近年来，关于微生态制剂、酸化剂、酶制剂、中草药制剂等添加剂在畜禽养殖中应用的研究较多[1-2]。微生态制剂具有绿色、安全环保、无毒副作用等优点，能够调节反刍动物肠道内微生物菌群平衡，提高动物的生长性能[3-5]。复合益生菌培养物属于微生态制剂中的一类，是利用微生态制剂进行发酵类产品，将高活性的益生菌接种至固态发酵料中，经固态堆积发酵后获得复合产物[5-6]。复合益生菌培养物中含有大量的氨基酸、有机酸、β-葡聚糖、甘露聚糖、多肽及益生菌制剂。这些活性物质能够协同益生菌制剂改善动物肠道微生物菌落平衡，为动物机体的代谢提供营养底物，从而改善动物健康。目前，复合益生菌培养物在奶牛和母猪的养殖中已经广泛应用。研究表明，复合益生菌培养物可以提高奶牛的产奶性能，降低奶牛的体细胞数[6]。复合益生菌培养物能够降低母猪死胎数，提高母猪抗氧化功能和免疫功能，提高哺乳仔猪生长性能[7]。但复合益生菌培养物对肉羊生长性能和血清指标方面的研究报道较少。本研究旨在肉羊基础日粮中添加不同比例的复合益生菌培养物，研究复合益生菌培养物对肉羊生长性能、血清生化、抗氧化、免疫指标的影响，为促进复合益生菌培养物在肉羊养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1复合益生菌培养物制备将活菌数均为1.0×109 CFU/g的酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌按1∶1∶1比例混合，以15%接种量接种至待发酵饲料中（主要原料组成为50%玉米、25%豆粕、15%麸皮、10%米糠），采用固态堆积发酵48 h获得复合益生菌培养物。1.2试验设计试验于山东济宁水浒种羊养殖场进行，选取3月龄、体重（17.32±0.22）kg的杜寒羊公羊60只，随机分为4组，每组3个重复，每个重复5只羊。C组（对照组）羊饲喂基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加1%（T1组）、5%（T2组）、10%（T3组）复合益生菌培养物。试验日粮组成及营养水平见表1。预试期7 d，正式试验期60 d。试验羊按照常规饲养管理方法进行疫苗免疫接种和消毒清洁，自由采食与饮水。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.003.T001表1试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目C组（对照组）T1组T2组T3组原料组成/%玉米秸秆44.044.043.042.0玉米24.023.021.220.4豆粕18.018.017.015.0麦麸11.011.011.010.0磷酸氢钙1.01.00.90.8食盐1.01.00.90.8预混料1.01.01.01.0复合益生菌培养物01.05.010.0合计100.0100.0100.0100.0营养水平消化能/(MJ/kg)9.419.419.429.44粗蛋白/%12.8112.8112.7812.75钙/%0.870.870.860.85磷/%0.580.580.560.56注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 5 000 IU、VD3 1 200 IU、VE 20 IU、Fe 30 mg、Zn 30 mg、Mn 30 mg、Cu 10 mg、I 0.5 mg、Se 0.3 mg、Co 0.1 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能正式试验期第1 d和最后1 d，试验羊空腹称重，计算平均日增重。称量记录每日羊的投喂料量和剩料量，计算平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=(投料量-剩料量)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2血清生化指标正式试验最后1 d，采集试验羊血液10.0 mL，常规方法分离血清样品。采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清中的总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）含量以及谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）活性。1.3.3血清抗氧化指标利用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清总抗氧化能力（T-AOC）（Fe3+还原法）、超氧化物歧化酶（SOD）（黄嘌呤氧化酶法）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）（比色法）、过氧化氢酶（CAT）活性（铂酸铰法）以及丙二醛（MDA）含量（硫代巴比妥酸法）。1.3.4血清免疫指标利用南京建成生物工程研究所的ELISA检测试剂盒测定血清样品中的免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。1.4数据统计与分析试验数据采用SAS 9.3软件进行单因素方差分析和Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合益生菌培养物对肉羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，T1组、T2组、T3组肉羊的末重、平均日增重均显著提高（P0.05）；T2组和T3组肉羊的料重比均显著降低（P0.05）。与T1组相比，T2组、T3组肉羊的末重、平均日增重均显著提高（P0.05），料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.003.T002表2复合益生菌培养物对肉羊生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[kg/(只·d)]料重比C组（对照组）17.31±0.2130.82±0.35c225.17±5.68c1.28±0.135.68±0.12aT1组17.32±0.2331.21±0.37b231.50±6.14b1.31±0.115.66±0.13aT2组17.34±0.2432.59±0.34a254.17±5.98a1.33±0.125.23±0.13bT3组17.31±0.2132.63±0.33a255.33±6.12a1.34±0.115.25±0.11b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复合益生菌培养物对肉羊血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，T1组、T2组、T3组肉羊血清TP、ALB含量均显著提高（P0.05），BUN含量均显著降低（P0.05）；T2组、T3组肉羊血清的AST、ALT活性均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.003.T003表3复合益生菌培养物对肉羊血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)AST/(U/L)ALT/(U/L)ALP/(U/L)BUN/(mmol/L)C组（对照组）45.56±1.65c16.34±1.12c36.58±1.42a27.65±1.21a56.87±2.318.54±0.51aT1组47.38±1.57b18.05±1.18b35.65±1.38a27.54±1.18a55.98±2.147.83±0.44bT2组49.87±1.51a19.87±1.01a33.54±1.34b25.35±1.24b55.87±1.987.11±0.54cT3组49.21±1.68a19.74±1.15a33.62±1.29b25.51±1.14b55.91±2.117.04±0.52c与T1组相比，T2组、T3组肉羊血清TP、ALB含量均显著提高（P0.05），AST、ALT活性、BUN含量均显著降低（P0.05）。2.3复合益生菌培养物对肉羊血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，T1组、T2组、T3组肉羊血清的T-AOC均显著提高（P0.05）；T2组、T3组肉羊血清的SOD、GSH-Px活性均显著升高（P0.05），MDA含量均显著降低（P0.05）。与T1组相比，T2组、T3组肉羊血清的T-AOC、SOD活性均显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.003.T004表4复合益生菌培养物对肉羊血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)C组（对照组）0.62±0.05c62.85±3.14b85.56±4.57b5.14±0.313.87±0.25aT1组0.71±0.04b64.54±3.58b88.65±4.98ab5.23±0.283.68±0.27aT2组0.79±0.03a69.24±4.12a92.24±5.14a5.31±0.263.31±0.24bT3组0.78±0.04a70.14±3.98a91.87±4.86a5.29±0.303.28±0.23b2.4复合益生菌培养物对肉羊血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，T1组、T2组、T3组肉羊血清IgG、IL-2含量均显著提高（P0.05），T2组、T3组肉羊血清IgA、TNF-α均显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.003.T005表5复合益生菌培养物对肉羊血清免疫指标的影响组别IgA/(g/L)IgG/(g/L)IgM/(g/L)IL-2/(ng/L)TNF-α/(ng/L)C组（对照组）1.65±0.17b9.11±0.21c1.14±0.11121.34±2.54c71.84±1.78bT1组1.71±0.18ab9.42±0.25b1.15±0.10124.48±2.47b71.95±1.65bT2组1.86±0.15a9.94±0.29a1.21±0.12132.41±2.68a73.87±1.74aT3组1.84±0.14a9.89±0.22a1.20±0.11131.87±2.74a73.91±1.81a与T1组相比，试验T2组、T3组肉羊血清的IgG、IL-2、TNF-α含量均显著提高（P0.05）。各组肉羊血清IgM含量差异均不显著（P0.05）。3讨论3.1复合益生菌培养物对肉羊生长性能的影响复合益生菌以及复合益生菌培养物能够提高反刍动物的生长性能。季彬等[8]研究表明，在肉牛日粮中添加0.10%、0.20%复合微生态制剂肉牛的平均日增重分别提高了5.97%、8.43%，料重比分别降低了1.74%、2.61%。亓鹏等[9]研究表明，肉羊日粮中添加0.10%、0.20%复合微生态制剂能够显著提高肉羊的平均日增重，降低料重比。惠文[10]研究表明，肉羊基础日粮中添加5.0%、10.0%复合酵母菌培养物肉羊的平均日增重分别提高10.8%、8.7%，料重比分别降低12.5%、10.0%。复合益生菌培养物能够提高反刍动物生长性能的原因可能是复合益生菌培养物由复合益生菌发酵制成而成，其含有大量的益生菌以及氨基酸、有机酸、甘露聚糖、β-葡聚糖、多肽等发酵代谢产物，复合益生菌培养物中富含的益生菌和活性代谢产物可以发挥协同作用，能够最大限度地提高肠道的消化功能，促进机体对营养物质消化吸收，提高饲料转化效率，提高反刍动物生长性能。本研究中，肉羊日粮中添加5%、10%复合益生菌培养物能够提高肉羊的末重和平均日增重，降低料重比，但添加5%、10%复合益生菌培养物间无明显差异。上述结果表明，复合益生菌培养物的添加剂量过高，反刍动物肠道无法完全吸收。因此，本研究选择复合益生菌培养物的适宜添加剂量为5%。3.2复合益生菌培养物对肉羊血清生化指标的影响当动物机体组织器官发生损伤或病变后，其会产生系列针对性完善措施，进而改变血清生化指标[11]。TP和ALB含量变化与动物机体蛋白质吸收代谢有关，其含量越高表明动物机体蛋白质合成代谢能力越强，动物机体越健康。AST和ALT主要参与肝脏的物质代谢，当肝脏受损或发生病变时其活性增强，血清中AST和ALT活性越低表明动物肝脏越健康。血清中BUN为饲料中蛋白质的最终代谢产物，与蛋白质代谢率呈负相关，其含量越低表明蛋白质合成率越高[12]。李薛强等[7]研究表明，母猪基础饲粮中添加10%复合菌培养物能够提高母猪分娩时血清中ALP活性，降低血清中BUN含量。本研究中，肉羊日粮中添加5%、10%复合益生菌培养物能够显著提高血清中TP、ALB含量，显著降低AST、ALT活性和BUN含量，与李薛强等[7]的研究结果相似。原因可能是复合益生菌培养物能够促进蛋白质的吸收和沉积，提高反刍动物消化代谢。3.3复合益生菌培养物对肉羊血清抗氧化指标的影响动物机体内自由基的产生和清除处于一种稳定的动态平衡，当动物机体受到损伤或刺激后，此时动物机体内清除自由基的酶促系统发生针对性反应，维持动物机体氧化与还原的动态平衡[13]。MDA是动物机体氧化反应的终产物，其含量越高表明动物机体的氧化反应越强烈，对细胞的损伤程度越大。SOD、GSH-Px是抗氧化酶促系统中主要的抗氧化酶，T-AOC体现抗氧化酶促系统对损伤的综合代偿能力，T-AOC、SOD、GSH-Px活性越高表明动物机体的抗氧化能力越强[14]。惠文[10]研究表明，肉羊基础日粮中添加5.0%、10.0%复合酵母菌培养物能够显著提高肉羊血清中T-AOC。李薛强等[7]研究表明，母猪基础饲粮中添加10%复合菌培养物能够将母猪血清中T-AOC提高6.25%，血清中GSH-Px活性提高24.26%。本研究中，肉羊日粮中添加5%、10%复合益生菌培养物能够显著提高血清中T-AOC、SOD、GSH-Px活性，显著降低MDA含量，与上述研究结果一致。原因可能是复合益生菌培养物能够改善机体的氧化与还原的动态平衡，提高反刍动物机体消除自由基的能力，从而提高反刍动物的抗氧化功能。3.4复合益生菌培养物对肉羊血清免疫指标的影响血清免疫指标能够评价动物机体的免疫功能[15]。免疫球蛋白（Ig）直接参与动物机体的免疫反应[16]。细胞因子虽然含量较低，但其在免疫应答的调节和效应中起重要作用，IL-2能够促进淋巴细胞生长、增殖、分化，IL-2含量的提高能够增强细胞免疫。TNF-α可以介导炎症反应，其含量提高能够增强机体抗感染能力[17]。甄玉国等[18]研究表明，肉仔鸡日粮中添加乳酸菌培养物和酵母菌培养物均能够显著提高血清中IgG和IgA含量。本研究中，肉羊日粮中添加5%、10%复合益生菌培养物能够显著提高血清中IgA、IgG、IL-2、TNF-α含量，与上述研究结果一致。原因可能是复合益生菌培养物中含有的益生菌以及有机酸、甘露聚糖、β-葡聚糖、多肽等活性物质和能够激活反刍动物的免疫系统，提高反刍动物机体的免疫功能。4结论在本试验条件下，肉羊日粮中添加5%、10%复合益生菌培养物能显著改善肉羊生长性能、血清生化指标、抗氧化指标及免疫指标，且适宜添加量为5%。