近年来，抗生素的长期大量使用造成畜产品药物残留、病原菌耐药性加剧、畜禽抗病能力下降、环境污染等问题。农业农村部2019年第194号文规定，2020年1月1日起，全国退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种。在饲料端“禁抗”，养殖端“减抗、限抗”的新形势下，选择合理替抗方案，寻找合理替代抗生素的绿色饲料添加剂迫在眉睫。茶皂素（tea saponin）也称为茶皂苷，属于五环三萜类结构化合物[1]。其分子结构中含有疏水基和亲水基，多存在于山茶科植物，主要提取来源为茶花油的副产物油茶饼[2]。茶皂素作为一种植物源性提取物，因具有无公害、纯天然、残留少等特点而被广泛应用于动物生产中。研究表明，茶皂素具有提高动物免疫机能[3]、杀虫[4-5]、抗氧化、吸水[6]、抗炎镇痛[7]、抗真菌[8]等作用。茶皂素具有调节反刍动物瘤胃发酵、减少甲烷排放、提高机体健康和生产性能、提高饲料转化效率等作用[9-13]。目前，茶皂素在牛、羊、肉鸡中的应用研究较多，但其对于蛋鸡的影响国内外尚未见报道。本试验从开发新型饲料添加剂和功能性安全食品的角度出发，拟研究茶皂素对产蛋鸡产蛋性能、蛋品质和养分利用率的影响，并筛选适宜添加剂量，为蛋鸡实际生产中茶皂素的使用提供参考。1材料与方法1.1试验材料茶皂素（皂苷含量≥65%）购自武汉远成共创科技有限公司。1.2试验日粮基础饲粮（粉状配合饲料）依据美国NRC（1994）蛋鸡营养需要，并结合我国鸡饲养标准（NY/T 33—2004）配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.009.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米61.00代谢能/(MJ/kg)11.51豆粕25.00粗蛋白质/%16.20豆油0.35赖氨酸/%0.73石粉8.30蛋氨酸/%0.36食盐0.35钙/%3.50预混料5.00总磷/%0.60注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 25 IU、VK 32 mg、VB1 2 mg、VB2 6 mg、VB6 3 mg、VB12 0.02 mg、烟酸30 mg、泛酸钙12 mg、叶酸1.5 mg、生物素0.16 mg、Mn 70 mg、Fe 80 mg、Cu 8 mg、Zn 75 mg、I 0.8 mg、Se 0.3 mg、NaCl 3.6 g、CaHPO4 16 g、DL-Met 1 g、氯化胆碱400 mg。2.营养水平指标中的代谢能、粗蛋白质、钙、总磷含量为实测值，其余为计算值。1.3试验设计与饲养管理将600只40 周龄健康的海兰褐商品蛋鸡随机分成4组，每组6个重复，每个重复25只鸡。以基础饲粮饲喂对照组，试验组在基础饲粮中添加分别添加100、200、300 mg/kg的茶皂素。预试期7 d（各组均饲喂基础饲粮），正式试验期56 d。试验蛋鸡采用上、中、下3层阶梯式笼养，各重复均匀分布于鸡舍同列各层，采用自然加人工补光，每天恒定光照16 h，强度为14 Lx。饲喂干粉料，自由采食，每天8：00、14：30各喂料1次，匀料4次；乳头式饮水器，自由饮水。按照常规程程序进行免疫，专人管理，每日捡蛋2次；每周带鸡消毒和清理鸡粪1次。每天观察鸡的精神状态，及时清理和记录死亡的鸡只。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间每天以重复为单位记录产蛋数、总蛋重和死亡鸡数，计算产蛋率、日采食量、平均蛋重和料蛋比。计算公式如下：产蛋率=统计期内总产蛋数/(供试蛋鸡数×统计期天数)×100%(1)平均蛋重=统计期内总蛋重/统计期内产蛋数(2)料蛋比=统计期内耗料量/统计期内总蛋重×100%(3)1.4.2蛋品质试验56 d时，各处理组连续采集3 d蛋样，每个重复随机选取接近平均蛋重的7枚鸡蛋进行蛋品质测定。哈夫单位、蛋白高度、蛋壳硬度、蛋壳厚度和蛋壳颜色采用以色列ORKA公司生产的系列鸡蛋品质测定仪进行测定。采用游标卡尺测量蛋的纵径与最大横径，并计算蛋形指数。蛋形指数=长径/短径(4)鸡蛋哈夫单位计算公式如下：Ha=100×lg(H+7.57-1.7×W0.37)(5)式中：H为蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。1.4.3养分利用率饲养试验期的最后连续3 d，采用内源指示剂法进行消化试验。早、晚以重复为单位，均匀采取新鲜粪样各约200 g（注意剔除毛屑杂物），将每重复收集后粪样分2份，一份按每100 g排泄物喷洒10%盐酸10 mL固氮备测粗蛋白质，其余粪样直接放置于（-20 ℃）冰箱保存，备测酸不溶灰分、粗灰分和钙磷。最后将连续3 d收集并冷冻保存的粪样解冻混匀，并在65 ℃条件下烘干至恒重，室温回潮24 h 后称重，再粉碎过40目筛，装袋密封，保存备测。按4 mol/L盐酸不溶灰分指示剂法测定饲粮的粗蛋白质、粗灰分、钙、磷的表观养分利用率。酸不溶灰分指示剂法参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[14]。养分利用率计算公式如下：营养物质利用率=1-(b/a×c/d)×100%(6)式中：a为饲粮中某养分含量值；c为饲料中酸不溶灰分含量；b为粪中某养分含量；d为粪中酸不溶灰分含量。1.4.4经济效益经济效益计算公式如下:经济效益=(总产蛋重×鸡蛋价格)-(总耗料量×饲料价格)(7)1.5数据统计与分析数据经Excel 2007软件进行初步统计与整理后，采用SPASS 20统计软件进行单因素方差分析和Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1茶皂素对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，随着茶皂素添加水平的增加，各组产蛋率和料蛋比均有不同程度改善。与对照组相比，100、200、300 mg/kg茶皂素组蛋鸡的产蛋率分别提高0.74%、2.92%、2.44%（P0.05）；料蛋比分别降低1.33%、4.83%、4.61%（P0.05），200、300 mg/kg两组之间差异不显著（P0.05）。200 mg/kg组的平均蛋重较对照组、100 mg/kg组显著提高（P0.05）。饲粮中添加不同水平的茶皂素对蛋鸡的平均日采食量和合格蛋率均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.009.T002表2茶皂素对蛋鸡生产性能的影响项目对照组100 mg/kg茶皂素组200 mg/kg茶皂素组300 mg/kg茶皂素组平均日采食量/(g/d)117.84±1.36117.43±1.52116.47±2.70115.62±1.33产蛋率/%80.09±0.20c80.69±0.29b82.44±0.38a82.05±0.35a料蛋比2.36±0.31a2.33±0.31a2.24±0.56b2.25±0.23b平均蛋重/(g/d)62.42±0.19a62.58±0.29a62.99±0.23b62.67±0.29ab合格蛋率/%99.93±0.5899.95±0.4799.92±0.7299.98±0.29注：同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P0.05），不同字母表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2茶皂素对蛋鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，100、200、300 mg/kg组的蛋白高度和哈夫单位均有不同程度提高（P0.05），但各试验组间无显著差异（P0.05）。饲粮中添加不同水平的茶皂素对鸡蛋的蛋壳厚度、蛋形指数、蛋壳颜色、蛋壳强度均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.009.T003表3茶皂素对蛋鸡蛋品质的影响项目对照组100 mg/kg茶皂素组200 mg/kg茶皂素组300 mg/kg茶皂素组蛋白高度/mm5.48±0.48b6.00±0.21a6.20±0.23a6.15±0.17a哈夫单位71.48±4.01b75.68±1.52a77.03±1.67a76.80±1.39a蛋形指数1.27±0.011.26±0.011.26±0.031.27±0.02蛋壳厚度/mm0.37±0.040.35±0.030.34±0.030.35±0.04蛋壳强度/(N/kg)35.58±2.5035.24±2.0035.07±2.4235.63±5.42蛋壳红度6.85±1.096.01±1.516.03±1.847.00±2.53蛋壳黄度22.38±2.2620.18±3.1120.05±2.4121.80±4.78蛋壳亮度80.20±1.5281.51±2.4581.32±2.6279.42±4.602.3茶皂素对蛋鸡养分利用率的影响（见表4）由表4可知，随着茶皂素添加水平的增加，粗蛋白质、粗灰分、钙、磷的利用率均呈不同程度的提高趋势。与对照组相比，100、200、300 mg/kg组蛋白质利用率提高7.46%、6.41%、7.58%（P0.05）；粗灰分利用率提高17.00%、23.71%、18.45%（P0.05）。200、300 mg/kg组钙的利用率提高17.38%、14.59%（P0.05），磷的利用率提高16.46%、12.47%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.009.T004表4茶皂素对蛋鸡养分利用率的影响项目对照组100 mg/kg茶皂素组200 mg/kg茶皂素组300 mg/kg茶皂素组粗蛋白质55.66±2.78b59.81±2.22a59.23±3.29a59.88±2.80a粗灰分39.94±2.26b46.73±5.31a49.41±1.68a47.31±2.38a钙44.89±3.05b48.37±5.41ab52.69±3.24a51.44±3.52a磷41.14±3.14b44.20±4.85ab47.91±2.08a46.27±1.90a%2.4茶皂素对蛋鸡经济效益的影响（见表5）饲料价格和鸡蛋价格依据试验全期市场平均价格，茶皂素价格为65元/kg，鸡蛋价格为8.2元/kg。由表5可知，饲粮中添加茶皂素8周后，在经济效益方面，100、200、300 mg/kg茶皂素组比对照组分别提高4.37%、17.45%和14.26%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.009.T005表5茶皂素对蛋鸡产蛋经济效益的影响项目对照组100 mg/kg茶皂素200 mg/kg茶皂素300 mg/kg茶皂素鸡数/只150150150150总产蛋重/kg419.96424.15436.15431.96总耗料量/kg989.84986.43978.31971.17饲料价格/(元/kg)2.702.712.732.74鸡蛋价格/(元/kg)8.28.28.28.2经济效益/元771.10804.80905.64881.07增加百分比/%04.3717.4514.263讨论3.1茶皂素对蛋鸡生产性能的影响茶皂素作为植物源提取物，不仅是绿色无污染的表面活性剂，而且具有广泛的生物活性，可提高动物的生产性能[9]。张继忠[15]研究发现，半胱胺、糖萜素和复方螺旋藻提取物组合使用可有效改善早期断奶八眉仔猪的生长性能，提高成活率和经济效益。郝媛华[11]报道，日粮中添加20、30 g/d茶皂素的奶牛，产奶量有增加的趋势。叶均安[13]研究发现，在湖羊日粮中加入适量茶皂素可促进其生长。禹琪芳等[16]研究认为，日粮中添加茶皂素可使广西麻鸡的产蛋率明显提高，不合格蛋数显著降低，400 mg/L组能显著提高十二指肠免疫球蛋白A和防御素含量；茶皂素的添加可显著提升雪峰乌骨鸡的日增重和采食量[17]。在肉仔鸡饲粮中添加300、400 mg/kg茶皂素后，肉仔鸡料重比显著降低，添加500 mg/kg时，料重比极显著降低[18]。陈宝江等[19]研究发现，给绿壳蛋鸡饲喂含油茶皂苷的日粮可明显提高产蛋率，降低料蛋比，显著提高平均蛋重。本试验结果表明，在40周龄海兰褐蛋鸡饲粮中添加100、200、300 mg/kg的茶皂素均可显著提高产蛋率，并且添加200~300 mg/kg的茶皂素可使料蛋比显著降低。200 mg/kg的茶皂素使蛋鸡的平均蛋重显著提高，与上述研究结果类似。究其原因，可能是因为茶皂素属于三萜类皂角苷[19]，蛋鸡的卵巢可被三萜皂苷类物质所刺激，因而产卵增多，产蛋率增加。蛋鸡体内的营养物质和蛋白质的吸收也会被三萜皂苷类所促进，使蛋鸡食欲增强，对营养物质的消化率提高，蛋重和饲料利用率也相应提高。李静姬等[20]研究发现，鸡脑干中，多巴胺、去甲肾上腺素的量会在三萜皂苷类的作用下增大，这两种物质含量增加就会引起cAMP/cGMP活性增强，进而使鸡对营养物质的利用率和吸收增强。营养物质的吸收增强，就会使饲料的消耗减少，料蛋比降低。此外，饲喂茶皂素后，蛋鸡的生产性能提高，也可能与茶皂素增强机体的免疫功能有关。常肖肖等[21]报道，茶皂素可提高奶牛的免疫功能。李静姬等[20]研究发现，三萜皂甙类能促进雏鸡免疫器官的生长发育，改善鸡群健康状况。此外，葛洪伟等[22]试验表明，茶皂素对降低种鸡不合格蛋数具有明显效果，而本试验中则发现，不同剂量的茶皂素对合格蛋率并无显著影响，可能和所选蛋鸡品种不同，饲养条件和茶皂素添加量不同有关。3.2茶皂素对蛋品质的影响蛋白高度和哈夫单位是评定鸡蛋新鲜程度的重要指标[23]。张俊妍等[24]研究发现，三萜皂苷类物质的添加有增高蛋白质高度和哈夫单位的趋势。本试验结果表明，在海兰褐蛋鸡的饲粮中加入茶皂素会使蛋白高度和哈夫单位显著提高，与前人研究结果相似。因此，蛋鸡饲粮中茶皂素的添加有利于鸡蛋的保鲜以及提高鸡蛋中的营养物质水平。而蛋白高度和哈夫单位的提高可能与蛋鸡的抗氧化能力增强有关。禹琪芳[25]研究发现，茶皂素可提高蛋鸡的抗氧化能力。蛋形指数是评价禽蛋质量的重要指标之一，将直接影响种蛋的孵化率、健雏率等生产指标[26]。蛋壳强度和蛋壳厚度是影响蛋壳质量的主要因素，蛋壳质量对蛋鸡养殖效益的影响非常大，80%~90%的破损蛋通常要降级处理[27]。Duman等[28]研究认为，蛋形指数是决定鸡蛋品质的重要指标。形状异常的鸡蛋在运输中因不便包装更容易破碎，且蛋形指数对于鸡蛋的某些特定品质如蛋白高度、哈夫单位、蛋壳颜色的影响均有统计学相关性。葛洪伟等[29]研究发现，饲料中添加三萜类皂苷能改善鸡蛋的蛋形指数和蛋壳强度。本试验中，添加不同水平的茶皂素对蛋鸡的蛋形指数均无显著影响，与上述结果不同。究其原因，可能与蛋鸡品种、饲养管理不同有关，其具体原因需要进一步研究。本试验中添加300 mg/kg的茶皂素会使蛋壳强度有所改善。原因可能是300 mg/kg茶皂素显著促进蛋鸡对钙的吸收。蛋壳的颜色主要取决于母鸡的基因型，茶皂素无法改变母鸡的基因型，因而本试验中蛋壳的颜色变化无显著差异。3.3茶皂素对蛋鸡养分利用率的影响皂苷类物质可以明显提高动物的养分消化率。研究发现，羔羊营养物消化率随饲料中添加苜蓿皂苷剂量的增大而增大，其中干物质消化率、粗蛋白消化率和酸性洗涤纤维消化率均提高[30]。王彦华等[31]发现，在断奶仔猪的饲粮中加入0.5%和1%的苜蓿皂苷极显著提高粗脂肪消化率，0.5%的苜蓿皂苷可显著提高其粗灰分、钙和总磷的消化率。冯志华等[32]发现，蒺藜皂苷可促进奶牛瘤胃中营养物质的降解。本试验与上述试验结论一致。在海兰褐蛋鸡的饲粮中加入100 mg/kg的茶皂素，可显著提高蛋鸡对粗蛋白质、粗灰分和钙的利用率，加入200 mg/kg的茶皂素可显著提高总磷的利用率。此外，茶皂素还与糖萜素具有类似的化学结构。而陈宝江等[19]研究发现，糖萜素可使动物体内的有益菌群大量繁殖，这些有益菌又会产生许多酸性物质来降低肠道内的pH值，改善肠道健康，增加蛋鸡的养分利用率。3.4茶皂素对蛋鸡经济效益的影响本试验经济效益分析仅考虑饲料成本，不考虑其他因素。试验组添加100 mg/kg茶皂素时经济效益比对照组提高4.37%、200 mg/kg添加量时比对照组多盈利17.45%、300 mg/kg添加量时比对照组多盈利14.26%。在本试验条件下，以200 mg/kg添加量效果较佳。4结论本试验研究表明，在海兰褐蛋鸡的基础饲粮中加添加适量茶皂素可明显提升其生产性能、饲料养分利用率，改善蛋品质，提高经济效益。在本试验条件下，蛋鸡日粮中茶皂素适宜添加量为200 mg/kg。