抗生素能够降低养殖动物感染致病菌的风险，具有促生长的作用[1]，但长期使用抗生素能够产生耐药性，破坏动物肠道的菌群平衡，对动物和人体健康产生危害[2]。在饲料端“禁抗”的背景下，复合微生态制剂在畜牧养殖业的应用引起广泛关注[3]。枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是好氧型的微生物[4-6]，丁酸梭菌（Clostridium butyricum）是严格的厌氧型微生物[7-8]，二者均可在一定条件下产生芽孢结构。枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌进入动物肠道后能够各自发挥益生作用，协同配合，有效抑制病原微生物在肠道中繁殖，增加有益菌数量。枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌在增殖过程中会产生很多生理活性物质，对动物免疫器官的发育具有促进作用，能够提高动物对环境的抵抗力。本试验研究枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响，为枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌在蛋鸡生产中应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验菌种枯草芽孢杆菌（活菌数为1.0×1010 CFU/g）、丁酸梭菌（活菌数1×109 CFU/g），均由本学院微生物实验室选育保藏。1.1.2试验动物海兰褐蛋鸡由潍坊市某蛋鸡养殖基地提供。1.2试验方法1.2.1试验设计选择40周龄海兰褐蛋鸡400只，随机分为4组，每组20个重复，每个重复5只鸡。试验期56 d。采用玉米-豆粕型的基础日粮，试验1组（对照组）蛋鸡饲喂基础日粮，试验2组在基础日粮中添加100 g/t的枯草芽孢杆菌，试验3组在基础日粮中添加100 g/t的丁酸梭菌，试验4组在基础日粮中添加50 g/t枯草芽孢杆菌+50 g/t丁酸梭菌组成的复合微生态制剂。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.012.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米58.00代谢能/(MJ/kg)12.00豆粕21.00粗蛋白/%20.00棉粕4.00钙/%3.60菜籽粕5.00磷/%0.50石粉9.20赖氨酸/%0.70磷酸氢钙1.50蛋氨酸/%0.50食盐0.30预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 20 IU、VB1 1.3 mg、VB2 3.6 mg、VB6 1.5 mg、VK 31.5 mg、D-泛酸12.0 mg、胆碱450.0 mg、叶酸0.5 mg、烟酸26.5 mg、Fe 62.0 mg、Mn 62.0 mg、Zn 40.0 mg、Cu 10.0 mg、Se 0.3 mg、I 0.5 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2.2饲养管理试验于潍坊市某蛋鸡养殖基地进行，采用笼养方式，自然光照，自由采食饮水。预试期7 d，正式试验期56 d。1.3测定指标及方法1.3.1生产性能依据裘博文等[9]的试验方法，统计平均蛋重、产蛋率、死淘率和料蛋比。产蛋率=产蛋数/试验鸡数(1)平均蛋重=合格蛋总重/合格蛋数(2)料蛋比=平均日采食量/平均蛋重(3)死淘率=各栏累计死淘鸡/各栏累计饲养鸡(4)1.3.2蛋品质依据彭箫等[10]的试验方法，在蛋鸡47周龄的第1 d于试验各组随机采集蛋样，每组随机选取鸡蛋12枚，测定蛋黄颜色、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋白高度及哈夫单位。采用Robotmation蛋品质分析仪EMT-5200测定蛋重、蛋黄颜色、哈夫单位、蛋白高度，Robotmation蛋壳厚度测量仪ETG-1061测量蛋壳厚度。1.3.3血清生化指标在蛋鸡47周龄，各组随机抽取5只蛋鸡，翅下静脉采血1 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃冰箱保存。血清生化指标使用日立7180全自动生化分析仪检测总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）指标数据。试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司。1.3.4血清免疫指标在蛋鸡47周龄，各组随机选取5只蛋鸡，翅下静脉采血1 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃冰箱保存。血清免疫指标采用日立7180全自动生化分析仪测定免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）含量。试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 16.0软件进行分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，各试验组蛋鸡的产蛋率显著提高（P0.05），料蛋比和死淘率均显著降低（P0.05）。研究表明，使用单一微生态制剂和复合微生态制剂蛋鸡的产蛋率均有所提高，料蛋比和死淘率有所下降，且复合微生态制剂的效果明显优于单一微生态制剂。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.012.T002表2枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率%平均蛋重/(g/枚)平均日采食量/(g/只)料蛋比死淘率/%试验1组（对照组）88.60±1.35b60.10±0.68114.00±3.252.38±0.15a3.12±0.62a试验2组92.15±1.16a60.21±1.21112.00±2.672.16±0.08b2.45±0.35b试验3组92.32±1.42a60.15±0.56113.00±2.562.10±0.12b2.24±0.23b试验4组93.12±1.54a60.20±0.82112.00±2.382.02±0.06b1.98±0.32b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表5与此同。2.2枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，各试验组鸡蛋的蛋黄颜色、蛋壳厚度均显著提高（P0.05），试验4组蛋黄比例显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.012.T003表3枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋品质的影响组别蛋黄颜色蛋黄比例/%蛋形指数蛋壳厚度/mm蛋壳强度/(N/cm2)蛋白高度/mm哈夫单位试验1组（对照组）9.80±0.42b25.95±1.36b1.32±0.050.315±0.020b4.92±0.456.20±0.8276.02±1.31试验2组10.75±0.56a26.32±0.56ab1.33±0.020.336±0.050a4.96±0.336.25±1.2676.65±2.01试验3组10.94±0.31a26.60±0.31ab1.32±0.050.349±0.050a4.90±0.546.18±1.0276.86±1.15试验4组11.06±0.54a26.97±1.06a1.34±0.030.360±0.040a4.98±0.556.31±0.8176.98±2.332.3枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，各试验组蛋鸡血清TP、GLB含量显著升高（P0.05），ALT、AST活性显著降低（P0.05），且复合微生态制剂的效果优于单一微生态制剂。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.012.T004表4枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡血清生化指标的影响组别试验1组（对照组）试验2组试验3组试验4组TP/(g/L)48.02±1.64b50.82±2.32a51.13±1.23a51.74±1.04aALB/(g/L)23.43±0.5123.62±1.0223.74±1.2623.82±0.67GLB/(g/L)24.59±0.72b27.20±1.34a27.39±1.12a27.92±0.85aGLU/(mmol/L)14.16±0.6314.32±0.4614.19±0.4814.26±0.72TC/(mmol/L)12.05±1.3812.16±1.0411.96±1.1312.01±1.25TG/(mmol/L)13.78±1.0613.80±1.2613.51±1.3213.48±1.02BUN/(mmol/L)0.45±0.230.47±0.310.42±0.180.42±0.12ALT/(U/L)10.32±1.64a7.84±1.37b7.65±3.24b7.41±2.03bAST/(U/L)241.32±35.84a212.45±32.03b210.37±35.68b209.14±25.36bLDL/(mmol/L)0.35±0.040.34±0.050.37±0.080.35±0.05HDL/(mmol/L)1.59±0.241.38±0.361.42±0.281.34±0.25注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.4枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，各试验组蛋鸡血清IgG、IgM、IFN-γ含量显著提高（P0.05），试验4组蛋鸡血清IL-2含量显著提高（P0.05）。研究表明，使用复合微生态制剂的效果优于单一微生态制剂。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2022.22.012.T005表5枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡血清免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IFN-γ/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-4/(ng/L)试验1组（对照组）2.12±0.14b0.227±0.0201.20±0.04b57.98±3.54b218.35±5.62b74.53±6.72试验2组2.80±0.18a0.230±0.0401.43±0.02a63.84±1.68a231.47±5.31ab76.02±5.24试验3组3.01±0.25a0.232±0.0301.46±0.02a64.56±2.06a232.94±6.49ab76.58±3.46试验4组3.24±0.21a0.235±0.0201.57±0.05a65.35±2.37a236.42±7.46a78.06±2.983讨论3.1枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响本试验发现，添加微生态制剂各组蛋鸡的产蛋率显著提高，料蛋比和死淘率显著下降，而且复合微生态制剂组的效果优于单一菌种组。丁酸梭菌进入动物肠道后，在繁殖过程中可产生多种维生素及酶类，这些维生素和酶能够增加动物对营养物质的吸收，从而提高动物的生产性能[11]。张金金等[12]研究发现，日粮中使用丁酸梭菌后，蛋鸡的产蛋率明显提高。王成森[13]研究发现，使用丁酸梭菌饲喂蛋鸡，蛋鸡产蛋率有所提高，死淘率显著下降。枯草芽孢杆菌在动物肠道内能够分泌各种酶类，可使一些难吸收的大分子物质降解成可吸收的小分子物质[14]。将二者结合使用，效果优于单一使用效果。3.2微生态制剂对蛋鸡蛋品质的影响本试验发现，添加微生态制剂的各组蛋黄颜色明显加深，蛋壳厚度提高，哈夫单位呈升高趋势。徐晨希等[15]研究发现，使用微生态制剂可提高蛋鸡的哈夫单位和蛋白高度。原因可能是枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌代谢产生的酶类促进了日粮中营养成分的吸收利用。而且丁酸梭菌具有抗氧化功能，对提高蛋品质具有重要作用[16]。本试验结合枯草芽孢杆菌和丁酸梭菌的各自优点，突破了单一使用的效果，对提高蛋品质具有重要意义。3.3微生态制剂对蛋鸡血清生化指标及免疫指标的影响动物机体健康情况是内部、外部因素综合作用的结果。内部因素主要取决于动物自身免疫系统，外部因素主要是养殖环境。养殖中可通过实时检测动物的血清生化指标及免疫指标，及时掌握动物的健康状态。本试验中，添加微生态制剂的各组蛋鸡血清TP、GLB含量明显高于对照组。血清中各类蛋白指标提高，表明动物对蛋白质利用水平得到提高，动物自身的免疫水平得到增强。AST和ALT活性主要体现肝脏的健康水平，动物处于健康状态下，其血清中AST和ALT活性很低；肝细胞受损会发生一些炎症反应，血清AST和ALT活性会升高。本试验发现，使用微生态制剂的各组蛋鸡血清AST和ALT活性均显著降低。原因可能是微生态制剂提高血清中蛋白浓度，使蛋鸡产生更多的抗体物质，从而增强了机体的免疫功能，从而有助于增强肝细胞的修复再生能力，提高肝脏的解毒功能。结果表明，微生态制剂在提高蛋鸡血清蛋白浓度后，间接地对肝脏起到了保护作用。血清TC、TG、HDL和LDL含量体现机体对脂类物质代谢能力。本试验发现，添加微生态制剂对脂类代谢影响不大，TG和LDL有降低趋势。原因可能与不同的菌种及用量以及蛋鸡的品种有关，下一步可进行深入研究。付大波[17]研究发现，使用丁酸梭菌饲喂肉鸡的血清TP、GLB含量有所提高。郑爱娟等[18]研究发现，添加丁酸梭菌可显著提高肉鸡血清GLB含量。本试验虽然采用蛋鸡进行相关试验，但结果与上述研究结果较一致。IgG、IgA、IgM和免疫因子含量能够反映动物产生免疫反应能力，其含量升高表明动物产生免疫应答的能力提高，外在表现即动物对疾病的抵抗能力增强。本试验中，与对照组相比，各试验组蛋鸡血清IgG、IgM、IFN-γ和IL-2含量均显著提高。刘淑娇等[19]研究发现，使用复合微生态制剂的肉仔鸡免疫功能显著提高。张彩凤等[20]研究发现，使用乳酸菌及酵母菌等微生态制剂可显著提高肉仔鸡的免疫功能，与本试验结论一致。4结论本试验结果发现，单一或复合微生态制剂均可提高蛋鸡的生产性能及蛋品质，改善血清生化指标，提高机体的免疫力，以加入50 g/t枯草芽孢杆菌与50 g/t丁酸梭菌的复合微生态制剂组的效果较好。