发酵全混合日粮（FTMR）是将粗饲料、精饲料和必需矿物质等各类饲料原料与发酵菌剂充分混合发酵制成的营养全面均衡、能够长期保存的优质日粮[1-2]。经过发酵后的饲料原料粗蛋白含量和能量较高，适口性好，利于非常规饲料资源的开发利用[3-4]。酿酒酵母是饲料发酵常用的微生物添加剂[5]，能够提升饲料原料的饲用价值，促进反刍动物瘤胃发酵，降低饲料原料内霉菌毒素等抗营养因子的含量[6-7]。FTMR的应用既能够满足动物的营养需求，也利于推动非常规饲料资源的开发利用。FTMR质量受菌种组合、底物含水量以及发酵时间和温度等多方面因素的影响[8-10]。酵母菌、乳酸菌、芽孢杆菌、曲霉属益生菌等有益菌的合理组合能够有效提高饲料的发酵效果[11-12]。底物含水量会直接影响微生物生长[13]，发酵时间和温度也会对发酵最终结果产生一定影响[14-15]。本试验前期已筛选出FTMR最佳固体发酵菌种组合：酿酒酵母+产朊假丝酵母+德式乳杆菌乳酸亚种+枯草芽孢杆菌+黑曲霉+米曲霉[12]。优化FTMR发酵工艺对提高FTMR质量以及在反刍动物的应用具有重要意义。因此，本试验旨在优化FTMR发酵工艺，探究其对大足黑山羊断奶羔羊生长性能的影响，为FTMR在肉羊生产中的广泛应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验采用本课题组前期筛选出的FTMR最佳固体发酵菌种配方（酿酒酵母+产朊假丝酵母+德式乳杆菌乳酸亚种+枯草芽孢杆菌+黑曲霉+米曲霉），酿酒酵母和产朊假丝酵母在饲料中的添加量为0.86%，其他菌种的添加量为0.43%）[12]。FTMR日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T001表1FTMR日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米35.00消化能/(MJ/kg)10.92麦麸2.00粗蛋白/%13.78甜高粱37.20粗脂肪/%2.71豆粕4.00中性洗涤纤维/%24.37苜蓿草粉20.00酸性洗涤纤维/%13.24磷酸氢钙0.25粗灰分/%6.50食盐1.00钙/%0.58石粉0.05总磷/%0.43小苏打0.50注：营养水平参考《中国饲料营养成分价值表 2020年第31版》计算得出。试验中微量元素预混料为进口黄洛奇矿物质微量元素营养舔砖，购自泰邦公司，具体成分见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T002表2黄洛奇矿物质微量元素营养舔砖成分含量项目钴/(mg/kg)铁/(mg/kg)锰/(mg/kg)硒/(mg/kg)锌/(mg/kg)碘/(mg/kg)钠/%镁/(mg/kg)灰分/%水分/%含量70~130150~250375~62519.5~40.5750~1 250112.5~187.534.2~41.8750~1 25099≤11.2FTMR工艺优化1.2.1试验设计选取不同底物含水量（45%、50%和55%）和发酵时间（2、3和4周）优化FTMR发酵工艺，检测饲料中主要营养成分真蛋白（TP）和中性洗涤纤维（NDF）含量，于发酵第4周检测不同水分组的pH值。FTMR生产试验在重庆腾达牧业股份有限公司进行。采用与课题组前期相同的20 t TMR[12]饲料混合，装入青贮专用塑料袋中（50 kg规格）在室温条件下，使用1.1所述菌种配方进行发酵处理，发酵处理21和90 d，检测FTMR中的主要营养成分TP、NDF、酸性洗涤纤维（ADF）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）、钙（Ca）和磷（P）以及黄曲霉毒素、呕吐毒素含量。1.2.2测定指标及方法采用张丽英[16]方法，凯氏定氮法测定FTMR中真蛋白（CP）含量，采用GB/T 20806—2006、GB/T 6434—2006测定NDF和ADF含量，采用GB/T 6433—2006测定EE含量，采用GB/T 6438—2007方法测定Ash含量，采用GB/T 6436—2018，采用GB/T 6437—2018测定Ca和P含量。采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验测定饲料中的呕吐毒素、黄曲霉素含量，具体操作步骤参照说明书进行，pH值使用Sartorius pH计（PB-10）测定，具体方法参考韩燕国等[12]的方法。1.3羔羊饲养试验1.3.1试验设计选取30头日龄相近、体重（13.07±0.50）kg大足黑山羊断奶羔羊（雌性）随机分为2组，每组3个重复，每个重复5只羊。采用舍饲饲养方式，试验Ⅰ组羔羊饲喂FTMR，试验Ⅱ组羔羊饲喂TMR。预试期1周，正式试验期7周。羔羊每日饲喂2次（8：00、15：00），自由采食和饮水。1.3.2生长性能测定试验期间记录羔羊体重、采食量和发病情况，计算平均日增重、平均日采食量、料重比和发病率。平均日增重=试验期内总增重/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件进行整理，SAS 9.4软件进行独立样本t检验。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同含水量和发酵时间对FTMR的NDF、TP和pH值的影响（见表3）由表3可知，在相同水分含量下，FTMR的NDF和TP含量随着发酵时间的延长逐渐提高；在相同发酵时间条件下，FTMR的NDF和TP含量随着含水量的增加而逐渐提高。发酵第4周，不同含水量的FTMR pH值均在5.0以上，降低了瘤胃酸中毒的风险。综合考虑饲料中对较高TP和较低NDF的需求以及运输成本，选择50%含水量、发酵3周进行FTMR的制作。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T003表3不同含水量和发酵时间对FTMR的NDF、TP和pH值的影响含水量/%时间/wNDF/%TP/%pH值45220.40±0.90e13.17±0.66d—321.41±1.15de14.21±0.96bcd—427.41±1.06b15.20±1.37abc5.25±0.3550221.76±0.83de14.02±0.40cd—322.83±1.44cd15.14±0.93abc—428.86±0.82ab15.97±1.45abc5.35±0.6555222.87±0.54cd14.55±0.39bcd—324.09±1.56c16.01±0.97ab—430.14±0.82a16.89±1.37a5.08±0.26注：1.同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.“—”表述无数据。2.2FTMR发酵工艺的筛选（见表4、表5）由表4可知，随着发酵时间延长，FTMR的TP、NDF、ADF、EE、Ca、P含量均有所提高，发酵90 d时，上述营养指标含量均显著高于发酵21 d（P0.05），Ash含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T004表4发酵全混合日粮不同发酵时间的营养水平（干物质基础）项目发酵后21 d发酵后90 dTP14.57±0.25b17.39±0.12aNDF22.76±0.28b32.00±1.36aADF16.27±0.34b23.93±1.20aEE3.23±0.07b3.66±0.20aAsh7.38±0.12a6.74±0.02bCa0.51±0.01b0.55±0.01aP0.29±0.01b0.32±0.01a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%由表5可知，发酵处理21和90 d，FTMR黄曲霉毒素和呕吐毒素含量均远低于国家对饲料中毒素的限制水平。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T005表5发酵全混合日粮毒素含量的变化项目发酵21 d发酵90 d国标限量黄曲霉毒4.27±0.273.97±0.1710呕吐毒素46.97±1.6368.53±2.831 000μg/kg研究表明，FTMR在底物含水量50%，室温条件下进行发酵处理，随着发酵时间延长，会在一定程度上提高日粮营养成分，发酵90 d仍保持了较高的营养价值。2.3FTMR对断奶羔羊生长性能的影响（见表6）由表6可知，与TMR组相比，FTMR组断奶羔羊平均日增重提高了12.58%（P0.05），料重比显著降低12.63%（P0.05），发病率也明显低于TMR组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.21.002.T006表6FTMR对断奶羔羊生长性能的影响项目TMR组FTMR组初重/kg13.10±0.5613.04±0.44末重/kg18.17±0.6618.77±0.74平均日增重/[g/(只·d)]90.68±4.59b102.29±6.19a平均日采食量/[g/(只·d)]974.17±106.61959.81±100.89料重比10.77±0.54a9.41±0.55b发病率/%6.554.883讨论3.1FTMR发酵工艺条件优化分析含水量是影响发酵效果的关键，在FTMR生产中应严格控制饲料原料的含水量[4]。通过检测发酵后TMR的TP和NDF含量可以判定发酵工艺优良，NDF越多或TP越少，表明动物可以吸收利用的营养物质越少[17]。本研究中，综合考虑饲料中对较高TP和较低NDF的需求以及运输成本，选择50%含水量、发酵3周的工艺进行FTMR的制作效果较好。杨洁等[18]研究饲料油菜对FTMR的品质影响，发现FTMR的水分含量为50%~60%时发酵品质较好。马晓宇等[19]研究新鲜稻草发酵全混合日粮含水率的影响，发现含水率以40%和45%为宜。徐晓明等[20]混合羊草、青贮玉米和苜蓿草等，发现适宜含水量为45%和50%。因此，在饲料发酵过程中，50%的含水量符合发酵饲料的工艺条件优化，可使TP含量保持较高水平，且NDF含量较低。张志国等[21]研究添加复合益生菌对TMR发酵品质的影响，发现整个试验期内，复合益生菌组TMR各时间点3种霉菌毒素含量均未超标。也有研究发现，在发酵日粮中添加蜡样芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌复合物和枯草芽孢杆菌，可以在发酵初期消耗容器中的游离氧，快速降低pH值，限制有害菌生长，抑制物料腐败[22-23]。酵母菌前期增殖可以产生一定的酵母细胞壁，其吸附作用可控制样本中的霉菌毒素含量[24]。本试验结果显示，在室温下处理，随着发酵时间延长，FTMR的TP和NDF含量上升，毒素含量无显著变化。3.2FTMR对断奶羔羊生长性能的影响本试验结果表明，饲喂FTMR可显著提高肉羊平均日增重，降低料重比及发病率，与刘广华等[25]在日粮中添加微生态制剂，提高了小尾寒羊羔羊日增重的研究结果一致。吕仁龙等[26]研究发现，黑山羊采食FTMR后其采食量和平均日增重均有所改善。闫益波等[27]研究发现，与饲喂TMR相比，饲喂FTMR可以提高黑山羊采食量和日增重。马东升等[10]研究发现，添加酵母的FTMR组羔羊的生长速度优于未添加酵母的FTMR，且料重比降低。邱玉朗等[28]研究发现，FTMR组肉羊的平均日增重、料重比均优于TMR组。Song等[29]研究发现，在日粮中添加10、20 g/kg的酵母培养物，可提高黑山羊平均日增重，显著降低料重比。原因可能是酵母培养物中富含寡糖、消化酶、微量元素、氨基酸等营养物质，可以改善反刍动物瘤胃发酵环境，提高机体对营养物质的消化吸收，增强机体免疫力，进而降低发病率，提高动物生长性能[30-32]。在发酵过程中加入高活性菌种可以将粗硬的TMR饲料变得蓬松柔软，提高适口性，且酸香气味刺激反刍动物嗅觉，增强其食欲，提高饲料转化率，降低料重比。添加有益微生物可在生长繁殖过程中产生大量的生理活性物质，这些活菌和活菌的代谢产物进入反刍动物瘤胃，对瘤胃微生物区系具有促进作用，从而提高机体抵抗力，减少发病率[33]。4结论本研究结果表明，FTMR最佳发酵工艺为底物含水量50%、发酵时间3周。FTMR能够有效提升断奶羔羊的生长速度，降低料重比和发病率。