贵州水牛是贵州省少数民族地区普遍饲养的肉役兼用型水牛，在河流型水牛中属于中小体型。贵州水牛具有耐粗饲、肉质鲜嫩的特点，但生长缓慢、产肉低制约贵州水牛的应用前景[1-2]。近年来，贵州农科院与属地政府部门合作引入摩拉水牛在非保种区进行杂交改良试验。在生产性能、肉品质等方面贵州水牛有较大提高。在贵州省大力推进牛规模化、标准化养殖的大背景下，全省的牧草地产量与品质已经很难满足牛养殖的高标准发展要求。因此，利用现有农业资源研究开发新型水牛饲料成为畜牧业科研的重点。刺梨为蔷薇科多年生落叶灌木缫丝花的果实，原是云贵川高原特有的一种野生资源。现在贵州龙里、六盘水、黔东南等地大面积人工种植。有研究表明，刺梨富含维生素C（约每100 g刺梨果肉含VC 2 075~2 725 mg）、VB族、VE、黄酮类物质等[3-4]。此外，刺梨含有天门冬氨酸、赖氨酸、精氨酸等多种人体必需氨基酸和半需氨基酸[5]，蛋白质总量达0.6%~0.7%。随着刺梨加工产业兴起，其富余产物刺梨渣成为畜禽养殖营养研究的热点。刺梨渣作为一种富含维生素、氨基酸的饲料来源，能够有效促进牛等反刍动物的消化吸收，提高生产性能[6-7]。因此，将刺梨渣资源化利用，作为牛饲料开发具有重要意义。试验研究比较在饲料中添加不同比例的发酵刺梨渣对贵州水牛×摩拉水牛杂交育肥牛生产性能、肉品质、胃肠道及血液生化指标的影响，评价发酵刺梨渣饲喂水牛效果，为水牛用发酵刺梨渣饲料产业化提供参考依据。1材料与方法1.1试验材料试验选取30头健康、体重（260.00±31.85）kg、12~13月龄的贵州水牛×摩拉水牛杂交一代育肥牛（简称贵摩杂牛），随机分为3组，每组10头。分别饲喂添加不同比例发酵刺梨渣的饲粮，添加比例分别为0（对照组）、13%（试验组1）、18%（试验组2）。基础日粮组成及营养水平见表1，其中预混料配方由贵州畜牧兽医研究所饲料研究中心提供。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0麸皮（CP 16%）6.5消化能/(MJ/kg)8.36豆粕（CP 42%）7.2粗纤维/%15.70葵粕9.6粗蛋白/%11.30预混料9.0钙/%0.52苜蓿16.1磷/%0.63玉米青贮（CP 6.5%）19.6玉米32.01.2饲养管理试验水牛拴系饲养，每日定时饲喂2次（8：00、16：00），采食后自由饮水。试验分为预试期（10 d）和正式试验期（90 d）。试验牛舍定期消毒，并保持干燥，试验牛定期驱虫。试验用刺梨渣取自龙里某刺梨果汁加工厂，加入1%的食盐和EM菌（主要成分光合菌、乳酸菌等，按1∶106比例添加）[8]，密封青贮发酵。30 d后开封饲喂。经测定发酵后的刺梨渣水分、蛋白质、VC含量达68.0%、0.7%、3.1%。1.3测定指标及方法1.3.1生产性能记录每只试验水牛日采食量，并测定试验开始、结束时每只试验牛早晨饲前的空腹体重。试验结束时试验水牛禁食24 h、断水8 h后进行屠宰测定。1.3.2肉品质屠宰45 min后，取试验水牛背最长肌测定pH值、牛肉剪切力、滴水率、熟肉率、失水率，每个样品重复测定5次取平均值。测定方法及参照标准[9-12]见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T002表2肉品质的测定方法与参照标准测定内容方法参照标准pH值pH值测试仪干物质含量真空干燥法GB/T 5009.3—2010粗灰分含量灼烧称重法GB/T 5009.4—2010粗蛋白含量凯氏定氮法GB/T 5009.5—2010粗脂肪含量索氏抽提法GB/T 5009.6—20161.3.3胃肠道指标试验水牛屠宰后立即剖腹，采用无菌操作法取样。快速结扎十二指肠、空肠、回肠中段后切下，取食糜3 mL冻存液氮待测肠道消化酶活性；完成取下小肠、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃置于冰盒中待测胃肠道发育指标。采用试剂盒测定试验水牛的十二指肠、空肠、回肠的淀粉酶、乳糖酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶活性，所用试剂盒均购自上海生工，严格按照试剂盒操作说明进行试验。将小肠、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃去除内容物后称取重量，并测量小肠的长度及去除内脏的胴体重。1.3.4血液生化指标试验水牛屠宰前通过腹静脉采血10 mL，采用低温离心机分离血清，-80 ℃保存，待测血液生化指标测定。取试验水牛血清，通过全自动生化分析仪测定样品的葡萄糖、尿素氮、甘油三酯等含量；采用试剂盒测定试验水牛的试验水牛血清的超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA)、免疫球蛋白IgA、IgM、IgG。试剂盒均购自生工生物工程（上海）股份有限公司，严格按照试剂盒操作说明进行试验。1.4数据统计与分析试验记录数据经Excel初步处理后，使用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛生产性能的影响（见表3）由表3可知，3组试验牛干物质平均日采食量差异不显著（P0.05），但试验组1、试验组2平均日增重分别比对照组高8.94%、8.83%，3组之间差异不显著P0.05）。试验组2料重比最高，与对照组差异显著（P0.05）。试验组1与试验组2屠宰率比对照组分别高2.35%、4.93%，差异不显著（P0.05）。眼肌面积分别显著提高19.33%、25.41%（P0.05）。结果表明，添加发酵刺梨渣，在一定程度上可以提高贵摩杂牛的生产性能，同时降低饲养成本。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T003表3添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛生产性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/(g/d)干物质平均日采食量/(kg/d)料重比/kg屠宰率/%眼肌面积/cm2对照组260.00±31.85345.51±20.32950.13±22.748.05±0.528.65±1.33a49.64±1.2271.49±3.46b试验组1260.00±31.85353.16±22.471 035.11±30.378.38±1.167.36±1.22b50.81±0.8385.31±4.57a试验组2260.00±31.85353.06±21.561 034.02±28.628.41±0.947.40±1.04b52.09±1.3089.66±15.35a注：同列数据无字母或数据肩标相同字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）。2.2添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛肉品质的影响（见表4）由表4可知，各组牛肉之间pH45 min值差异不显著（P0.05）。与对照组相比，试验组1、试验组2在剪切力、滴水率、失水率等指标方面表现优秀，存在显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T004表4添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛肉品质的影响项目对照组试验组1试验组2肉色AAA脂肪色AAA大理石纹BBBpH45 min值6.63±1.396.70±0.986.69±1.02剪切力/N45.34±11.18a26.37±6.17b25.91±5.43b滴水率/%10.05±2.76a6.13±2.11b6.17±2.48b失水率/%15.43±1.52a10.15±1.23b10.81±2.36b熟肉率/%32.66±3.4034.06±1.5234.88±3.73注：同行数据无字母或数据肩标相同字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）；下表同。2.3添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛胃肠道发育指标及肠道消化酶活性的影响（见表5、表6）由表5可知，试验组1、试验组2试验牛的瓣胃重/活体重、邹胃重/活体重、瓣胃重/复胃鲜重、邹胃重/复胃鲜重、小肠重/活体重均低于对照组，但差异不显著（P0.05）。试验组1、试验组2试验牛的小肠长度显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T005表5添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛胃肠道指标的影响项目对照组试验组1试验组2瘤网胃重/活体重/%1.56±0.411.60±0.681.62±0.72瘤网胃重/复胃鲜重/%47.63±4.5251.66±5.1451.68±5.20瓣胃重/活体重/%0.44±0.160.42±0.130.39±0.12瓣胃重/复胃鲜重/%17.11±5.5516.98±5.2216.92±5.19邹胃重/活体重/%0.69±0.070.65±0.050.66±0.06邹胃重/复胃鲜重/%21.74±2.3621.03±1.9920.94±2.01小肠重/活体重/%3.03±1.282.91±1.112.86±1.03小肠长度/cm28.25±1.73b29.37±1.49a29.99±1.53a由表6可知，肠道消化酶指标方面，与对照组相比试验组1、试验组2试验牛十二指肠、回肠、空肠的淀粉酶、乳糖酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶活性均有所提高，但差异不显著（P0.05）；十二指肠的脂肪酶活性低于对照组，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T006表6添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛肠道消化酶活性的影响组织项目对照组试验组1试验组2十二指肠糜蛋白酶48.86±3.3949.88±4.9250.05±8.09淀粉酶1.63±0.852.08±0.762.10±0.77乳糖酶210.34±9.73224.53±5.86230.31±1.66胰蛋白酶1 477.2±5.761 571.5±11.381 621.8±2.11脂肪酶699.78±9.95568.27±8.59561.06±7.17空肠糜蛋白酶36.50±7.3343.01±3.6245.78±7.22淀粉酶1.88±0.511.99±0.482.07±0.47乳糖酶223.83±7.97240.32±3.56239.81±10.23胰蛋白酶699.41±4.66710.59±3.81709.32±8.73脂肪酶490.26±1.83502.01±9.95500.44±2.64回肠糜蛋白酶32.08±6.9439.92±3.1240.07±7.18淀粉酶1.69±0.712.16±0.662.09±0.67乳糖酶136.96±5.15196.06±4.01195.98±2.91胰蛋白酶554.09±11.24603.16±9.99611.16±8.08脂肪酶529.13±10.95637.44±3.06638.01±22.312.4添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛血液生化指标的影响（见表7）由表7可知，试验组1、试验组2与对照组试验牛血清中的葡萄糖、尿素氮、甘油三酯、IgA含量差异不显著（P0.05）。相比对照组，试验组1、试验组2试验牛血清中的T-SOD、GSH-Px活力和T-AOC、IgM、IgG均显著提高（P0.05），试验牛血清中MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.004.T007表7添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛血液生化指标的影响项目对照组试验组1试验组2葡萄糖/（mol/L）5.23±1.045.31±0.755.30±0.60尿素氮/（mol/L）2.79±0.382.80±0.422.78±0.96甘油三酯/（mol/L）0.27±0.170.28±0.120.25±0.11T-SOD/（U/mL）57.31±9.81b65.27±11.54a66.98±11.47aGSH-Px/（U/mL）53.69±9.02b62.14±3.79a63.05±3.98aT-AOC/（U/mL）2.88±0.63b3.92±0.76a3.99±0.89aMDA/（μmol/L）2.95±0.19a2.23±0.44b2.18±0.61bIgA/（g/L）0.37±0.110.39±0.090.38±.013IgM/（g/L）3.32±0.84b3.77±0.39a3.82±1.03aIgG/（g/L）9.59±1.36b11.06±0.57a11.70±0.97a3讨论3.1添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛生产性能的影响研究表明，饲料中添加发酵刺梨渣对畜禽日均增重、屠宰率等生产性能数据的影响并不相同[13-14]。刺梨渣作为一种蛋白饲料替代品，其丰富的蛋白质、氨基酸可有效提高黄牛等反刍动物屠宰性能的各项指标[15]。试验表明，在饲粮中添加发酵刺梨渣有提高贵摩杂牛干物质日均采食量、日均增重、屠宰率等指标的趋势，虽与对照组无明显差异，但均饲料报酬均有不同程度的提高，可能与发酵刺梨渣能促进动物的消化器官分泌消化液，增加食欲，从而改善动物机体的消化能力，降低料重比有关。而且眼肌面积与对照组相比有显著提高（P0.05），说明饲粮中添加发酵刺梨渣对贵摩杂牛生产性能有促进作用，可能与刺梨渣发酵工艺、添加量有关。刺梨渣对贵摩杂牛生长性能的影响有待于进一步研究。3.2添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛肉品质的影响肉色、pH值、脂肪色、失水率、大理石纹是判定畜禽肉质的指标标准。畜禽屠宰后肌糖原的降解速度和强度对肉品质有较大影响，通常表现在肌肉pH值的变化。一般认为，鲜肉的颜色应该是鲜红色或亮粉色，与屠宰后肉样中残留的线粒体呼吸与氧渗透肌肉表面深度有关。本试验中，添加发酵刺梨渣的试验组与对照组相比，肉色、pH值、脂肪色、大理石纹等指标无显著差异（P0.05），说明饲粮中添加发酵刺梨渣未对贵摩杂牛肉质的感观指标产生不良影响。剪切力反映动物肌肉嫩度，剪切力值与嫩度呈反比关系[15-16]。本试验结果表明，添加发酵刺梨渣的饲粮可显著降低贵摩杂牛肌肉剪切力（P0.05），说明饲粮中添加发酵刺梨渣可以有效提高贵摩杂牛的肌肉嫩度。熟肉率是判别肌肉蛋白质加热过程中变性凝固失水的重要指标。本试验中，饲粮中添加发酵刺梨渣可使贵摩杂牛滴水率和失水率显著降低（P0.05），熟肉率有一定程度大提高（P0.05），说明试验样品牛肉的保水性得到加强，这可能与刺梨富含多糖、SOD等物质的抗氧化性有关。3.3添加不同比例发酵刺梨渣对贵摩杂牛胃肠道发育指标的影响胃肠道发育直接影响反刍动物的生产性能，是判定动物机体生理健康的重要指标。参照已有的研究，本试验将消化道重量在活体重的占比作为评判贵摩杂牛胃肠道发育情况的重要指标[16]。试验结果显示，添加发酵刺梨渣对贵摩杂牛瘤网胃重/活体重等无显著影响，表明发酵刺梨渣对贵摩杂牛瘤网胃等的发育未产生不良反应。肠黏膜厚度对动物营养物质的吸收转运有重要影响，实际操作中常以小肠长度、重量综合评判[17]。添加刺梨渣的试验组小肠重/活体重占比小而小肠长度长，但与对照组差异不显著，表明添加发酵刺梨渣一定程度上能够促进贵摩杂牛胃肠道的生长发育。原因可能与添加发酵刺梨渣饲料营养丰富，利于瘤胃发酵产物如丁酸的产生，提高瘤胃微生物蛋白质的合成能力和消化酶的活性，促进贵摩杂牛对营养物质的吸收。另外，试验组十二指肠、空肠、回肠的淀粉酶、乳糖酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶活性均有不同程度的提高，而这些消化酶很大程度上决定动物营养物质消化吸收，这也从侧面印证上述推断。胃肠道发育指标的改善可能是造成贵摩杂牛日均采食量、日均增重有所提高的原因。3.4添加不同比例刺梨渣发酵饲料对贵摩杂牛血液生化指标的影响过氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力、总抗氧化能力、丙二醛含量等是判定动物机体抗氧化能力的指标[18-19]。动物机体内的自由基主要通过自身抗氧化防御体系清除，包括酶组分与非酶组分，酶体系主要包括超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等；非酶组分体系主要包括VE、谷胱甘肽等。机体代谢过程中因氧化作用形成脂质过氧化物，该物质在过氧化条件下会分解成一系列的复杂产物，包括具有细胞毒性的丙二醛。因此检测丙二醛含量可一定程度上反映机体细胞所受损伤。本试验结果表明，添加发酵刺梨渣后贵摩杂牛血清中的T-SOD、GSH-Px、T-AOC等的含量均有显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05），说明添加刺梨渣可以提高贵摩杂牛机体的抗氧化性能。另一方面，添加发酵刺梨渣有提高贵摩杂牛血清IgA、IgM、IgG总量的趋势，原因可能与刺里渣中含有丰富多种维生素有关，或与刺梨渣含有其他抗氧化物质及刺里渣发酵饲料含有发酵培养物中能提高抗氧化性能的营养物质有关。4结论添加发酵刺梨渣对改善贵摩杂牛消化吸收能力有促进作用，一定程度上可以提高贵摩杂牛日增重、屠宰率等生产性能，进一步提高养殖经济效益。