中草药具有来源丰富、低毒副作用和低残留等优势，富含丰富的营养物质，是理想的饲用抗生素替代品之一。中草药饲料添加剂具有提高反刍动物生产性能、抗应激能力、免疫功能以及抗菌、抗氧化等多种作用[1-2]，在反刍动物的生产中应用广泛[3-4]。本课题组前期研究选用的中草药具有提高山羊的生长性能、免疫功能和抗氧化功能等作用[5]，并从多个方剂中筛选出了最佳方剂，但仍需要进一步研究，不断优化方剂的使用。辨证施治是重要的中兽医理论，并且药量的使用尤为重要[6]，更有大小剂量成方的说法[7]。本试验运用传统补中益气、健脾燥湿、清热解毒的理论，将药物从补中益气、健脾燥湿、清热解毒方面进行配伍，再针对某一方面的含量进行调整，为其在山羊生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料中草药购自元昌药业有限责任公司，主要有茯苓、金银花、桔梗等12种中草药，其中补中益气类药材4种（黄芪、甘草、女贞子、刺五加），健脾燥湿类药材4种（茯苓、山楂、山茱萸、党参），清热解毒类药材4种（金银花、蒲公英、桔梗、知母）。以上中草药粉碎过60目筛，按照试验选择剂量配比混匀。中草药配比组成见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.005.T001表1中草药配比组成组别中草药配比1组补中益气类（250 g）∶健脾燥湿类（125 g）∶清热解毒类（125 g）=2∶1∶12组补中益气类（125 g）∶健脾燥湿类（250 g）∶清热解毒类（125 g）=1∶2∶13组补中益气类（125 g）∶健脾燥湿类（125 g）∶清热解毒类（250 g）=1∶1∶24组补中益气类（167 g）∶健脾燥湿类（167 g）∶清热解毒类（167 g）=1∶1∶1ELISA检测试剂盒由泉州市科诺迪生物科技有限公司提供。试验山羊为恩施市禾阳农牧专业合作社养殖的马头山羊。1.2试验设计选取健康状况良好、体重且年龄相近（6月龄）的山羊100只，随机分为5组，每组5个重复，每个重复4只羊。对照组山羊饲喂基础日粮，试验1组、2组、3组、4组山羊饲喂98%基础日粮+2%中草药，中草药均按照表1配比进行添加。山羊的精料参照NRC（2004）推荐的中国肉羊饲养标准进行配制，精料组成及营养水平见表2。预试期20 d，正式试验期60 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.005.T002表2精料组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米60.0消化能/(MJ/kg)13.33豆粕18.0干物质/%87.20麸皮18.0粗蛋白质/%16.67小苏打1.0粗脂肪/%4.24磷酸氢钙1.0粗纤维/%3.42预混料2.0钙/%0.39磷/%0.61注：1.预混料由北京精准动物营养研究中心提供。2.营养水平均为计算值。1.3测定指标及方法1.3.1样品采集试验结束后，羊颈静脉采血两份，一份加乙二胺乙酸（EDTA）抗凝，用于血常规指标测定，一份促凝，静置2~3 h，待血液凝固收缩，3 000 r/min离心5~10 min，收集上层血清，-80 ℃保存。1.3.2生长性能正式试验期第1 d和第60 d，饲喂前对山羊称重，记为初重和末重，统计每组山羊的采食量，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重(ADG)=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量(ADFI)=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.3血常规指标含有抗凝剂的血液用于测定血常规相关指标，使用全自动血液分析仪（BC-2800vet迈瑞）测定血液白细胞数目（WBC）、红细胞数目（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞积压（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、红细胞分布宽度变异系数（RDW）。1.3.4免疫指标、抗氧化指标采用ELISA检测试剂盒（泉州市科诺迪生物科技有限公司）和Rayto RT-6100酶标分析仪检测免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-2（IL-2）、小反刍兽疫病毒抗体（PPRV-Ab）、补体C3（C3）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。1.4数据统计与分析采用SPSS 18.0软件进行单因素方差显著性分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同配比中草药对山羊生长性能的影响（见表3）由表3可知，试验1组、2组、4组山羊的ADG和ADFI略高于对照组（P0.05）；试验3组山羊的ADG和ADFI均显著高于对照组（P0.05）；各试验组山羊的料重比略低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.005.T003表3不同配比中草药对山羊生长性能的影响组别初重/kg末重/kgADG/[g/(只·d)]ADFI/[g/(只·d)]料重比1组25.15±1.8029.85±2.4178.75±25.15ab445.83±19.14ab5.66±0.292组24.70±1.5529.50±2.8480.00±25.37ab445.17±22.63ab5.56±0.613组26.15±2.1631.50±2.8789.17±17.92a493.11±25.98a5.53±0.574组24.53±1.2529.12±1.9376.60±24.25ab431.77±17.45ab5.64±0.72对照组25.14±1.6629.24±2.1968.25±14.52b418.15±15.52b6.13±0.81注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同配比中草药对山羊血常规的影响（见表4）由表4可知，试验组山羊血液的RBC和HGB均有升高的趋势，试验2组山羊血液的RBC和HGB显著高于对照组（P0.05）；试验1组、2组、3组山羊血液的MCV和MCH显著高于对照组（P0.05）；试验1组、2组山羊血液的MCHC显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.005.T004表4不同配比中草药对山羊血常规指标的影响组别WBC/(×109/L)RBC/(×1012/L)HGB/(g/L)HCT/%MCV/fLMCH/pgMCHC/(g/L）RDW/%1组13.00±0.7220.67±2.66ab110.50±11.47ab34.03±3.2916.55±0.91a5.30±0.18a324.51±17.97bc22.00±1.462组18.14±5.5221.14±1.17a113.20±7.01a34.28±2.6916.26±1.18a5.32±0.26a330.23±6.98abc22.14±1.023组12.13±2.9819.73±1.47ab105.00±10.55ab32.83±3.1816.69±1.23a5.25±0.31a319.57±9.04c21.35±1.174组13.66±6.0120.02±1.80ab105.41±11.15ab31.36±3.0515.71±0.79ab5.18±0.26ab335.62±7.54ab22.26±1.20对照组13.53±3.0419.18±1.68b98.75±13.15b28.95±3.6815.10±0.59b5.10±0.24b340.50±5.20a23.25±3.072.3不同配比中草药对山羊抗氧化和免疫功能的影响（见表5）由表5可知，试验1组、2组山羊血清IgG含量显著低于对照组（P0.05），且试验1组山羊血清IgG含量显著低于2组（P0.05）；试验1组、2组、3组山羊血清的IL-2、C3和PPRV-Ab含量均显著低于对照组（P0.05），试验1组、2组山羊血清的IgM、IL-2和PPRV-Ab含量显著低于3组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.005.T005表5不同配比中草药对山羊抗氧化和免疫功能的影响组别IgG/(g/L)IgM/(mg/L)IL-2/(ng/L)C3/(mg/L)PPRV-Ab/(μg/L)SOD/(μg/L)GSH-Px/(μg/L)1组0.54±0.26c16.58±1.92c109.95±19.80c16.43±2.35c30.04±1.66c4.41±0.20c1.01±0.13c2组0.73±0.17b17.91±1.88c120.89±14.23c18.56±1.26bc31.30±6.51c4.90±0.32c1.07±0.11c3组0.86±0.16ab22.36±2.70b149.91±14.08b21.03±3.22b48.93±6.85b5.75±0.64b1.50±0.25b4组0.85±0.17ab21.79±2.47b205.96±29.08a25.32±4.08a66.11±9.70a6.73±0.72a1.88±0.28a对照组1.06±0.16a28.12±2.73a219.86±17.73a28.03±2.74a74.87±6.43a7.45±0.72a2.13±0.14a试验1组、2组、3组山羊血清的SOD和GSH-Px活性均显著低于试验4组和对照组（P0.05）。3讨论3.1不同配比中草药对山羊生长性能的影响中草药作为饲料添加剂能够提高动物生长性能，调节动物免疫力[8]。药食同源天然植物中草药最重要的作用体现在“药”和“食”，其富含丰富的碳水化合物、脂肪、蛋白质、维生素等营养物质，是“药”和“食”的物质基础[9]。药食同源天然植物中草药具有调节动物胃肠道、促进物质吸收、提高饲料利用效率等作用，能够补充动物机体的营养物质[10]。贾万臣等[11]研究发现，中草药可以提升小尾寒羊的生长性能，增强机体对疫病的抵御能力。左晓磊等[12]研究表明，中草药可以提高新疆巴音布鲁克羊的增重速度、饲料转化率、营养物质表观消化率及屠宰性能。张善芝等[13]研究发现，复方中草药可以明显促进湖羊羔羊的生长。本试验研究发现，不同配比的中草药方剂组的山羊的平均日增重、平均日采食量和料重比数据均优于对照组，且试验3组山羊的生长性能综合效果较好。3.2不同配比中草药对山羊血常规的影响血常规是主要通过观察血细胞的数量变化及形态分布等判断机体的健康状况的一种指标，是一项常用的基础性检测方法，可以综合各项指标可以判断机体的健康状。WBC为免疫细胞，能够帮助机体抵抗传染病以及外来病原。RBC主要通过HGB实现运输氧及二氧化碳。HCT能够间接反映红细胞数量大小及体积。当机体发生感染或者炎症时，WBC数值偏高；当机体贫血时，MCV、MCH、MCHC等指标也会相应出现变化。郭锐等[14]研究发现，食用黄曲霉毒素超标的花生藤后，黑山羊血液MCH显著下降。赵正伟等[15]研究发现，中草药添加剂可以提升滩羊的WBC水平。刘瑞生等[16]在肉羊的日粮中添加中草药，发现中草药可以提高肉羊血液WBC、RBC、HGB的数值。本课题组前期研究表明，本方剂中草药具有提升山羊血液RBC、HGB等多项血常规指标的作用；当有外界有病原刺激时，可以刺激机体快速恢复各项血常规的正常水平[5]。本研究表明，试验所用中草药配方具有提升HGB、RBC、HCT、MCV、MCH，降低WBC、MCHC、RDW的作用；但不同剂量配比中草药组的结果出现差别，试验1组、2组、3组对山羊的效果更显著，综合效果分析各组的排序为：2组3组1组4组。造成差异的原因可能与复方剂量配比的调整有关，调整某些药物的含量可以提升或改变方剂效果。周欣欣等[17]研究补阳还五汤黄芪不同配比组方调控动脉粥样硬化炎性反应的分子机制，结果发现，提高黄芪的剂量有助于调控动脉粥样硬化炎性反应。李波等[18]设计正交试验，研究不同方剂雷公藤汤剂量配比对肾病大鼠肝脏减毒增效作用，结果发现，不同组方比例的效果存在差异。3.3不同配比中草药对山羊抗氧化和免疫功能的影响IgG、IL-2、IgM和C3是衡量机体健康的免疫指标。IgG在免疫系统中发挥重要作用，可以预防疫病，还是唯一可以通过胎盘的免疫球蛋白，对初产动物的免疫保护具有重要作用[19]；IgM则在激活补体方面发挥重要作用。IL-2主要由T细胞（特别是CD4+T细胞）受抗原或丝裂原刺激后合成，能够激活T细胞，维持T细胞分化和增殖的T细胞生长因子，参与炎症或自身免疫性反应[20]。补体C3是血清中含量最高的补体成分，主要由巨噬细胞和肝脏合成，在补体激活途径中发挥作用[21]。PPRV-Ab是给机体注射PPRV疫苗后产生的抗体，可以有效防治小反刍兽疫。SOD、GSH-Px是判断动物机体抗氧化能力的指标。本试验发现，试验各组中草药均能够山羊血清降低IgG、C3、IL-2、PPRV-Ab含量以及SOD、GSH-Px活性，与本课题组前期试验结果一致[5]，但与刘志英等[22]、赵正伟等[23]研究存在差异，可能是因为中草药有助于机体清除病原体，防止胃肠道发生持续炎症反应，减轻和预防过度炎症反应，利于动物生长[24-25]。本试验中，2组山羊血清IL-2、PPRV-Ab含量以及SOD、GSH-Px活性均明显低于对照组，3组山羊血清C3、IL-2、PPRV-Ab含量以及SOD、GSH-Px活性显著低于对照组。造成差异的原因是中草药不同剂量配比药效不同。综合本试验效果，以加大补中益气类药物在提升机体免疫力和抗氧化方面表现效果更好，且1组2组3组4组。3.4不同配比中草药药效分析中草药复方使用要因症随变，要灵活调整配方，不断探索复方的使用效果，使方剂的使用更精准。陈聪聪等[26]阐述了从中药有效组分上进行配伍研究的策略。杨香玉等[27]使用正交试验法研究了五倍子、黄连、牡丹皮、蒲公英、赤芍和黄芩等对痤疮致病细菌抑制的最佳配比。覃瑶等[28]在研究淫羊藿、蛇床子及川续断的抗骨质疏松的作用时，采用不同比例的变化来验证各个配比的药效。本试验则根据补中益气、健脾燥湿、清热解毒等3种治法配伍药材，调整比例，运用八纲辩证思维，开展最优药效的研究。补中益气药具有补气升阳、固表、补脾益气、滋阴益寿、补益肝肾、补益肝肾等作用，如黄芪富含黄芪皂苷、黄芪多糖、硒、氨基酸、蔗糖等，具有补中益气、强心补肝等作用[29]。茯苓等健脾燥湿类药物具有消食健胃、行气散瘀、化浊降脂、健脾生津、治脾胃虚弱、利水渗湿、健脾补中等作用。刘若楠等[30]研究发现，茯苓多糖对磷酸铵镁致羊肾小管上皮细胞损伤具有保护作用。蒲公英等清热解毒药物具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋、消炎退肿、宣肺、利咽、祛痰、排脓、滋阴润燥等作用，如金银花具有清热解毒的功效，在方剂中应用广泛[31]。王伟等[32]研究发现，金银花的提取物具有提升免疫力的功效。本试验表明，各组配方中草药对山羊的作用效果存在明显差异，表明这种试验设计对进一步优化复方可行。中草药成分复杂，除主要成分外，还含有具有生物活性的物质[33]，且复方中草药的使用较多，要用好传统中兽医理论，随证治之，辨病成方[34]，发挥中草药的独特作用。4结论本试验条件下，加大补中益气、健脾燥湿、清热解毒任意一类的药物剂量均比各组分剂量相等的效果要好，且补中益气类药物在提升机体免疫力和抗氧化方面表现效果更好，推荐使用各类中药材排序为：补中益气类健脾燥湿类清热解毒类。