脱氢乙酸钠（sodium dehydroacetate，DHA-S）是一种广谱类防腐剂，对酵母菌、霉菌等具有较强的抑制作用[1-4]。联合国粮农组织和世界卫生组织均认可DHA-S是一种安全的食品、饲料防霉防腐保鲜剂[5]。DHA-S的防霉保鲜作用效果优于很多有机酸复合酶制剂，可在饲料等行业中大规模应用[6-7]。DHA-S几乎不受环境pH值的影响，且在pH值较低的环境条件下效果更好。但高剂量的DHA-S存在一定的使用风险，DHA-S可通过影响细胞内pH值和酶类活性起抑菌作用[8]，但其是否会对动物体其他酶类产生影响还有待研究。因此，DHA-S在我国被列为限制性防腐保鲜剂[9]。本课题组前期研究DHA-S对育成期水貂生长性能及养分消化率的影响，结果表明，随着水貂日粮中DHA-S添加量增加，公貂的平均日增重和平均日采食量呈线性下降，较高剂量DHA-S会降低水貂的生长性能，但未对水貂的营养物质表观消化率产生影响[10]。动物机体可因应激等因素导致机体抗氧化酶能力下降。日粮中DHA-S添加量超过2 000 mg/kg会降低断奶仔猪的抗氧化能力[11]。目前，关于DHA-S对水貂抗氧化能力方面影响的研究较少。本试验在前期研究的基础上，以丙酸钙为对照，研究不同水平DHA-S对育成期水貂抗氧化能力的影响，为DHA-S在水貂养殖中的进一步应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验采用的120只60日龄体重接近的育成期短毛黑水貂（公、母各半），由青岛市即墨区温泉特种养殖场提供。1.2试验药品DHA-S由广州市安心生物制品有限公司提供，纯度为99.0%。丙酸钙由天津市光复精细化研究所提供，纯度≥99%。1.3试验日粮试验日粮主要由鱼排、鸡肠、鸡蛋、鸡肝、鸡头、鸡油、大豆油、花生饼、膨化玉米、水等原料组成。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.017.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00鱼排40.00代谢能/(MJ/kg)19.49鸡肠10.00粗蛋白质/%30.82鸡蛋18.00粗脂肪/%23.17鸡肝5.00干物质/%34.97鸡头10.00钙/%2.72大豆油3.00磷/%1.67花生饼2.00赖氨酸/%2.34膨化玉米6.00蛋氨酸/%1.05水6.00注：营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.4试验设计及饲养管理选取体况、体重相近的120只育成期短毛黑水貂（公、母各半），随机分为6组，每组公貂和母貂各10只，单笼饲养，每笼为1个重复。对照组在基础日粮中添加2 000 mg/kg丙酸钙。空白组和试验组在基础日粮中分别添加0、250、500、750、1 000 mg/kg的DHA-S。预试期1周，正式试验期10周。饲养试验前对试验场地及试验貂笼等消毒灭菌。试验仔貂进行免疫接种。试验貂每天早晚各饲喂一次，自由饮水。1.5测定指标与方法1.5.1母貂血清抗氧化指标饲养试验结束后，各组随机抽取接近平均体重的母貂6只，剪趾法采血5 mL，置于离心管，3 500 r/min离心10 min，制备血清，使用试剂盒测定总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，具体检测方法按照试剂盒说明书进行。1.5.2公、母貂肝脏抗氧化指标从各组中随机抽取接近于平均体重的公、母貂各6只，窒息法处死，取肝脏。使用滤纸吸取肝脏残留的血液，准确称取0.1 g肝脏，按照重量（g）∶体积（mL）=1∶9加入9倍生理盐水，磨碎组织，冰水浴制备肝脏组织匀浆，3 000 r/min离心10 min，制备组织匀浆。使用试剂盒测定T-AOC、T-SOD、GSH-Px、CAT活性、MDA含量。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，具体检测方法按照试剂盒说明书进行。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1DHA-S对育成期母貂血清抗氧化指标的影响（见表2）由表2可知，与空白组相比，试验2组、试验3组、试验4组和对照组母貂血清T-SOD活性显著降低（P0.05），试验1组母貂血清T-SOD活性显著高于试验4组（P0.05）。与对照组相比，空白组和各试验组母貂血清CAT活性显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.017.T002表2DHA-S对育成期母貂血清抗氧化指标的影响项目GSH－Px/(U/mL)T-AOC/(U/mL)T-SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)P值0.850.690.030.010.81空白组1 501.89±67.504.38±0.39119.55±1.26a21.06±3.63b7.15±1.24试验1组1 593.44±85.944.07±0.44112.47±5.85ab19.29±2.38b7.54±0.47试验2组1 616.39±58.003.86±0.8297.61±4.46bc21.32±3.60b8.39±1.09试验3组1 537.70±85.443.29±0.76100.48±6.19bc22.61±2.92b8.95±0.59试验4组1 580.33±53.673.08±0.6988.61±5.62c21.27±2.90b7.95±1.32对照组1 587.36±42.934.04±0.6295.06±9.67bc39.48±1.29a6.90±1.78注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2DHA-S对育成期母貂肝脏抗氧化指标的影响（见表3）由表3可知，试验4组母貂肝脏MDA含量显著高于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.017.T003表3DHA-S对育成期母貂肝脏抗氧化指标的影响项目GSH-Px/(U/mg prot)T-AOC/(U/mg prot)T-SOD/(U/mg prot)CAT/(U/mg prot)MDA/(μmol/g prot)P值0.990.990.550.180.02空白组735.36±63.014.54±1.73312.09±5.7151.10±11.414.76±0.28b试验1组727.55±34.453.96±0.52337.36±47.0050.59±3.954.51±0.83b试验2组672.91±85.784.89±1.78336.63±53.2449.38±4.795.11±0.59b试验3组715.07±55.254.03±0.82356.41±55.9547.75±6.055.13±0.03b试验4组721.31±59.314.29±1.07340.29±43.6928.65±2.947.25±0.57a对照组699.45±136.974.89±2.08435.53±55.0250.24±5.904.96±0.10b2.3DHA-S对育成期公貂肝脏抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，试验4组公貂肝脏CAT活性显著低于空白组、试验1组、试验2组和对照组（P0.05）。试验3组、试验4组公貂肝脏MDA含量显著高于空白组、试验1组和对照组（P0.05），试验2组公貂肝脏MDA含量显著高于空白组和试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.017.T004表4DHA-S对育成期公貂肝脏抗氧化指标的影响项目GSH-Px/(U/mg prot)T-AOC/(U/mg prot)T-SOD/(U/mg prot)CAT/(U/mg prot)MDA/(μmol/g prot)P值0.920.190.390.050.01空白组797.82±59.395.25±1.54450.18±51.0848.26±4.34a6.71±0.34c试验1组811.86±12.195.92±0.53515.38±44.2545.16±3.32a7.06±0.37c试验2组833.72±13.523.77±0.31385.72±41.5544.74±2.24a8.79±0.54ab试验3组800.94±30.114.80±1.74486.08±34.3440.99±1.40ab9.26±0.49a试验4组782.20±21.473.86±0.39411.36±79.9530.03±3.97b9.34±0.79a对照组838.41±73.627.59±0.97512.45±34.4646.03±5.41a7.38±0.48bc3讨论3.1DHA-S对育成期母貂血清抗氧化指标的影响动物的血液在正常情况下，其理化特性较稳定。当机体受外界影响受到应激时，血液中某些成分就会发生变化，可通过检查这些成分的变化判断动物机体情况。T-SOD是一种能够帮助机体免受氧化应激作用的酶，T-SOD活性可以评价机体的抗氧化能力[12]。本试验结果表明，当DHA-S添加量为500 mg/kg时，母貂血清T-SOD活性开始降低，表明母貂机体抗氧化能力出现下降。DHA-S作为防腐保鲜剂时，动物采食后能够很快被机体吸收，并分布到血液和器官组织中[13]。当仔猪日粮中添加0~0.2% DHA-S时，随着DHA-S添加量增加，仔猪血清T-AOC呈降低趋势[11]，与本试验结果相似。推测原因可能是动物摄入DHA-S后，DHA-S能够抑制机体内多种酶的活性[8]，其中可能包括机体内的抗氧化酶；或者DHA-S导致有关维生素K循环的酶类发生变性失活，凝血机制受损，各组织和器官出血[14-16]，进而导致机体应激，抗氧化能力下降。研究表明，DHA-S在育成期水貂日粮中添加量应该低于500 mg/kg。3.2DHA-S对育成期水貂肝脏抗氧化指标的影响在稳定情况下，动物机体内自由基的产生和清除处于一个平衡稳定的状态。当机体所处的外界环境发生改变或自身应激时，机体会产生大量自由基，破坏上述平衡，会对机体造成一定的负面作用[17]。动物的肠道和肝脏等器官在机体对营养物质的消化、吸收和利用方面起重要作用。机体内自由基能够导致自身生物膜产生MDA，其含量与机体受损程度呈正相关[18]。本试验结果表明，当DHA-S添加量为1 000 mg/kg时，母貂肝脏MDA含量显著高于其他组，公貂肝脏CAT活性显著低于其他组；当DHA-S添加量在500~1 000 mg/kg时，公貂肝脏MDA含量显著高于0~250 mg/kg DHA-S添加组。高剂量的DHA-S会对动物机体内多种酶的活性产生负面影响[19]，推测可能是高剂量DHA-S能够抑制水貂机体内抗氧化酶的活性，从而导致水貂的抗氧化能力下降。此外，也可能是因为不同剂量的DHA-S会引起大鼠和家兔肝脏等脏器出现不同程度的出血[20]，对机体肝脏造成应激，使肝脏抗氧化能力下降。肝脏MDA含量升高，机体内氧化与抗氧化动态平衡被破坏，导致机体内自由基堆积，加剧了肝脏等脏器的损伤。李柯汝等[1]研究表明，DHA-S的添加量为250 mg/kg时，对夏季水貂鲜配合饲料保鲜效果最好。研究表明，水貂日粮中DHA-S添加量达到500 mg/kg时，会导致水貂的抗氧化能力出现不同程度的下降，为使DHA-S达到较好保鲜防腐效果而且不影响水貂抗氧化能力，建议DHA-S在育成期水貂日粮中的添加量为250 mg/kg。4结论本研究结果表明，当育成期水貂日粮中DHA-S添加量达到500 mg/kg时，会降低其抗氧化能力。因此，为使水貂抗氧化能力保持稳定不受影响，建议育成期水貂日粮中DHA-S的添加量为250 mg/kg。