抗生素在促进动物生长和抗病抑菌方面的作用突出，但是也给畜禽产业和人类健康带来严重威胁[1-2]。新型替抗饲料添加剂的研发与生产是畜牧业健康长久发展的重点工作。微生态制剂是一类生物活菌制剂，具有调节动物肠道菌群平衡、改善肠道健康、提高动物对日粮的消化吸收率等生物学功能，可以有效、安全替代抗生素[3]。近几年，复合微生态制剂广泛应用于动物养殖生产中，其原因是复合微生态制剂的效果要优于由单一菌种制成的微生态制剂。复合微生态制剂还具有相互协调促进作用，可以有效地提高肉仔鸡的生长性能和机体免疫功能[4-6]。本试验在肉仔鸡日粮中添加复合微生态制剂，研究其对肉仔鸡生长性能、免疫功能、肠道菌群及血清生化指标的影响，为其在肉鸡养殖中的应用提供参考。1材料和方法1.1试验材料微生态制剂是由3种菌复合而成，其成分为：枯草芽孢杆菌∶双歧杆菌∶酵母菌=1∶1∶1，活菌总数1×109 CFU/g，购自哈尔滨中科生物工程有限公司。1.2试验日粮试验基础日粮参照NRC（1998）中肉仔鸡各个阶段的营养需求和我国《鸡饲养标准》（2004）配制。基础日粮组成及其营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.012.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成/%1~21日龄22~42日龄营养水平1~21日龄22~42日龄合计100.00100.00玉米60.0063.00代谢能/(MJ/kg)12.5513.03豆粕30.0028.00粗蛋白/%20.5819.51鱼粉3.002.80钙/%1.110.98豆油3.002.50总磷/%0.700.65磷酸氢钙1.201.00赖氨酸/%1.151.04食盐0.300.30蛋氨酸/%0.510.40石粉1.501.40粗灰分/%6.515.89预混料1.001.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 15 000 IU、VD3 4 050 IU、VE 20 IU、VK3 2.4 mg、VB12 0.03 mg、VB1 2.4 mg、VB2 6.6 mg、VB6 2.4 mg、生物素0.12 mg、叶酸1.5 mg、烟酸 30 mg、Cu 10 mg、I 0.8 mg、Fe 120 mg、Mn 150 mg、Se 0.45 mg、Zn 100 mg。2.营养水平中代谢能、赖氨酸和蛋氨酸为计算值，其余为实测值。1.3试验设计试验选用800只1日龄健康艾维茵（AA）肉仔鸡，公、母各半，随机分成5组，每组8个重复，每个重复20只鸡。对照组肉仔鸡饲喂玉米-豆粕为主的基础日粮，试验组肉仔鸡饲喂在基础日粮基础上依次添加0.1%、0.2%、0.4%和0.6%的复合微生态制剂的日粮，试验期42 d。试验前准备和试验期间的免疫程序按照常规的饲养管理方式进行。试验期间肉仔鸡自由采食和饮水。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能42日龄早上以重复为单位空腹称重（前1 d 20：00开始禁食12 h，但提供饮水）。根据试验开始时的质量、试验结束时的质量及全试验期内的采食量计算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。平均日增重(g/只)=(末重-始重)/试验天数(1)料重比=平均日采食量/平均日增重(2)1.4.2免疫指标试验第42 d，每个重复选出2只体重接近的健康肉鸡，用肝素真空采血管在肉鸡翅下静脉采血，3 000 r/min离心10 min，分离出血清，分装于1.5 mL EP管中并编号，置于-20 ℃冰箱中保存，用于测定血清中的免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）含量。检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，检测方法按照说明书操作。1.4.3肠道菌群参照孙波等[7]的方法测定盲肠内大肠杆菌、沙门菌、双歧杆菌和乳酸杆菌的含量。1.4.4血清生化指标血清总蛋白、白蛋白、尿素氮、血糖、谷丙转氨酶及谷草转氨酶等指标采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，试验结果用“平均值±标准差”来表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1微生态制剂对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，肉仔鸡日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%的微生态制剂可显著提高肉仔鸡末重（P0.05）；微生态制剂组的平均日增重均显著高于对照组（P0.05）；日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%的微生态制剂显著降低料重比（P0.05）；日粮中添加微生态制剂对平均日采食量无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.012.T002表2微生态制剂对42日龄肉仔鸡生长性能的影响项目对照组0.1%微生态制剂组0.2%微生态制剂组0.4%微生态制剂组0.6%微生态制剂组初重/g45.83±0.4345.80±0.5145.78±0.5245.79±0.6345.82±0.65末重/kg2.08±0.14b2.12±0.20b2.23±0.23a2.25±0.27a2.22±0.30a平均日增重/g48.43±0.57c49.39±0.61b52.01±0.64a52.48±0.59a51.77±0.67ab平均日采食量/g99.35±1.7699.58±1.89102.26±1.75102.41±2.03103.56±2.09料重比2.05±0.17a2.02±0.19a1.97±0.16b1.95±0.15b1.98±0.16b注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2微生态制剂对肉仔鸡免疫功能的影响（见表3）由表3可知，肉仔鸡日粮中添加微生态制剂对IgA和IgM水平影响差异不显著（P0.05），但0.4%和0.6%的微生态制剂组的IgM水平略高于对照组；日粮中添加微生态制剂可以提高IgG水平，且0.4%微生态制剂组显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.012.T003表3微生态制剂对肉仔鸡免疫功能的影响项目对照组0.1%微生态制剂组0.2%微生态制剂组0.4%微生态制剂组0.6%微生态制剂组IgA1.08±0.051.05±0.041.09±0.041.10±0.031.08±0.05IgG7.65±0.15b7.72±0.23b7.94±0.40ab8.45±0.44a8.13±0.31abIgM1.21±0.051.19±0.031.20±0.051.28±0.051.26±0.04g/L2.3微生态制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响（见表4）由表4可知，在肉仔鸡日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%微生态制剂显著降低肉仔鸡肠道内的大肠杆菌和沙门氏菌数量（P0.05），且0.4%添加量组显著优于其他添加量组（P0.05）；日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%微生态制剂可显著增加乳酸杆菌和双歧杆菌数量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.012.T004表4微生态制剂对肉仔鸡肠道菌群的影响项目对照组0.1%微生态制剂组0.2%微生态制剂组0.4%微生态制剂组0.6%微生态制剂组大肠杆菌8.63±0.46a8.48±0.51a7.65±0.32b7.08±0.53c7.62±0.35b沙门氏菌6.59±0.45a6.12±0.34ab5.81±0.40b5.45±0.54c5.93±0.31ab乳酸杆菌8.45±0.33c8.76±0.39bc9.23±0.60b9.65±0.57a9.72±0.51a双歧杆菌7.67±0.43b8.07±0.51ab8.18±0.49a8.23±0.58a8.34±0.47alg (CFU/g)2.4微生态制剂对肉仔鸡血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，肉仔鸡日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%的微生态制剂可显著提高肉仔鸡血清的总蛋白的含量（P0.05）；显著降低肉仔鸡血糖含量（P0.05）。0.4%添加量组的效果显著优于其他添加量组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.012.T005表5微生态制剂对肉仔鸡血清生化指标的影响项目对照组0.1%微生态制剂组0.2%微生态制剂组0.4%微生态制剂组0.6%微生态制剂组白蛋白/(g/L)16.50±0.7616.39±0.6017.15±0.7817.32±0.8117.01±0.69总蛋白/(g/L)25.02±1.05b26.34±1.11b27.51±1.20a28.69±1.36a27.71±1.29a血糖/(g/L)14.78±0.23a14.39±0.20ab14.01±0.19b13.62±0.15b14.02±0.20b尿素氮/(mmol/L)0.78±0.040.75±0.050.73±0.040.71±0.030.71±0.03谷草转氨酶/(U/L)40.38±2.3140.45±2.1440.89±2.1641.04±2.9340.86±2.46谷丙转氨酶/(U/L)5.75±0.425.87±0.465.92±0.445.72±0.415.81±0.503讨论微生态制剂成为替抗产品研究热点之一。微生态制剂具有提高动物生长性能，改善肠道菌群，提高营养物质消化率等功能，但由于受到菌种、试验鸡品种、日龄及饲养环境等不同，产生不同的试验效果。研究表明，在肉仔鸡基础日粮中添加0.5%的乳酸菌和枯草芽孢杆菌混合菌显著提高肉鸡生长性能，复合效果优于单一效果[8]。在白羽肉鸡基础日粮中添加复合微生态制剂可以提高平均日采食量、平均日增重，并降低料重比，且最适添加量为0.1%和0.2%[9]。本试验研究表明，在艾维茵肉仔鸡日粮中添加枯草芽孢杆菌、双歧杆菌和酵母菌能显著提高肉仔鸡末重、平均日增重，并降低料重比，最适添加量为0.4%，与上述试验研究结果类似。但最适添加剂量不同，可能与菌种、活菌数量及试验肉鸡品种不同有关，但整体效果一致。因此，在肉鸡实际养殖生产中，要根据实际情况选择适宜的菌种及含量，确定最适添加量。微生态制剂进入动物机体内可在肠道内定植，促进肠道消化酶的分泌，提高日粮营养成分的吸收利用率，进而提高动物生长性能[10-11]。动物体内的IgA可以阻止微生物在呼吸道上皮附着，抑制病毒增殖，是阻碍病原体入侵动物机体的第一道防线；IgG具有激活补体、中和毒素的作用[12]。复合微生态制剂中的有益菌株可以在肉仔鸡机体肠道内固定，并逐渐繁殖取代有害菌的位置，改善肉仔鸡的肠道健康，提高肉仔鸡对饲料的消化吸收率，促进肉仔鸡免疫器官的发育、激活免疫细胞活性、提高机体免疫球蛋白含量，增强肉仔鸡的免疫功能，提高机体抗病能力[5]。刘淑娇等[13]研究发现，利用0.4%、0.6%和0.8%的复合益生菌（乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌）显著提高肉仔鸡21日龄和42日龄的IgG含量。本试验研究表明，在肉仔鸡日粮中添加0.4%的以1∶1∶1均匀混合的枯草芽孢杆菌、双歧杆菌和酵母菌，能显著提高肉仔鸡血清中IgG含量，0.4%和0.6%的添加量有提高IgM的趋势，说明复合微生态制剂能够有效提高肉仔鸡的免疫功能。动物吸收日粮中营养成分的场所在肠道内，而动物肠道更是动物机体抵抗外来病原菌的有效屏障[14]。正常情况下，动物肠道内的菌群保持着一种动态稳定平衡的状态。当动物机体受到外来的应激及病原菌的侵害时，就会破坏肠道正常的菌群结构，导致肠道菌群紊乱，导致动物出现一系列的肠道健康问题，尤其是幼龄动物肠道尚未发育完善，对其影响更为严重。当动物饲喂微生态制剂后，在动物肠道中有益菌及其代谢产物会通过竞争、占位、拮抗等作用使其大量繁殖。微生态制剂在动物机体内合成分泌的抗菌素和有机酸能抑制有害菌增长并降低其含量，进而改变动物肠道菌群结构；同时活菌制剂在其代谢过程中能够产生多种消化酶及氨基酸等多种营养物质，从而促进动物对营养物质的消化吸收，进而促进动物生长发育。陈西风等[9]研究表明，微生态制剂能够改善肉仔鸡的肠道健康，当添加量为0.05%时就会产生和抗生素同样的效果，而添加量为0.1%和0.2%时便会优于抗生素的效果。本试验结果表明，与对照组相比，日粮中添加0.2%、0.4%和0.6%的微生态制剂可显著降低大肠杆菌和沙门氏菌数量；显著增加乳酸杆菌和双歧杆菌数量（P0.05）。以上结果说明微生态制剂能够显著改善肉仔鸡肠道菌群结构，尤其在添加枯草芽孢杆菌后，能够在肠道中创造厌氧环境，更有利于乳酸菌等有益菌的大量繁殖增长，更好的发挥乳酸菌的功能。动物的品种、机体内环境、外部环境等因素会直接地影响着动物机体的各种血清生化指标是否在正常健康值范围之内，如果不在正常健康值内代表动物机体健康出现问题，需要及时处理状况[15]。血清白蛋白、总蛋白和尿素氮等指标可以反映动物机体蛋白利用情况和氨基酸的代谢水平。本试验研究表明，在肉仔鸡日粮中添加复合微生态制剂可以提高总蛋白含量，与刘乃芝等[16]、赵建文[17]的研究结果一致，均可提高血清总蛋白的含量，说明在肉鸡日粮中添加微生态制剂可以提高肉鸡对蛋白质和氨基酸的消化吸收利用率。本试验中，添加微生态制剂还可以降低血糖含量，说明肉鸡机体代谢有所逐渐提高，与前人研究结果类似，这也说明微生态制剂能够促进动物机体细胞利用葡萄糖的功能[18]。动物血清中的谷草转氨酶和谷丙转氨酶这2种血液指标能够间接表明动物的肝脏是否健康。本试验研究表明，添加微生态制剂对谷草转氨酶和谷丙转氨酶未产生显著影响，说明在肉仔鸡日粮中添加微生态制剂不会对肝脏产生不良影响[19]。4结论在肉仔鸡基础饲料中添加一定量的微生态制剂可以显著提高肉仔鸡生长性能，提高机体免疫力，增加有益菌数量，降低有害菌数量，改善肠道菌群结构，提高血清总蛋白含量，降低血糖含量；微生态制剂的最适添加量为0.4%。