甜高粱（sweet sorghum，SS）具有抗旱耐盐碱、生物产量高、含糖量高、易青贮等优良特征，但由于蛋白质含量低，粗纤维含量较高，难以满足动物营养所需[1-2]。苜蓿（alfalfa，AF）属于豆科，蛋白质含量丰富，但由于糖分含量较低，青贮过程中蛋白质分解严重，所以导致青贮不易成功[3-4]。二者混贮（SS-AF）能够实现营养互补，可为反刍动物提供一种平衡的能量和蛋白质基础日粮[5]。食草动物具有独特的瘤胃发酵系统，瘤胃中的微生物与动物自身机体之间以及微生物与微生物之间形成一个平衡系统[6-7]。反刍动物瘤胃中的微生物种类及数量受年龄、日粮类型、动物品种等方面的影响，其分布及组成与动物自身的消化吸收能力及免疫能力息息相关[8-11]。瘤胃中的微生物对自身的生长发育条件要求十分严格，因此采用传统的分离方法进行培养的难度系数较大。近年来，随着生物分子技术在微生物丰度研究的快速发展，为反刍动物瘤胃微生物组成的研究提供了新的途径。采用实时荧光定量PCR技术检测动物瘤胃的菌群数量，具有准确性较高、特异性较强以及灵敏性较高等优点[12]。目前通过实时荧光定量PCR技术检测卡拉库尔羊瘤胃微生物丰度变化的研究相对较少。本试验探究甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮日粮对卡拉库尔羊瘤胃中的4种细菌、4种真菌和7种原虫的丰度变化的影响，为进一步研究卡拉库尔羊瘤胃菌群代谢机理提供参考。1材料与方法1.1甜高粱与苜蓿的来源及营养成分分析甜高粱为蜡熟期的考利，紫花苜蓿品种为和田大叶。2018年10月22日收割，利用粉碎机将收割的甜高粱和苜蓿粉碎至2~3 cm。将甜高粱与苜蓿按照一定比例混合，分别设为SS-AF-Ⅰ组（甜高粱100%）、SS-AF-Ⅱ组（甜高粱80%，苜蓿20%）、SS-AF-Ⅲ组（甜高粱60%，苜蓿40%）、SS-AF-Ⅳ组（甜高粱40%，苜蓿60%）、SS-AF-Ⅴ组（甜高粱20%，苜蓿80%），充分混匀，压实，装入38 cm×26.5 cm聚乙烯袋中，制成袋装青贮，青贮窖内保存。甜高粱（SS）与苜蓿（AF）不同比例混贮的营养水平见表1[13]。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T001表1甜高粱（SS）与苜蓿（AF）不同比例混贮的营养水平（风干基础）项目SS-AF-Ⅰ组SS-AF-Ⅱ组SS-AF-Ⅲ组SS-AF-Ⅳ组SS-AF-Ⅴ组干物质/%25.4027.3230.1231.6934.90粗蛋白质/%5.516.647.989.219.52中性洗涤纤维/%63.0360.6157.1851.9151.11酸性洗涤纤维/%35.4631.7729.2727.5227.47钙/%0.400.420.490.550.60磷/%0.190.200.210.240.23代谢能/(MJ/kg)4.274.855.576.126.68注：营养水平中除代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2试验设计本试验选用4月龄、体重为（25.95±1.37）kg的健康卡拉库尔公羊30只，按甜高粱与苜蓿比例随机分为SS-AF-Ⅰ组（甜高粱100%）、SS-AF-Ⅱ组（甜高粱80%，苜蓿20%）、SS-AF-Ⅲ组（甜高粱60%，苜蓿40%）、SS-AF-Ⅳ组（甜高粱40%，苜蓿60%）、SS-AF-Ⅴ组（甜高粱20%，苜蓿80%），每组6个重复。基础日粮组成及营养水平见表2[13]。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T002表2基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目SS-AF-Ⅰ组SS-AF-Ⅱ组SS-AF-Ⅲ组SS-AF-Ⅳ组SS-AF-Ⅴ组原料组成/%玉米13.0013.0013.0013.0013.00麦麸10.0010.0010.0010.0010.00豆粕12.0012.0012.0012.0012.00预混料5.005.005.005.005.00棉籽壳10.0010.0010.0010.0010.00稻草10.0010.0010.0010.0010.00混合青贮40.0040.0040.0040.0040.00合计100.00100.00100.00100.00100.00营养水平干物质/%66.1365.9166.0366.8666.14粗蛋白质/%10.5010.8011.1812.3912.75粗脂肪/%2.202.242.382.502.58中性洗涤纤维/%55.5154.1852.8150.7050.38酸性洗涤纤维/%27.8925.7324.7324.0324.01钙/%1.221.131.311.101.24磷/%0.840.810.840.860.80代谢能/(MJ/kg)9.069.229.549.719.93注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 9 750 IU、VD3 2 450 IU、VE 19.5 IU、烟酸11.5 mg、Fe 66 mg、Zn 70 mg、Mn 38 mg、S 0.4 mg、Se 0.3 mg、Ca 0.75%、P 0.075%、NaCl 0.9%。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。饲养试验于2019年3月15日至6月15日在塔里木大学动科科学与技术学院的试验站进行。试验期90 d，其中预试期为15 d，正式试验期为75 d。采集瘤胃液，将同一处理组的样品混匀，采用四层纱布过滤，分装于提前高压灭菌的50 mL离心管，并立即放置-24 ℃冰箱保存。1.3总DNA的提取参照TIANGEN中TIANamp Bacteria DNA Kit试剂盒对瘤胃液中的总DNA进行提取。1.4目的基因PCR扩增在NCBI的Genbank上查找15个菌株的保守序列，然后使用Primer express 5.0进行引物设计。PCR反应体系：模板0.7 μL、上游引物（10 μmol/L）0.5 μL、下游引物（10 μmol/L）0.5 μmol/L、10×Tap Buffe2.5 μL、dNTP Mixture（2.5 mmol/L）2.0 μL、DNA Polymerase（2.5 U/μL）0.3 μL，ddH2O补至25.0 μL。PCR反应程序：95 ℃预变性5 min，94 ℃变性30 s，55~65 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃延伸10 min。1.5实时荧光定量PCR检测采用实时荧光定量PCR仪分析不同比例的甜高粱与苜蓿混合青贮饲喂卡拉库尔羊的瘤胃15种菌群微生物的丰度差异。引物见表3。实时荧光定量的PCR反应体系：样品总DNA（模板）1.0 μL、上游引物（10 μmol/L）0.2 μL、下游引物（10 μmol/L）0.2 μL、2×S6 Universal SYBR qPCR Mix5.0 μL、ddH2O 3.6 μL。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T003表3实时荧光定量PCR引物项目引物序列（5′→3′）退火温度/℃产物大小/bp文献来源总细菌CGGCAACGAGCGCAACCCCCATTGTAGCACGTGTGTAGCC64130曾燕等[15]白色瘤胃球菌（Ruminococcus albus）CCCTAAAAGCAGTCTTAGTTCGCCTCCTTGCGGTTAGAACA60176尹传宝等[16]产琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogenes）GGCGGGATTGAATGTACCTTGAGATCCGCCTGCCCCTGAACTATC60204尹传宝等[16]黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）TCTGGAAACGGATGGTACCTTTAAGACAGGAGTTTACAA58295曾燕等[15]溶纤维丁酸弧菌（Butyrivibrio fibrisolvens）CGCATGATGCAGTGTGAAAACGTCCCTCCCGACACCTATTATTCATCG55625曾燕等[15]续表3　实时荧光定量PCR引物实时荧光定量PCR反应程序：95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，55~65 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40个循环；72 ℃延伸5 min。参照Matsuki等[14]方法检测卡拉库尔羊瘤胃中菌群丰度。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T004项目引物序列（5′→3′）退火温度/℃产物大小/bp文献来源总真菌（ITS1F）CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAAGCTGCGTTCTTCATCGTG58480彭婉婉[17]产木聚糖酶菌（Neocallimastix patriciarum）CCAGAAGATGATGACAAGGTGGCACCATATTCACCAAGA59153—新丽鞭毛菌（Neocallimastix hurleyensis）CTACCGATTGAATGGCTTAGGGAAACCTTGTTACGACTTT5585—奥式霉菌（Orpinomyces intercalaris）GACCGATAGCGAACAAGTAAGAAGCAAGCCGATGAAG59134—盲肠鞭毛菌（Caecomyces communis）CGAACAAGTACCGTGAGGAAGCCACCTTCCAATGAC55214—内毛虫（Entodinium）GAGCTAATACATGCTAAGGCCCCTCACTACAATCGAGATTTAAGG57246王海荣[18]尾刺内毛虫（Entodinium caudatum）CTATTAGTGGACCTGATGGATATAGCAGCATCTTCAGCATT57184—双凹内毛虫（Entodinium biconcavum）TTCATCCAAGCCTCAAGAGGGTCCAATAGCATTGTTGAA57162—Entodinium chattenjeeiCATCCAAGCCTCAAGAGAAGGTCCAATAGCATTGTTGAA55160—双叶内毛虫（Entodinium dilobum）CGTAGTAAGGATTGACAGATTGAAGGTCTCGTTCGTTATCG5575—无尾前毛虫 （Epidinium ecaudatum）GGCTCTACCAACCTGAAGGTATATCCACCTACTGATGATG63100—双毛虫（Diplodinium）TTCCGATAACGAACGAGACTGGTTAGGCACTTGTTGTAT57144—注：“—”表示根据NCBI的相关保守基因序列，使用Primer express 5.0设计的引物。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，LSD法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃4种细菌丰度的影响（见表4）由表4可知，随着甜高粱与苜蓿混合青贮比例的下降，瘤胃中琥珀酸丝状杆菌、溶纤维丁酸弧菌、黄色以及白色瘤胃球菌的丰度呈先增加后减少的趋势。SS-AF-Ⅱ组瘤胃中产琥珀酸丝状杆菌、黄色瘤胃球菌的菌群丰度显著高于其他各组（P0.05）；SS-AF-Ⅳ组瘤胃中白色瘤胃球菌、溶纤维丁酸弧菌的菌群丰度显著高于其他各组（P0.05）；SS-AF-Ⅴ组瘤胃中琥珀酸丝状杆菌、白色瘤胃球菌的丰度显著低于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T005表4甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃4种细菌丰度的影响组别白色瘤胃球菌产琥珀酸丝状杆菌黄色瘤胃球菌溶纤维丁酸弧菌SS-AF-Ⅰ组7.77±0.04b8.11±0.02c7.79±0.07b6.73±0.12bSS-AF-Ⅱ组7.33±0.03c8.56±0.04a7.99±0.10a6.75±0.05bSS-AF-Ⅲ组6.49±0.04d8.39±0.05b7.67±0.07b6.48±0.12cSS-AF-Ⅳ组8.22±0.03a8.15±0.02c7.27±0.04c7.38±0.02aSS-AF-Ⅴ组5.74±0.01e7.96±0.03d7.26±0.18c6.47±0.08c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。log102.2甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃4种真菌丰度的影响（见表5）由表5可知，卡拉库尔羊瘤胃中产木聚糖酶菌、新丽鞭毛菌、奥式霉菌、盲肠鞭毛菌呈上升趋势；SS-AF-Ⅴ组瘤胃中产木聚糖酶菌、新丽鞭毛菌、奥式霉菌、盲肠鞭毛菌的丰度分别为5.43、7.94、5.19、8.01，显著高于其他各组（P0.05）；SS-AF-Ⅰ组瘤胃中产木聚糖酶菌、新丽鞭毛菌、奥式霉菌、盲肠鞭毛菌的丰度分别为5.20、6.75、3.07、6.25，显著低于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T006表5甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃4种真菌丰度的影响组别产木聚糖酶菌新丽鞭毛菌奥式霉菌盲肠鞭毛菌SS-AF-Ⅰ组5.20±0.04c6.75±0.09e3.07±0.03e6.25±0.02eSS-AF-Ⅱ组5.25±0.01b7.65±0.02b3.55±0.06d7.24±0.06bSS-AF-Ⅲ组5.26±0.06b7.17±0.04c4.67±0.03b6.78±0.05cSS-AF-Ⅳ组5.23±0.06b6.92±0.04d3.68±0.03c6.36±0.10dSS-AF-Ⅴ组5.43±0.02a7.94±0.04a5.19±0.02a8.01±0.01alog102.3甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃7种原虫丰度的影响（见表6）由表6可知，内毛虫、尾刺内毛虫、双凹内毛虫、双叶内毛虫、Entodinium chattenjeei、无尾前毛虫、双毛虫呈现上升趋势；SS-AF-Ⅴ组瘤胃内内毛虫、双叶内毛虫、无尾前毛虫、双毛虫的丰度为8.19、9.28、7.13、9.27，显著高于其他各组（P0.05）。SS-AF-Ⅰ组内毛虫、双叶内毛虫、无尾前毛虫、双毛虫的丰度为6.54、7.61、4.97、7.20，显著高于其他各组（P0.05）。SS-AF-Ⅰ组尾刺内毛虫、双凹内毛虫、Entodinium chattenjeei的丰度为5.96、5.89、5.92，显著高于SS-AF-Ⅱ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.001.T007表6甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃7种原虫丰度的影响组别内毛虫尾刺内毛虫双凹内毛虫双叶内毛虫Entodinium chattenjeei无尾前毛虫双毛虫SS-AF-Ⅰ组6.54±0.22d5.96±0.04b5.89±0.03b7.61±0.08d5.92±0.04b4.97±0.03e7.20±0.02dSS-AF-Ⅱ组7.47±0.10c5.13±0.03c5.11±0.09c8.05±0.02c5.03±0.02c6.96±0.02b7.88±0.02cSS-AF-Ⅲ组7.72±0.06b6.35±0.19a6.36±0.08a8.49±0.05b6.16±0.05a5.99±0.01d8.38±0.05bSS-AF-Ⅳ组7.46±0.10c6.05±0.13b6.22±0.32ab8.55±0.15b6.16±0.05a6.44±0.02c8.33±0.05bSS-AF-Ⅴ组8.19±0.08a6.41±0.17a6.12±0.05ab9.28±0.05a5.96±0.18b7.13±0.01a9.27±0.06alog103讨论3.1甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃细菌的影响瘤胃中的细菌分泌大量纤维素酶，可以将纤维素降解为葡萄糖与各种营养物质为动物及自身提供能量[19]。反刍动物的瘤胃中降解纤维的细菌主要包括3种：产琥珀酸丝状杆菌、白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌[20]。王海荣[18]采用相同检测细菌丰度的方法，结果发现，随着基础日粮中玉米含量增加，混合牧草减少，纤维含量减少，粗蛋白含量逐渐增加，高纤维组绵羊瘤胃中的白色以及黄色瘤胃球菌的丰度显著升高；研究中也发现，产琥珀酸丝状杆菌的菌群丰度为8，黄色瘤胃球菌的菌群丰度为7，结果与本试验结果相似；但该研究中白色瘤胃球菌的菌群丰度是6，而本试验结果中白色瘤胃球菌的菌群丰度是6~8。导致差异的原因可能是白色瘤胃球菌极其特殊的菌种，既是纤维分解菌又是氢化菌。因此，基础日粮中纤维含量对瘤胃中能够分泌纤维酶的细菌数量具有重要影响。Zeng等[21]通过实时荧光定量PCR技术检测羊瘤胃中3类纤维降解菌，结果与本试验结果相似。Pu等[22]、马惠忠等[23]研究表明，随着豆粕比例增加，日粮中粗蛋白增加和中性洗涤纤维（NDF）降低，发现羊瘤胃中的3类纤维降解细菌的数量均逐渐增加，与本试验结果一致。本试验中，随着甜高粱与苜蓿比例降低，基础日粮中的NDF和酸性洗涤纤维（ADF）含量降低，3类纤维降解细菌也呈逐渐下降的趋势，以SS-AF-Ⅴ组丰度最低。溶纤维丁酸弧菌也是一种在反刍动物瘤胃中含量较多的菌群，对基础日粮中的营养物质的消化和吸收具有重要作用[24]。Ghaffari等[25]研究发现，随着苜蓿含量减少，日粮中粗蛋白、ADF和NDF含量减少，绵羊瘤胃中的溶纤维丁酸弧菌的丰度呈逐渐下降趋势。郭盼盼等[26]研究发现，随着玉米比例增加，玉米青贮和玉米秸秆减少，日粮中粗蛋白含量增加，NDF和ADF含量减少，延边黄牛瘤胃中溶纤维丁酸弧菌的丰度显著降低。该结果与本试验结果一致，随着甜高粱比例下降，日粮中粗蛋白含量增加，纤维含量降低，溶纤维丁酸弧菌的丰度呈下降趋势，以SS-AF-Ⅴ组最低。在相同的基础日粮条件下，卡拉库尔羊的瘤胃中产琥珀酸丝杆菌的菌群丰度最高，与前人研究结果相同。结果表明，上述4种细菌在基础日粮中的纤维降解起主导作用。3.2甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃真菌的影响新丽鞭毛菌门（Neocallimastigomycota）仅见于食草动物的消化道内，并被公认为是通过产生木质素酶降解木质素最有效的微生物菌体[27]。本试验中，产木聚糖酶菌、新丽鞭毛菌、奥式霉菌、盲肠鞭毛菌均属于新丽鞭毛菌门，为严格厌氧真菌。虽然瘤胃真菌只占整个瘤胃微生物的5%~20%，但在瘤胃中发挥重要功能[28]。Kumar等[29]发现，瘤胃中的真菌首先通过物理处理方法用假根刺穿植物的细胞壁，之后产生丰富的具有高活性的纤维素酶及半纤维素酶等物质，最后使用化学方法作用于难以降解的植物细胞壁，如坚固的后壁组织以及维管组织等。王海荣[18]发现，不同氮源日粮对绵羊瘤胃中的真菌数量具有显著影响，其中棉粕组显著高于鱼粉+麸皮组和豆粕组，结果与本研究结果相似。不同的日粮类型影响日粮中营养成分，从而影响试验动物瘤胃真菌的丰度及数量。韦玥瑞等[30]发现，在基础日粮中，随着补精饲料苜蓿含量增加，引起粗蛋白含量增加，进而导致盲肠鞭毛菌的菌群丰度逐渐增加；在Ⅰ组（苜蓿青干草占100%，玉米秸秆、精料均占0）、Ⅱ组（苜蓿青干草75%，玉米秸秆0，精料25%）、Ⅲ组（玉米秸秆100%，苜蓿青干草、精料均占0）、Ⅳ组（苜蓿青干草0，玉米秸秆75%，精料25%）中，Ⅰ组盲肠鞭毛菌的丰度最多，Ⅳ组的丰度最少；新丽鞭毛菌科的菌群丰度逐渐增加，Ⅱ组菌群丰度明显高于Ⅳ组。该结果与本试验结果契合，随着甜高粱与苜蓿比例减小，蛋白含量逐渐增加，NDF以及ADF含量逐渐减少，SS-AF-Ⅴ组产木聚糖酶菌、新丽鞭毛菌的丰度显著高于其他各组。王照华等[31]发现，随着玉米比例增加，日粮中粗蛋白含量增加，粗纤维含量减少，黄牛瘤胃中的真菌数量减少。该研究结果与本研究结果不同，可能是由于该研究选用的玉米能够迅速发酵，之后迅速产生大量的可溶性碳水化合物，使瘤胃中的酸碱度快速变小，妨碍瘤胃真菌生长发育，从而降低瘤胃真菌的营养基础。而本试验选择的是甜高粱与苜蓿混贮，两个研究结果上的差异可能是由于日粮类型的不同、试验动物的差异、采取的瘤胃液方法不同造成的。瘤胃真菌对基础日粮中纤维的降解发挥重要作用，瘤胃中真菌的丰度可间接反映动物机体对粗纤维、粗蛋白饲料消化水平的高低[32]。3.3甜高粱与苜蓿不同比例混合青贮对卡拉库尔羊瘤胃原虫的影响瘤胃原虫在反刍动物瘤胃发酵过程中十分重要[33]，瘤胃原虫可吞噬细菌、抑制其对日粮中淀粉的消化吸收，同时将日粮中纤维物质和淀粉转化成挥发性脂肪酸，减缓碳水化合物在瘤胃内的发酵速度，稳定瘤胃pH值[34]。在瘤胃微生物群落中，原虫含量占瘤胃微生物总生物量的50%[35]，其中内毛虫属和前毛虫属是原虫数量较大的群体，占总原虫数量的54.70%[36]。Kittelmann等[37]研究发现，前毛虫属及Eudiplodinium的菌群丰度在鹿和绵羊瘤胃中相对较丰富，占总纤毛虫数量高达80%以上。杨宝钰等[38]鉴别出奶牛瘤胃中Entodinium、Eremplastron、Epidinium等6个属的12种原虫，其中50%是属于Entodinium的原虫，表明Entodinium对瘤胃中的蛋白、纤维素、淀粉、木聚糖的降解起到至关重要的作用。原虫的数量和组成可影响反刍动物的饲料利用率[39]，而原虫的丰度与多样性受日粮、动物品种等多种因素的影响[40]。吐尔逊阿依·赛买提等[41]发现，随着基础日粮中豆粕含量增加、稻秆含量减少，导致粗蛋白的含量逐渐增加，粗纤维逐渐减少，塔里木马鹿的瘤胃原虫活力以及原虫的总生物量均显著增加，研究结果与本试验结果相似。常维毅[42]在冬、夏两季采用营养水平不同的日粮饲喂狍，结果发现，随着夏季粗蛋白的增加以及粗纤维含量降低，狍瘤胃中能够分解纤维素的前毛虫和双毛虫的丰度明显上升。王梦芝等[43]发现，随着日粮中豆粕含量增加，稻草含量减少，粗蛋白含量增加，结构性碳水化合物减少，导致羊瘤胃中原虫的种群数量及结构明显改变，内毛虫和双毛虫的菌群丰度随着基础日粮中营养物质的粗纤维含量降低呈上升趋势。该研究结果与本试验结果相契合，随着甜高粱与苜蓿混合青贮比例下降，NDF和ADF含量呈下降趋势，SS-AF-Ⅴ组内毛虫、尾刺内毛虫、双凹内毛虫、双叶内毛虫、Entodinium chattenjeei、无尾前毛虫、双毛虫的丰度均较多。张红涛[44]发现，随着玉米青贮含量升高，日粮中纤维含量降低，瘤胃原虫的多样性显著增加。该研究结果与本试验结果存在一定程度不同，造成差异的原因可能是基础日粮中的粗蛋白含量、纤维含量、试验动物、环境等因素不同。4结论本研究结果表明，随着甜高粱与苜蓿混贮的比例下降，日粮中营养水平发生相应改变，导致卡拉库尔羊瘤胃微生物的数量发生显著变化。细菌丰度呈先增加后减少趋势，SS-AF-Ⅱ组及SS-AF-Ⅳ组日粮组较好；真菌丰度呈上升趋势，SS-AF-Ⅴ组日粮组较好；原虫丰度呈上升趋势，SS-AF-Ⅴ组日粮组较好。综上所述，SS-AF-Ⅳ组的日粮可有效提高降解纤维素菌群的数量，改善卡拉库尔羊瘤胃微生物的菌群结构。