亚麻籽（Linum usitatissimum）富含油脂和蛋白质[1]，具有丰富的多不饱和脂肪酸（PUFA）以及能够防止心血管疾病[2]的亚麻酸和亚油酸。PUFA对畜禽生长性能、免疫应答反应、脂肪沉积水平、畜产品品质等方面具有重要影响[3]，但因为亚麻籽含有生氰糖甙、亚麻籽胶和抗维生素B6因子等有毒成分或抗营养因子[4]，导致其在家禽饲料中的应用较少[5]，未能充分发挥作用。因此，为提高亚麻籽在畜禽养殖业中的利用价值，需采取适当的加工处理方法，以减少其毒性物质或抗营养因子的危害，发挥其营养价值。研究发现，亚麻籽经膨化或压榨处理后，抑制了部分抗营养因子活性，提高了其养分消化率[6]。黑皮质素受体4（MC4R）属于一种G蛋白耦联受体，能够接收脂肪代谢产物的信号[7]，进而参与脂肪代谢相关信号通路的调节活动，对机体脂质合成和分解产生影响，与机体脂肪代谢密切相关[8]。也有研究表明，亚麻籽对机体的脂肪酸的组成和含量具有重要的调控作用[9-11]。目前，对亚麻籽的研究与应用主要集中于鸡和猪，而且研究热点是亚麻籽对机体脂肪代谢以及脂肪酸沉积的影响，尚无探讨亚麻籽加工方式对蛋鸭肠道黏膜形态、抗氧化能力等影响方面的研究报道。本研究选择蛋鸭为试验对象，通过在日粮中添加不同来源及加工方式的亚麻籽探究其对蛋鸭肠道黏膜形态、MC4R基因mRNA表达水平、抗氧化能力的影响，为膨化（或压榨）亚麻籽（粕）油脂饲料在蛋鸭生产中的合理应用以及亚麻籽在畜禽养殖中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验选择在武汉市畜牧兽医科学研究所试验基地进行。采用单因素完全随机试验设计，于浙江绍兴试验动物中心随机选择120日龄健康、体况较一致的青壳3号绍兴麻鸭480羽（公、母各半），随机分为5组，每组8个重复，每个重复12羽鸭。对照组鸭饲喂基础日粮，各试验组饲喂基础日粮+亚麻籽，试验设计见表1。试验鸭采用单层笼养，每日喂料2次（6：00和12：00），自由采食、饮水，按常规免疫程序免疫。预试期10 d，正式试验期40 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T001表1试验设计组别日粮组成对照组基础日粮试验1组基础日粮+1.5%法国膨化亚麻籽试验2组基础日粮+3.0%法国膨化亚麻籽试验3组基础日粮+3.0%国产膨化亚麻籽试验4组基础日粮+6.4%国产压榨亚麻饼1.2试验日粮试验采用玉米、小麦、豆粕等原料参照中国（1994）蛋鸭饲养标准营养需要配制基础日粮。法国膨化亚麻籽由法国考普瑞技术与咨询服务有限公司提供，国产亚麻籽购自新疆伊犁，其他原料购自国内市场。基础日粮组成及营养水平见表2，亚麻籽含油量与脂肪酸组成见表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T002表2基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.000玉米39.000代谢能/(MJ/kg)10.61小麦25.000干物质/%87.61大豆粕9.560粗蛋白质/%16.35棉籽粕3.000粗纤维/%3.12菜籽粕5.000粗脂肪/%2.47玉米蛋白粉1.400粗灰分/%12.41DDG4.000钙/%3.36DDGS2.000总磷/%0.59食盐0.360有效磷/%0.36L-赖氨酸0.500盐/%0.44DL-蛋氨酸0.130赖氨酸/%0.85多矿0.105蛋氨酸/%0.38石粉8.500蛋氨酸+半胱氨酸/%0.67磷酸氢钙1.200苏氨酸/%0.55硫酸钠0.100色氨酸/%0.17一水硫酸亚铁0.015亚油酸/%1.13多维0.030铁/(mg/kg)108.00胆碱0.080锌/(mg/kg)84.00复合酶0.020锰/(mg/kg)72.00硒/(mg/kg)0.24注：1.多维、多矿购自山东恩康药业。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T003表3亚麻籽含油量与脂肪酸组成项目法国亚麻籽国产亚麻籽亚麻饼含油量34.0334.309.24棕榈酸6.166.008.23棕榈油酸00.180硬脂酸3.934.693.97油酸18.1825.0220.76亚油酸15.05015.15617.990亚麻酸56.6848.6049.05%1.3测定指标及方法1.3.1肠道形态试验结束后，各组抽取16羽（每个重复2羽）接近平均体重的蛋鸭，颈静脉放血屠宰后，采集十二指肠、空肠、回肠中段约3 cm的肠段组织，制备切片，测定各肠段的肠绒毛高度、隐窝深度，计算绒毛高度/隐窝深度。1.3.2肝脏MC4R基因mRNA水平试验结束后，每组选取16羽试验鸭，每只鸭取3份肝脏样品，置于-80 ℃液氮中冻存。肝脏MC4R基因mRNA引物设计与合成、总RNA抽提、反转录、定量PCR，由武汉谷歌生物科技有限公司完成。引物信息见表4。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T004表4引物信息基因引物序列（5'→3'）片段长度/bp退火温度/℃MC4R-SCGGGAGGCTGCTATGAACAACT15760MC4R-AGCCACTGCCAAGCTACAGATGAActin-SGTGCTATGTCGCCCTGGATTT17460Actin-AATGCCACAGGACTCCATACCC1.3.3血清抗氧化指标试验结束后，各组抽取16羽接近平均体重的蛋鸭翅静脉采血，每羽鸭需收集2管血（10 mL离心管装），3 000 r/min转速下离心15 min，取上清液（血清），分装于EP管中，参照试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明书在全自动生化分析仪上测定血清中白细胞介素-6（IL-6）、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）。1.3.4脏器指数及小肠长度试验结束前1 d，从每组中选取2羽接近平均体重的鸭进行屠宰试验，每组16羽，共90羽。称取个体活重、心脏重、肝脏重、肺脏重、肾脏重、肌胃重、脾脏重、腺胃重，并计算脏器指数。分离食道，十二指肠、空肠、回肠、盲肠，测定其重量及长度，计算脏器指数。脏器指数=内脏器官重/活重×100%(1)1.3.5羽毛质量评分在试验结束前1 d，从每组中每个重复选6羽蛋鸭，共48羽蛋鸭，进行羽毛损伤程度的评分。测定方法参考姜旭明[12]的方法，羽毛损伤状况评定标准见表5。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T005表5羽毛损伤状况评定标准评分评定标准尾部1分羽毛质量良好，没有损伤完好2分羽毛受到损伤，但未裸露皮肤损伤3分裸露面积小于3 cm×3 cm没有羽毛4分裸露面积大于3 cm×3 cm没有羽毛5分完全裸露没有羽毛1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2007软件进行初步整理，SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肠黏膜形态的影响（见表6）由表6可知，各组鸭肠道绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T006表6不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肠黏膜形态的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组绒毛高度/µm十二指肠609.64±20.18629.15±35.12685.51±40.23573.01±18.85676.41±39.36空肠538.63±17.65611.06±23.17619.10±36.84637.82±51.12707.13±20.46回肠586.99±24.15529.97±16.23569.30±26.59610.87±32.15538.73±26.56隐窝深度/µm十二指肠93.73±8.3692.75±10.5693.07±9.3180.19±9.72100.39±12.57空肠89.47±7.2174.57±7.3477.14±7.1984.58±8.71109.42±11.43回肠89.48±9.1875.28±8.4376.11±9.5868.33±8.3578.19±10.32绒毛高度/隐窝深度十二指肠6.50±2.356.78±1.247.36±1.007.51±2.576.76±1.77空肠6.06±0.838.21±0.398.02±1.757.58±0.496.57±1.10回肠6.56±1.087.04±1.617.48±1.458.94±1.976.89±0.922.2不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肝脏MC4R基因mRNA水平的影响（见图1）由图1可知，各组蛋鸭肝脏MC4R基因mRNA表达水平差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.F001图1不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肝脏MC4R基因mRNA水平的影响2.3不同来源及不同水平的亚麻籽对蛋鸭抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，各组鸭血清IL-6含量差异不显著（P0.05）。与试验4组相比，试验2组和试验3组鸭血清T-AOC均显著提高（P0.05）。与对照组相比，各试验组蛋鸭血清MDA含量均显著降低（P0.05），且试验1组与试验2组降低幅度更大，比对照组分别降低了57.79%、57.48%。除试验4组以外，试验1组、试验2组、试验3组蛋鸭血清SOD活性均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T007表7不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭抗氧化指标的影响组别IL-6/(μg/L)T-AOC/(U/mL)MDA/(μmol/L)SOD/(U/mL)对照组33.87±6.803.95±1.04ab9.76±0.33a43.31±14.44b试验1组44.02±8.753.53±2.32ab4.12±0.11c82.66±1.19a试验2组46.49±12.154.34±1.21a4.15±0.06c92.51±1.05a试验3组36.50±18.424.10±0.51a5.60±0.49b83.11±1.67a试验4组32.35±13.112.93±0.74b5.04±0.01b19.92±7.69b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表9与此同。2.4不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭脏器指数和小肠长度的影响（见表8、表9）由表8可知，与对照组相比，试验3组蛋鸭肾脏指数显著提高（P0.05），各组其他指标差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T008表8不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭脏器指数的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组活重/g1 460.000±0.2101 440.000±0.2001 350.000±0.2801 390.000±0.2001 420.000±0.270心脏指数/%0.787±0.0630.803±0.1510.823±0.1790.822±0.0970.818±0.107肝脏指数/%2.137±0.3682.330±0.6562.560±0.6242.717±0.6122.603±0.479肺脏指数/%0.905±0.1441.046±0.1381.045±0.1131.003±0.1350.975±0.172肾脏指数/%0.712±0.100b0.818±0.138ab0.785±0.112b0.915±0.050a0.758±0.137ab肌胃指数/%2.185±0.3692.183±0.1732.516±0.9761.994±0.3422.137±0.749脾脏指数/%0.053±0.0160.063±0.0220.079±0.0330.057±0.0190.054±0.007腺胃指数/%0.308±0.0160.347±0.0780.373±0.0670.346±0.0560.354±0.025注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。由表9可知，与试验2组相比，试验4组蛋鸭十二指肠长度显著增加（P0.05）。饲喂不同来源及加工处理的亚麻籽对蛋鸭空肠和回肠长度无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T009表9不同来源及不同处理的亚麻籽对小肠长度的影响组别十二指肠空肠回肠对照组25.76±1.17ab66.64±5.8863.06±5.72试验1组27.50±1.76ab69.64±4.5763.84±4.85试验2组25.60±1.55b65.12±4.9561.22±4.19试验3组27.98±3.13ab68.96±7.8863.52±10.59试验4组29.30±1.41a69.52±5.9958.92±8.05cm2.5不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭羽毛质量的影响（见表10）由表10可知，各组蛋鸭羽毛质量评分差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.20.006.T010表10不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭羽毛质量的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组羽毛质量评分3.05±0.542.95±0.313.00±0.642.90±0.392.85±0.453讨论3.1不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肠道黏膜形态的影响肠道是机体消化器官，也是免疫系统。肠道所具有的黏膜免疫系统对病原体防御发挥重要的屏障作用，维持机体内外环境稳态[13]。完整的肠道黏膜上皮结构与机体的免疫、消化、吸收等功能具有密切联系，隐窝深度、绒毛高度、绒毛高度/隐窝深度（V/C）值、绒毛表面积以及黏膜厚度，反映了肠道的形态结构，是衡量肠道发育以及小肠消化吸收功能优劣的重要参考指标[14]。有研究表明，日粮中添加适宜比例的ω-6/ω-3 PUFA（6∶1），对樱桃谷肉鸭十二指肠的绒毛长度和隐窝深度无显著影响，但能够显著提高回肠绒毛长度、肌层厚度和毛高度/隐窝深度，对回肠的消化吸收能力具有提高效果[15]。吴志峰等[16]研究表明，富含n-3 PUFA的鱼油能够显著提高回肠黏膜绒毛高度、隐窝深度和V/C值，加速回肠上皮细胞新陈代谢活动。但杜雪[17]研究显示，鱼油会伤害山麻鸭肠道绒毛，导致某些部位发生粘连。本试验结果表明，本试验中的亚麻籽对蛋鸭肠黏膜小肠绒毛、V/C值、隐窝深度均无显著影响，肠道结构和功能均正常，能够维持机体的需要，与上述研究结论不一致，可能与亚麻籽的添加水平以及不同物种差异有关。3.2不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭肝脏MC4R基因mRNA水平的影响MC4R与机体脂肪代谢具有密切联系。MC4R属于G蛋白跨膜神经受体，可接收脂肪代谢产物的调节信号[8]，受体活化后会激活与脂肪代谢相关的信号调节通路，进一步调控脂肪代谢，是一个调节机体能量平衡的重要信号分子[18]。研究表明，日粮中添加适量的亚麻籽可降低血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量[19]，同时亚麻籽中丰富的n-3 PUFAs能够调节血液中的TG、TC和载脂蛋白的代谢，进而调节血脂[14,20]。日粮添加2%的富含PUFA的亚麻籽油能降低鸭蛋胆固醇，增加鸭蛋中n-3 PUFA含量[16]。许明曙等[9]报道，在生猪出栏前90 d添加5%膨化亚麻籽，可显著提高其背膘和背最长肌中ω-3 PUFA含量，可使ω-6/ω-3 PUFA比值达到中国营养学会的推荐范围。因此，本试验就亚麻籽能否通过影响MC4R基因的表达水平调节机体脂肪代谢做了进一步的研究，结果发现，与对照组相比，4个试验组蛋鸭肝脏的MC4R基因mRNA表达水平差异均不显著。周颖等[21]研究表明，亚麻籽能够显著降低硬脂酰辅酶去饱和酶（SCD1）基因的表达水平。郝健[22]研究发现，添加2%的共轭亚油酸能够显著抑制蛋鸡肝脏SCD1基因的表达水平，SCD是机体生产单不饱和脂肪酸的限速酶。本研究结果显示，各组蛋鸭肝脏MC4R基因表达水平差异不显著，可能是亚麻籽参与影响其他脂肪沉积的基因。有关亚油酸对MC4R影响以及影响机理等方面的研究报道在蛋鸭方面较少，关于亚麻籽调节畜禽脂肪代谢的具体作用机制以及过程仍需更深层次的探讨。3.3不同来源及不处理的亚麻籽对蛋鸭抗氧化能力的影响T-AOC作为总抗氧化能力，是反映机体抗氧化系统的综合性指标。抗氧化系统由SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶促系统和维生素C、维生素E、氨基酸等抗氧化物质非酶促系统组成，其最主要的作用是分解和清除代谢过程中所产生的活性氧。而MDA是判断机体脂质过氧化和细胞损伤的严重程度的指标[23-24]。段卫平等[25]研究发现，在仔猪日粮中添加4.5%的亚麻籽能够显著增强血清T-AOC、SOD、GSH-Px活性，极显著降低MDA含量。赵春等[26]研究发现，亚麻籽饼能够增强大鼠抗氧化能力，参与维持机体氧化还原系统平衡和调节血脂代谢。本试验结果表明，不同来源及不同加工处理方式的亚麻籽均能够有效降低血清MDA含量，减轻了对细胞膜的伤害。此外，添加1.5%法国膨化亚麻籽、3%法国膨化亚麻籽以及3.0%国产膨化亚麻籽均能够显著提高蛋鸭SOD的活性，与上述研究结果基本一致。本研究中，日粮添加3%法国膨化亚麻籽或3.0%国产膨化亚麻籽组蛋鸭的血清T-AOC显著高于6.4%国产亚麻饼组，并且与对照组相比也呈升高趋势。由此可见，日粮中添加3%法国膨化亚麻籽和3%国产膨化亚麻籽能够提高机体抗氧化酶活性，提高机体抗氧化能力，减少机体自由基和脂质过氧化物的产生，从而维持机体氧化还原内环境的稳态。3.4不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭脏器指数和小肠长度的影响内脏器官重量和脏器指数能够反映动物机体的生理状态及其生长发育情况，是判断机体健康状态的相关指标[27]。本试验结果表明，在蛋鸭日粮中添加3.0%国产膨化亚麻籽能够显著提高蛋鸭肾脏重量，对其他指标无影响，与左璐雅等[28]研究添加6.4%国产压榨亚麻饼的蛋鸭十二指肠长度显著长于添加3%法国膨化亚麻籽以及其他组的蛋鸭的研究结果一致。余婕等[29]研究发现，日粮中添加3%亚麻籽降低了蛋鸭肝脏的相对质量，对其屠宰性能和脾脏相对质量无显著影响。肝脏是机体重要的解毒器官，以代谢功能为主，故本试验选择的亚麻籽经压榨和膨化处理后，减少了其中抗营养因子以及其他毒性作用，对肝脏的发育无负面影响。但关于亚麻籽对蛋鸭脏器系数和小肠长度影响的机制仍需进一步探索。3.5不同来源及不同处理的亚麻籽对蛋鸭羽毛质量的影响羽毛质量是反映动物福利的相关指标之一，影响羽毛质量的因素包括环境温度、饲养密度、营养条件等[12]，且引起鸡鸭羽毛质量差异的主要原因在于其所处环境，如垫料和垫料的卫生情况[30]。本试验结果显示，亚麻籽对蛋鸭羽毛质量无明显影响，可能是由于本试验饲采用笼养模式，粪便清理及时，饲养环境和营养状况良好。4结论本研究结果表明，日粮中添加膨化亚麻籽或压榨亚麻饼对蛋鸭肠黏膜形态、MC4R基因mRNA表达水平、脏器指数和羽毛质量无显著影响；日粮中添加亚麻籽可提升蛋鸭的抗氧化能力。在本试验条件下，添加3%法国膨化亚麻籽或3%国产膨化亚麻籽对蛋鸭养殖效果较好。