宠物疾病的诊断应以掌握犬、猫等宠物机体结构与生理功能、常用药物的特性与应用、宠物疾病诊断与治疗技术、宠物临床常见疾病诊治与预防等理论知识和技能为前提。从事宠物临床疾病诊断、治疗与预防和宠物疾病诊疗机构经营管理人员，除了应具备上述专业知识和基本技能外，还需要辨别种类繁多的宠物临床疾病。宠物疾病症状类似，仅依靠单一的问诊等方法很难确诊，必须结合实验室诊断技术才能快速、准确确诊疾病。在宠物诊疗过程中通过对宠物疾病实验室诊断技术的学习与应用，了解和掌握血常规检验、血液生化学检验、尿液检验、粪便检查、皮肤疾病检验、心电图检查、X线检查、内窥镜检查、B型超声波诊断等的检查方法和原理，学习相关仪器设备的使用，可为宠物疾病诊断提供有力保障。文章综述了临床常见的宠物疾病实验室诊断技术的应用，以期为宠物实验室疾病诊断提供参考。1血液检测项目在宠物临床中，血液的检测方法通常包括血液生化检查与血常规检查，两种方法在宠物临床疾病的诊断中都具有重要的参考价值。1.1血常规检测血常规检测包括定量检测结果（白细胞总数计数、白细胞分类计数、红细胞计数及指数、血小板计数及指数）和定性检测结果（血涂片形态学检查），可为宠物临床诊断、疗效的观察及疾病的预后等提供参考。通过血常规检查可以初步判断动物是否存在脱水、贫血、炎症和感染等情况，免疫功能是否正常，是否存在凝血和血液相关的疾病等。如通过观察血液中的红细胞、白细胞和血小板的数量变化及形态分布，判断相应的疾病[1]。当红细胞数量与血红蛋白计数、计量低于正常值，提示被检动物可能存在贫血情况，可帮助宠物医生进一步寻找贫血或患病的原因。具有免疫作用的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞统称白细胞，其中中性粒细胞对病原微生物发挥直接攻击作用。当中性粒细胞显著升高并出现明显核左移时，提示被检动物细菌感染的风险高，帮助宠物医生进一步检查被检动物的感染情况；淋巴细胞显著升高，提示被检动物病毒感染的风险高。血液常规检查提示动物感染疾病的情况见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.12.017.T001表1血常规检查指标提示动物感染疾病情况Tab.1Animal infectious diseases indicated by blood routine examination indexes项目简称升高提示疾病降低提示疾病白细胞总数WBC多数表现为细菌感染、中毒、组织坏死、急性出血和溶血、肾上腺皮质类固醇作用、白血病、恶性肿瘤晚期急性传染病初期及各种疾病垂危期、骨髓异常和淋巴肉瘤、白细胞成熟缺陷、脾脏功能亢进、非白血性白血病、放射物质、药物等淋巴细胞总数LYM病毒感染、慢性感染、淋巴细胞性白血病、肾上腺功能不足、血液寄生虫感染等症状使用肾上腺皮质激素、放射线、感染（立克次氏体弓形虫、病毒等）单核细胞数MON某些原虫（锥虫病、梨形虫等）、某些慢性疾病（结核、布病）、某些病毒性疾病（马传染性贫血）急性传染病的初期及各种疾病的垂危期中性粒细胞数量GRA急性感染性疾病、急性炎症及重症烧伤、创伤时；如出现再生性核左移，为骨髓造血功能增强；退行性核左移，为感染严重，机体抗病能力降低，核右移为骨髓造血功能减退、机体抗病能力减弱病毒性疾病及各种疾病危重期（脓毒性休克、胃肠破裂等）红细胞总数RBC相对增多：提示脱水、休克、烧伤等；绝对增多：红细胞增多症、慢性肺心病、肿瘤、心血管问题引起的代偿性增多等出血溶血、营养缺乏、恶性肿瘤、红细胞生成障碍、肝硬化等平均红细胞体积MCV网织红细胞增多、红细胞凝集缺铁性贫血、门静脉分流等平均红细胞血红蛋白含量MCH溶血、脂血症、机体脱水红细胞损失过多或生成不足、见于各种贫血平均红细胞血红蛋白浓度MCHC剧烈呕吐、腹泻、心脏相关疾病等主要见于小细胞低色素性贫血血小板总数PLT急性大出血及溶血后、真性红细胞增多、出血性血小板增多症、慢性粒细胞性增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤早期产生性减少、破坏亢进、消耗过多血小板压积PCT升高表示骨髓造血小板良好，但过高则可能是感染、失血、溶血、肿瘤等引起偏低时常见于一些血小板减少的疾病，见于骨髓造血功能不良、再生障碍性贫血等1.2血液生化检验血液中除红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白等固有成分外，还存在各种离子、糖类、脂类、蛋白质以及各种酶、激素和机体的多种代谢产物，上述指标称为血液生化指标。血液生化指标是反映动物内环境稳态、机体生理状态和健康状况的重要指标，对血液生化指标的检测也是疾病诊断及监控的重要评估手段[2]。动物血液生化检测包括肝功能、肾功能、心功能、血糖、血脂、电解质、胰腺和内分泌等。动物血液生化指标检测变化规律及提示情况见表2。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.12.017.T002表2动物血液生化指标检测变化规律及提示情况Tab.2Changes and hints of animal blood biochemical indicators项目简称部位升高提示疾病降低提示疾病谷丙转氨酶ALT肝脏、心脏和骨骼肌结核杆菌感染、创伤、运动剧烈、肺炎等；心脏相关疾病，如心肌炎、心力衰竭；胆囊炎、软组织损伤等；1%的肝细胞损伤即可使ALT升高一倍—谷草转氨酶AST存在于各组织细胞中，肌肉组织含量最高AST伴随肌酸激酶明显升高时，提示骨骼肌损伤或心脏疾病；肝脏严重损伤时，AST升高的比例高于ALT，升高比例越高，肝脏损伤越严重—总胆红素TBIL血清溶血性疾病、微生物感染引起间接胆红素过多；直接和间接胆红素升高的肝细胞性黄疸；胆囊炎、胆总管阻塞引起阻塞性黄疸；犬埃利希氏体、支原体感染、猫传染性腹膜炎缺铁性贫血或缺锌碱性磷酸酶ALP肝脏和骨骼中犬提示肝脏疾病、库欣氏综合征、使用糖皮质激素或抗癫痫药物；猫提示糖尿病、胆管炎、胆管性肝炎、肝脂变、甲亢等[3]犬甲状腺功能减退时，轻度下降续表2　动物血液生化指标检测变化规律及提示情况（Continued）Tab.2　Changes and hints of animal blood biochemical indicatorsXX.XXXX/j.issn.1672-9692.2022.12.017.T003项目简称部位升高提示疾病降低提示疾病肌酸激酶CK心肌和骨骼肌提示心肌、骨骼肌或脑组织病变—总蛋白TP肝脏脱水、中毒、休克、慢性感染、淋巴肉瘤、浆细胞瘤等[3]各种原因引起的白蛋白降低白蛋白ALB血浆急性重度脱水和休克合成不足：长期饥饿、营养不良等，或严重肝脏疾病；过度流失：肾小球病变、肾病、蛋白丢失性肠病、大量炎症性胸腹腔渗出等球蛋白GLB血液全身性慢性感染（全身性脓皮症、艾利希氏体、心丝虫、蠕形螨、慢性跳蚤过敏等；猫常见机体携带非自限性病毒时均可引球蛋白相同程度的升高）成年犬可能与慢性失血、蛋白丢失性肠病、重度肝病及肾病有关尿素氮BUN尿液肾前性：充血性心力衰竭、高热、休克、消化道出血、糖尿病、酮症酸中毒、严重肌肉损伤、高蛋白饮食等；肾中性：急慢性肾炎、先天多囊肾和肾肿瘤等；肾后性：尿路阻塞，如尿结石、难产、严重肝脏疾病等—肌酐CREA肌肉肾功能不全，严重感染、剧烈运动、糖尿病、生长激素过盛等妊娠晚期、严重营养不良、重度充血性心衰、应用雄性激素类药物血钙Ca血液维生素D中毒、原发性甲亢、肾衰引起的继发性甲旁亢、高蛋白血症、淋巴肉瘤（犬）、大量进食植物（猫）[3]妊娠及哺乳期、幼龄动物快速生长期、低蛋白血症、肾衰、甲亢（猫）、急性坏死性胰腺炎、甲状旁腺功能减退等[3]血磷P血液维生素D摄入过多、肾衰、快速生长期、甲旁减退、溶骨性疾病碱中毒、糖尿病酮症酸中毒使用胰岛素过量、甲旁亢、产后瘫痪血糖GLU血液糖尿病、肾衰竭、库欣氏综合征、甲亢、孕激素过多、生长激素过多等幼龄动物消化道疾病、饥饿、严重败血症、肝功能不全、垂体节能减退、胰岛素治疗过量等淀粉酶AMY胰腺急性胰腺损伤（犬）、肾衰竭、胰腺囊肿、胰腺肿瘤；肝肠疾病（肠梗阻、腹膜炎、胃穿孔）或应用噻嗪类、糖皮质激素药物等重症糖尿病、严重肝脏疾病、胰腺肿瘤术后等脂肪酶LIPA血液急性胰腺炎、胰腺癌、肠梗阻、胆总管阻塞、十二指肠穿孔等—总胆固醇TC脑及神经组织糖尿病、单纯阻塞性黄疸、肥胖、高脂肪饮食、甲减、库欣氏综合征、肾病综合征等[3]严重营养不良、恶性肿瘤、肝细胞严重受损、蛋白丢失性肠疾病等甘油三酯TG血清糖尿病、甲状腺功能减退（犬）、肾病综合征、阻塞性黄疸、急性胰腺炎等甲亢、阿蒂森氏症、肝病、极度营养不良、胆汁分泌不足、肠道吸收障碍等2尿液检测与粪便检测2.1尿液检测宠物尿液检查包括尿常规分析、尿液中有形成分检测（如尿红细胞、白细胞等）、蛋白成分定量测定、尿酶测定等。尿常规检查是诊断肾脏疾病的重要依据，也是某些疾病，如泌尿系统疾病的辅助检查。目前宠物临床中多使用试纸条检测对尿液进行测定，该方法具有操作简单、检测结果快速等优点，但检测结果存在假阳性和假阴性，且易受多种因素影响。尿常规检查包括尿量、尿液颜色、浑浊度、pH值、红细胞、白细胞、管型、比重、蛋白质、尿酮葡萄糖等项目。病理性尿量增多主要见于糖尿病、急性肾功能衰竭的多尿期及肾小管性酸中毒等；尿量减少常见于急性肾小球肾炎、急性肾功能衰竭、高热引起的脱水等。病理性尿液颜色有棕黄或深黄色、红色和乳白尿。黄色见于脱水性疾病、阻塞性黄疸或肝实质性黄疸。初始出现红色尿，多为尿道病变或尿道损伤；终末阶段变红，常为膀胱病变引起；若排尿全过程均为红色，为肾脏或输尿管病变。血红蛋白尿常见于溶血性疾病；若出现肌红蛋白尿，尿液呈红褐色，常见于肌病及硒缺乏症。乳白尿常见于泌尿道细菌感染引起的脓尿和菌尿或犬脂肪尿病。动物新鲜尿液浑浊度增加通常为异常现象，可能与其含炎性细胞、管型、病原菌、坏死组织等成分有关，常见于肾脏、肾盂、输尿管、膀胱及尿道疾病。病理性酸性尿液见于各种热性病、严重腹泻、酸中毒等；碱性尿液见于膀胱炎和膀胱麻痹造成的尿潴留、碱中毒等。最新国际肾病协会指南指出,在评估患CKD（慢性肾病）的犬猫预后时，应重视蛋白尿检测以评估蛋白尿的严重程度[4]。研究发现，肾代偿到一定程度会引起肾小球甚至肾小管损伤。肾小球通透性增强，肾小管重吸收功能降低，引起蛋白尿[5]。当宠物出现肾炎、肾盂肾炎、膀胱炎及尿路感染性疾病时，白细胞显著增多。尿比重增加多见于脱水、急性肾炎、糖尿病；尿比重降低多见于尿崩症、慢性间质性肾炎等。健康宠物正常情况下检测不到管型，有时可见少量玻璃样管型。若检测到大量玻璃样管型，提示宠物肾功能和循环障碍或患热性病。此外，管型也有可能在宠物麻醉和剧烈运动后被检出。颗粒管型和玻璃管型同时出现时，常提示存在严重的肾脏疾病；蜡样管型见于进行性严重肾炎或肾变性；脂肪管型见于肾小管疾病和糖尿病；白细胞管型常见于肾盂肾炎、肾小管炎症和肾脓肿[6]。临床诊断中常用的肾脏的生化指标一般是尿素氮和肌酐。尿蛋白和尿肌酐的比值也可反映宠物肾脏功能状态，但这一比值往往在宠物肾功能损伤较严重时才具有提示作用，不够灵敏。近年来，宠物临床上通常检测对称二甲基精氨酸（SDMA）以判断宠物肾脏功能是否存在问题。研究发现，肾脏病变的犬、猫SDMA水平往往会出现异常升高的现象[7]。犬猫SDMA可通过肾小球过滤，经肾脏排出。SDMA最早能够在肾功能丧失25%时出现数值变化，肾功能丧失约40%时会出现明显增高[8]。SDMA是一种能够灵敏反映肾功能的指标，比尿素氮肌酐更加灵敏，也是评估早期肾衰的一项重要的指标。2.2粪便检测胃肠道的病理现象往可以通过粪便检查了解，肝胆、胰腺、消化道的功能情况也可通过粪便检查间接了解。宠物粪便检查主要包括性状观察、化学检查和电子显微镜检查。粪便的物理性状较容易识别和判断。粪常规检测项目包括：大便颜色、出血、硬度、黏液度以及镜检大便有无寄生虫（包括蛔虫、钩虫、绦虫、鞭虫、球虫、贾第虫），其中主要检测项目是寄生虫虫卵检查和隐血检验[9-11]。虫卵检查包括直接涂片法、漂浮法、沉淀法、尼龙筛集卵法等，可检查蠕虫类、原虫类等。隐血检验用于检测大便颜色有无改变以及镜检未见红细胞的消化道少量出血的情况，阳性结果一般见于消化道出血、胃黏膜损伤、肠结核、胃病、溃疡性结肠炎、直肠息肉和消化道的恶性肿瘤等。若隐血检验连续几次结果阳性，表明尿中或粪中有肉眼看不到的少量血液，见于泌尿器官或消化道有出血性病变。3影像学检查3.1X射线检测X射线检查广泛应用于宠物临床诊断，可帮助诊断外科、内科相关疾病。X射线成像的原理是借助X射线的特殊性质、机体组织和人工造影技术将其应用于疾病诊断。由于机体组织器官存在密度、体积和厚度的差异，导致最终成像。骨骼呈透明白色、软组织和体液呈深灰色，脂肪呈灰黑色，气体呈黑色。软组织、实质器官密度差异不大且互相连接和重叠，缺乏对比，需灌注高或低密度造影剂，造成病变部位与正常组织密度的差异。质量好的X射线影像结果是X射线诊断有效的先决条件。犬、猫腹部与胸部是X射线最重要的两个常用部位。质量较好的胸部图像应具有以下特点：肺血管、心影和充气肺之间具有良好对比，肺纹理走型清晰，柔和，层次感分明；骨骼结构分明，边缘清晰，放大时纹理可见。质量较好的腹部图像应整体柔和自然，皮肤、骨骼、脏器层次感分明；脏器之间界限较为分明，肠道影响清晰[12]。3.2B超检测20 000 Hz以上的声波，人耳不能听见，称为超声波，简称超声。超声有很多种，其中“二维显示”以亮度模式诊断疾病，并以亮度英文首字母命名，故称B超，又称灰阶超声。B超适用于肝、胆、肾、膀胱、子宫、卵巢等多种脏器疾病的诊断，即妊娠诊断、产科疾病、消化系统疾病、腹部超声扫描[13]。临床中B超可以用于早期诊断，图像富有实体感，与各个组织器官的真实解剖结构相似[14]。B超在动物临床中主要用于宠物妊娠诊断、胎儿发育情况监测以及心脏、膀胱、子宫、肝、胆、胰等内脏器官病变的检查，在许多产科疾病和内科疾病的诊断中充分显示其优越性，为外科手术的进行提供了直观、可靠的依据。但B超诊断也有其局限性和不足之处，如B超无法检查含气器官（如肺脏），在诊断骨折、脱臼等方面不如X射线实用、可靠[15]。此外，B超诊断范围还受探头分辨率的限制，如犬、猫的脾脏、胰 腺、肾上腺等器官体积较小，低频探头观察其异常变化较困难，提高分辨率（探头频率）可导致穿透能力降低[16]。4病原体检测宠物病原体与其他动物病原体类似，包括细菌、四体（支原体、衣原体、螺旋体和立克次氏体）、病毒、真菌和寄生虫等几类，其中以细菌、病毒和寄生虫的危害较严重。在宠物临床中，细菌、病毒的检测围绕形态学和分子生物学展开。通过普通光学显微镜可以观察菌形态，通常采用不染色标本和染色标本两种方式进行检查，检查细菌的动力及运动情况主要使用不染色标本，制片方法包括湿片法、悬滴法、负染色法等。观察细菌的形态、排列、大小、染色特征和细菌荚膜、鞭毛、芽孢、异染颗粒等结构时，需要对标本涂片及染色，制片方法包括单染色法、复染色法和特殊染色法。用于检测病毒的诊断方法包括直接镜检、包涵体检查、病毒分离培养、血清学试验、动物接种试验、分子生物学等方法，其中宠物临床中广泛应用的是胶体金试纸快速检测法和分子生物学检测方法。常见的分子生物学检测方法有荧光定量PCR（qPCR）技术、多重PCR技术、恒温扩增技术、基因芯片技术等[17]，宠物临床中应用较为广泛的是聚合酶链式反应（PCR），是一种用于DNA片段放大扩增的分子生物学技术，即生物体外的DNA复制。PCR的特点是反应灵敏度高、特异性强、检出率高，是目前最先进的诊断技术之一[18]。5漏出液与渗出液检测从外观特性判断，渗出液为深黄色、液体浑浊、具有脓性、带血性，且容易凝结。漏出液和渗出液中黏蛋白定性含量不同，机体出现炎症时，浆膜上皮细胞在炎性反应刺激下使黏蛋白分泌增多，故渗出液中黏蛋白试验为阳性[19]。两者划分标准多根据比重（以1.018为界）、蛋白含量（以30 g/L为界）、白细胞含量（以500×10６/Ｌ为界），小于上述标准为漏出液，大于则为渗出液[20]。渗出液通过显微镜检查可以看到中性粒细胞数量多，大于500个/μL。漏出液多为单纯血液循环障碍引起，几乎不含中性粒细胞。漏出液与渗出液常见于胸腔和腹腔，胸腹部的炎症引起胸腹腔渗出液形成胸腹水，全身血液循环障碍引起胸腹腔漏出液积水。临床上可根据病史、临床症状、胸腹腔穿刺或结合X射线检查、超声检查等进行诊断[21]。6结论宠物疾病实验室诊断技术在临床上的应用极为广泛。培养相关人员掌握实验室常规仪器设备的使用及检测方法，有助于宠物临床疾病确诊，为人类和动物健康提供一定保障。但宠物疾病实验室诊断技术的内容广泛且复杂，在实际培养中需要不断探索和思考，做到与时俱进，对标宠物医疗行业的发展，不断更新设施设备和检测技术，方可灵活处理和分析诊断结果。