素。有研究表明，饵料中添加雨生红球藻粉可提高河蟹肌肉中的DHA和ΣPUFA[37]，与本研究结果类似。氨基酸作为蛋白质合成的前体物质，能够为生物代谢转化过程提供能量[38]。本研究中，添加小球藻和雨生红球藻均可以提高中华绒螯蟹幼蟹氨基酸总量、必需氨基酸含量和非必需氨基酸含量，表明小球藻和雨生红球藻可以提高中华绒螯蟹幼蟹氨基酸含量。Xu等[39]研究表明，添加8~12 g/kg小球藻能够提高异育银鲫的营养价值，与本研究结果一致。而Rahimnejad等[18]研究发现，喂食微藻不会影响比目鱼的身体组分，与本研究结果不一致，可能是因为藻类对不同养殖对象的影响存在差异。本试验中，各组EAA/TAA均高于FAO/WHO标准规定的必需氨基酸含量40%，而对照组仅为38.69%。必需氨基酸含量越高，表明蛋白质质量越好。研究表明，在本试验条件下添加小球藻和雨生红球藻可以有效提高中华绒螯蟹幼蟹蛋白质质量。4结论本研究结果表明，适量添加蛋白核小球藻和雨生红球藻均可以促进中华绒螯蟹幼蟹生长，提高机体抗氧化能力和免疫力，促进氨基酸的积累。综合各项指标，蛋白核小球藻的效果较好。