长期使用抗生素给我国的畜禽生产及人类健康造成严重影响[1-4]。中草药具有良好的药用功能，且不会产生不良隐患[5-6]，因此，有可能成为饲用抗生素的良好替代。连翘是一种常用的中草药，具有清热解毒及散结消肿等功能[7]，可用于治疗发热、流感等症[8]；青风藤的主要药用成分中的青藤碱对抗炎、镇痛及调节免疫等均具有良好功效[9]；而木蝴蝶含有的黄酮类、酚类及有机酸等活性物质，也具有抗炎、抗菌、抗氧化和抑制病毒等多种药理作用[10]；用连翘和青风藤等组成的复方制剂具有良好的抗炎作用[11]；连翘、青风藤等组成的中草药添加剂饲喂鸵鸟时，能促进其生长、降低料重比和死亡率[12]，但类似的中草药组方在畜禽上的应用此后未见报道。试验研究用连翘、青风藤、木蝴蝶等6味中草药组成添加剂饲喂广西三黄鸡，观察其对血常规、免疫及抗氧化性能的影响，为寻求更好的饲用抗生素替代方案提供参考。1材料与方法1.1试验药物“连藤”中草药添加剂（以下简称“连藤”添加剂）是由连翘、青风藤、木蝴蝶、黄花败酱草等6味中草药按一定比例组成，由广西桂学药业有限公司提供，经粉碎过100目筛后，装袋备用，用时按试验设计比例拌料饲喂。1.2试验日粮及营养水平基础日粮由广西大富华农牧饲料有限公司生产提供（配方保密），15 d前喂鸡花料，16~35 d喂小鸡料，35 d后喂中鸡料。基础日粮营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.010.T001表1基础日粮营养水平营养水平鸡花料小鸡料中鸡料粗蛋白质≥20.0≥19.5≥17.0粗纤维≤5.0≤5.5≤5.5粗灰分≤8.0≤9.0≤9.0钙0.6~1.50.6~1.50.6~1.5总磷≥0.6≥0.5≥0.5食盐0.2~0.80.2~0.80.2~0.8蛋氨酸≥0.48≥0.45≥0.40水分≤13.0≤13.0≤13.0%1.3试验动物、设计及饲养管理试验在广西区畜牧研究所养鸡试验基地进行。试验用1 d龄广西三黄鸡480羽，由广西金陵农牧集团有限公司提供；试验采用单因子完全随机设计，将试鸡随机分为A、B、C、D 4组，每组6个重复，每重复20羽；其中D组为对照组，饲喂基础日粮；A、B、C 3个试验组的基础日粮中分别添加0.1%、0.2%和0.4%“连藤”添加剂，试验期70 d。期间按生产常规进行管理和免疫，1~21 d龄的试鸡笼养于育雏室（装备有自动控温系统）；1 d时开始饲喂试验日粮，每天分别在8：00和15：00时投喂饲料，自由采食和饮水。1.4测定指标和方法试验21、35和49 d，分别从每组中随机抽取6羽试鸡（1羽/重复）进行翅下静脉采血，分离血清，并保存于-20 ℃。血液生化、免疫及抗氧化指标的测定包括：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、血清葡萄糖（GLU）)、总胆固醇（TC）、和尿素氮（BUN）等（由广西瑞康医院检测）；白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）、免疫球蛋白-M（IgM）、免疫球蛋白-G（IgG）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽（GSH）含量和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性等（用南京建成赛浩科技有限公司生产的相应试剂盒检测）。1.5数据统计与分析采用SPSS 16.0软件进行数据处理和单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan氏法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清生化指标的影响（见表2）由表2可知，49 d时A组的血清GLU含量显著高于B、C、D组（P0.05），但B、C两组与D组相比并无显著差异（P0.05）。35 d时，A、B两组的ALB含量均极显著高于D组（P0.01），且在49 d时，B组也显著高于D组（P0.05），但A、C两组较D组并无显著差异（P0.05）。试验表明，日粮添加0.2%的“连藤”添加剂时，能显著提高35和49 d时鸡的ALB含量；其他血清生化指标在3个不同阶段中，A、B、C组与D组之间均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.010.T002表2“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清生化指标的影响项目日龄/dA组B组C组D组GLU/(mmol/L)2111.85±0.1711.91±0.2711.87±0.2812.27±0.403513.08±0.2511.93±0.5312.75±0.5312.91±0.404914.18±0.33b13.43±0.32a12.98±0.24a13.05±0.25aTG/(mmol/L)210.32±0.030.28±0.010.32±0.030.34±0.01350.31±0.010.36±0.050.29±0.010.29±0.01490.34±0.010.35±0.010.36±0.030.35±0.02TP/(g/L)2128.90±0.8429.53±0.6529.51±1.9329.65±0.443531.20±0.4730.53±0.2431.88±0.5531.23±0.984935.78±0.50ab36.20±0.37b35.03±0.98a35.88±0.18abALB/(g/L)2117.03±0.7317.74±0.4716.63±1.0418.03±0.653519.48±0.31c20.40±0.54c17.29±0.50ab16.90±0.74a4917.91±0.73ab19.90±0.34c16.74±0.53a17.75±0.47abTC/(mmol/L)212.83±0.232.87±0.092.87±0.172.93±0.10352.58±0.022.59±0.122.73±0.062.70±0.23492.79±0.023.02±0.042.78±0.132.81±0.05BUN/(mmol/L)210.94±0.060.97±0.050.96±0.070.89±0.03350.65±0.010.71±0.070.65±0.030.60±0.03490.43±0.020.42±0.020.39±0.010.38±0.02注：同行数据肩标相邻小写字母表示差异显著（P0.05），相间小写字母表示差异极显著（P0.01）；无字母或字母相同表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清免疫指标的影响（见表3）由表3可知，49 d时A组的IgM含量显著低于D组（P0.05），但B、C组与D组相比并无显著差异（P0.05）。49 d时，A、B组的IL-2含量均显著高于D组（P0.05）。然而，此两指标含量在21和35 d以及IgG和IFN-γ含量在3个不同阶段中，A、B、C试验组与D组之间均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.010.T003表3“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清免疫指标的影响项目日龄/dA组B组C组D组IgG/(g/L)214.34±0.264.38±0.144.04±0.244.17±0.26355.12±0.104.67±0.174.80±0.234.72±0.18494.69±0.064.56±0.154.92±0.214.80±0.12IgM/(g/L)211.28±0.041.34±0.021.30±0.051.31±0.05351.45±0.031.35±0.041.39±0.071.40±0.05491.31±0.05a1.36±0.03ab1.37±0.07ab1.45±0.03bIFN-γ/(U/L)21123.87±5.17127.96±3.10122.96±4.65124.91±4.6435145.17±3.78135.87±3.51138.50±5.97140.21±5.6249131.00±3.54a130.10±3.52a137.29±6.26b134 .20±2.82abIL-2/(U/L)2120.48±1.1020.22±0.8721.22±1.3321.14±1.513516.51±0.8518.50±1.1218.04±1.9317.53±1.714921.03±1.73b20.66±1.11b19.27±1.74ab16.32±0.70a2.3“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，21 d时，A、B、C试验组的T-AOC与D组相比并无显著差异（P0.05），然而在35 d时，B组却显著高于D组（P0.05），尤其在49 d时，A、B、C试验组均高于D组，且差异极显著（P0.01）；21和35 d时，A、B、C组的GSH活性与D组相比虽无显著差异（P0.05），但于49 d时，A、B两组均极显著高于D组与C组（P0.01）；21 d时，B组的T-SOD活性虽有高于D组的趋势，但差异不显著（P0.05），然而在35 d时，B组和C组均明显高于D组，且差异显著（P0.05）；49 d时，A组试验鸡的T-SOD活性显著低于D组（P0.05），但B、C两组与D组相比并无显著差异（P0.05）。试验表明，日粮添加3种不同水平的“连藤”添加剂，均可在不同程度上提高试鸡的抗氧化性能，且相比之下，应以0.2%添加量效果为最好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.010.T004表4“连藤”添加剂对广西三黄鸡血清抗氧化指标的影响项目日龄/dA组B组C组D组T-AOC/(U/mL)210.83±0.030.79±0.020.82±0.020.85±0.05350.65±0.01a0.76±0.01b0.71±0.02ab0.66±0.05a490.74±0.02c0.77±0.03c0.69±0.04bc0.60±0.01aGSH/(μmol/L)2131.07±4.5329.09±5.1730.76±5.1131.41±2.553521.89±1.4121.52±1.9221.37±2.1921.02±3.144931.68±2.51c29.37±1.18c19.44±0.87a18.83±1.58aT-SOD/(U/mL)21278.68±11.35a314.17±11.26b284.36±2.10ab293.14±11.12ab35348.02±3.63ab355.20±4.14b353.42±4.46b332.49±9.94a49352.58±11.66a362.08±13.15ab372.65±8.03b374.68±4.63 b2.4试验期间试验鸡死亡情况（见表5）由表5可知，试验期间，3个试验组的试鸡死亡率均低于对照组，B组和C组死亡率仅为D组的50%，且B组的死亡仅发生在21 d前，21 d后再无试鸡的死亡发生。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.010.T005表5试验期间试验鸡死亡情况项目A组B组C组D组1~21 d431322~35 d101150~70 d00121~70 d5336死亡率/%4.172.502.505.00成活率/%95.8397.5097.5095.00羽3讨论3.1“连藤”添加剂对广西三黄鸡血液生化及免疫性能的影响本试验中，日粮中添加3种水平的“连藤”添加剂对试鸡的主要血液生化指标没有明显影响，但0.2%的添加量显著提高35和49 d时试鸡的ALB含量，明显提高49 d时血清IL-2含量。血清ALB不仅具有维持机体组织的胶体渗透压和血管内皮的完整性，能与多种内源性和外源性化合物结合而起到重要的生理作用，具有良好的抗炎及消除体内自由基的作用[13-14]；而IL-2是经由活化的淋巴T细胞所产生的细胞因子，可以促进T细胞的增殖与分化，增强T细胞和NK细胞活性，通过促进T细胞的活化与增殖增强机体的免疫功能，诱导干扰素的产生以及辅助抗体的生成。因此，机体的IL-2水平标志着机体免疫性能的高低[15-16]。本试验中，日粮中添加0.2%的“连藤”添加剂时能提高35和49 d试鸡的ALB含量以及49 d的IL-2含量。试验表明，日粮添加0.2%的水平可在一定程度上提高试鸡的生理机能及免疫性能。3.2“连藤”添加剂对广西三黄鸡抗氧化能力及死亡的影响本试验中，3种“连藤”添加剂的添加量均能显著提高试验鸡49 d时的T-AOC。此外，0.2%的添加量能明显提高35 d时的T-AOC以及49 d时血清GSH的含量和35 d时T-SOD的活性。试验表明，3种不同的添加水平均可在一定程度上提高试鸡的抗氧化能力，但应以0.2%的添加量对试鸡抗氧化能力的提高效果为最好。机体的T-AOC是机体内抗氧化酶系统和非酶系统对自由基代谢的总体反映，能够显示机体抗氧化能力 [17-18]。而GSH具有抑制和清除自由基及过氧化物的作用，是机体细胞内最重要的非酶类抗氧化物质[19-23]。超氧化物歧化酶（SOD）能够清除生物氧化过程中的超氧阴离子，消除超氧阴离子自由基对机体的损害，被认为是抗氧化系统的第1道防线[24]，因此，SOD活性可以代表机体清除自由基的能力[25]。本研究中，0.2%的“连藤”添加剂水平能够显著提高试鸡血清的T-AOC、GSH的含量和T-SOD的活性。试验表明，0.2%的添加量能够提高试鸡的抗氧化能力，原因可能是与本添加剂中各种中草药组分所含有的生物活性物质有关。含有黄酮、多糖、多酚类、生物碱、挥发油和有机酸等成分的中草药通常能够提高肉仔鸡的T-AOC和SOD活性，增强鸡的抗氧化能力[26-30]。而“连藤”添加剂中的连翘、青风藤、木蝴蝶、黄花败酱草等均分别含有1种或1种以上这样的活性物质[8,31,9-10]。本试验中，日粮中添加“连藤”添加剂能不同程度提高试鸡的抗氧化能力，而且以0.2%的添加量效果最好。采食“连藤”添加剂的试验鸡死亡率均低于对照组，尤其是采食0.2%添加量的B组，死亡率仅为对照组的50%，且死亡仅发生在21 d前，可能因为21 d后添加剂所起的作用逐步提高试鸡的抗氧化能力和免疫力，提高抗病力而降低死亡率。因此，B组试验鸡死亡率明显降低可能与试鸡的免疫力和抗氧化能力的显著提高有关。4结论“连藤”添加剂的3种添加水平对试鸡的主要血清生化指标没有明显影响，但0.2%的添加量显著提高35和49 d时的血清白蛋白含量。日粮添加3种水平的“连藤”添加剂可在不同程度上提高试验鸡的免疫性能与抗氧化能力。相比之下，以0.2%的添加量作用效果为最好。