在当前畜牧养殖业减抗限抗、饲料端禁抗的背景下，探索绿色、无污染、低残留替代抗生素的饲料添加剂已成为研究热点。酸化剂作为一种高效、无污染、无残留的新型绿色饲料添加剂，可降低动物机体胃肠道pH值，提高酶活性，改善饲料利用率，促进动物机体生长，调控胃肠道微生物菌群平衡，增强免疫力等多种生物学功能[1-2]。植物精油作为植物的次生代谢产物，具有广谱抑菌功能，能够提高动物生产性能，调节机体免疫力，可作为替抗产品在动物生产中应用[3]。在畜禽日粮中混合添加植物精油和酸化剂，可协同提高动物生产性能，改善日粮适口性，提高日粮利用率，且效果优于单独添加[4-6]。因此，植物精油复合物和酸化剂以复合制剂进行配伍应用于临床生产具有重要意义。目前，植物精油和酸化剂及其复合制剂在蛋鸡生产性能及蛋品质影响方面的研究较少，且大量研究集中于日粮型酸化剂，关于饮水型酸化剂的研究较少。本研究旨在研究饮水中添加饮水型植物精油复合酸化剂对蛋鸡生产性能、蛋品质及抑菌效果的影响，探讨饮水型精油复合酸化剂作为蛋鸡养殖中抗生素替代物的可行性，为其在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验用精油复合酸化剂主要成分为磷酸、丁酸、乳酸、甲酸、丙酸（总酸含量≥70%）、牛至油含量为5%，其余成分为二氧化硅载体，由乐达（广州）香味剂有限公司提供。1.2试验设计本试验采取单因素完全随机设计，选取350日龄罗曼灰商品蛋鸡672只，随机分为4组，每组8个重复，每个重复21只鸡。各组蛋鸡饲喂基础日粮，各试验组在饮水中分别添加0.05%、0.10%和0.20%精油复合酸化剂，对照组饮水中无添加。预试期7 d，正式试验期49 d。基础日粮参照NRC（1994）家禽营养水平标准以及我国鸡饲养农业行业标准（NY/T 33—2004）进行，结合罗曼灰蛋鸡饲养手册配制玉米-豆粕型基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米65.37代谢能/(MJ/kg)11.25豆粕20.30粗蛋白质/%16.11玉米蛋白粉1.60赖氨酸/%0.83石粉9.85蛋氨酸/%0.37麸皮0.26钙/%3.93磷酸氢钙1.12总磷/%0.69豆油0.20有效磷/%0.40食盐0.30预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 1 800 IU、VE 12.50 mg、VK3 1.00 mg、VB1 1.50 mg、VB2 3.10 mg、VB6 1.90 mg、VB12 6.00 μg、烟酸 20.00 mg、泛酸 5.60 mg、叶酸 1.00 mg、生物素 0.20 mg、胆碱 500 mg、植酸酶 150 FTU、Fe 46 mg、Cu 6 mg、Mn 50 mg、Zn 30 mg、I 0.35 mg、Se 0.3 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验蛋鸡采用三层阶梯式进行笼养，每笼放3只鸡，试验蛋鸡自由采食和饮水。禽舍设置光照16 h/d。试验员每周对禽舍清理及消毒1次。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间以各组的重复为测量单位，每日统计试验蛋鸡的采食量、产蛋数、平均蛋重、废蛋数、死淘鸡数、死亡时间，计算整个试验期间蛋鸡的平均蛋重、平均日采食量、产蛋率、料蛋比和破蛋率。平均蛋重=总蛋重/总蛋个数(1)平均日采食量=总采食量/试验鸡数(2)产蛋率=每日产蛋总数/总鸡数×100%(3)料蛋比=平均日采食量/每日产蛋总重(4)破蛋率=破蛋个数/总蛋数×100%(5)1.4.2蛋品质分别在试验1、21、35、49 d从各重复中随机挑取2枚试验蛋测定蛋品质。采用IP54型数显电子游标卡尺（Meinaite公司）测定蛋形指数，P-I型厚度测定仪（FHK公司）测定蛋壳厚度，KQ-1A型蛋壳强度测定仪（北京天翔飞域仪器设备有限公司）测定蛋壳强度，EMT-5200型蛋品质测定仪（ROBOTMATION公司）测定浓蛋白高度、蛋黄比率、哈夫单位。1.4.3水的酸化效果量取试验基地地下水，设置对照组和3个酸化剂添加组，每组分别量取100 mL，酸化剂组分别加入0.05%、0.10%和0.20%精油复合酸化剂，混匀5 min，使用pH计测定各组pH值。1.4.4水中大肠杆菌、沙门氏菌含量量取试验基地地下水1 000 mL，加入0.5麦氏比浊度的大肠杆菌、沙门氏菌标准菌株，随后分为4组，分别为对照组和3个酸化剂添加组，每组分别量取100 mL，酸化剂组分别按0.05%、0.10%和0.20%加入精油复合酸化剂混匀，静置30 min。各组分别吸取1 mL至无菌空平皿中，加入约50 ℃灭菌选择性培养基充分摇匀，培养皿置于37 ℃培养箱中过夜培养，观察大肠杆菌、沙门氏菌生长情况。1.4.5血清生化指标在试验第49 d，每个重复各选取2只蛋鸡，供水禁食12 h，翅静脉采血，分离血清，-80 ℃保存。血清中白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、免疫球蛋白G（IgG）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、尿素氮（BUN）等指标检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，送至山东省中医院，采用AU5400（Beckman Coulter）全自动血液生化分析仪进行测定。1.4.6经济效益经济效益=(总产蛋重×鸡蛋价格)-(总耗料量×饲料价格)(6)1.5数据统计与分析采用SPSS 18.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析，Duncan's法多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1精油复合酸化剂对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，饮水中添加0.10%、0.20%精油酸化剂的蛋鸡产蛋率显著提高（P0.05）；添加不同水平酸化剂对平均蛋重、不合格蛋、死淘率均无显著影响（P0.05），对平均日采食量、料蛋比均有降低的趋势（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T002表2精油复合酸化剂对蛋鸡生产性能的影响项目精油复合酸化剂添加水平0.05%0.10%0.20%0（对照组）平均蛋重/(g/枚)62.88±0.1263.02±0.1462.77±0.2162.82±0.15平均日采食量/[g/(只·d)]126.48±0.27128.15±0.39128.76±0.26129.20±0.54总采食量/(g/只)5 961.22±25.526 035.54±49.096 053.61±49.916 065.31±61.36产蛋率/%87.92±0.01b90.1±0.01a91.38±0.02a88.78±0.01b料蛋比2.35±0.012.32±0.012.36±0.012.38±0.01不合格蛋率/%0.27±0.010.25±0.010.32±0.010.30±0.01死亡率/%0000注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4~表6与此同。2.2精油复合酸化剂对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，试验第21 d，与对照组相比，0.05%精油复合酸化剂组鸡蛋的蛋壳厚度显著提高（P0.05）。试验第35 d，与对照组相比，各精油复合酸化剂组鸡蛋的哈夫单位均提高，其中以0.20%添加量效果较好（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T003表3精油复合酸化剂对蛋品质的影响时间/d精油复合酸化剂添加水平蛋形指数蛋壳厚度/mm蛋壳强度/N蛋黄比率/%浓蛋白高度/mm哈夫单位10（对照组）1.33±0.010.41±0.0140.73±2.4326.71±0.016.30±0.4177.06±2.900.05%1.30±0.010.40±0.0137.90±2.2826.80±0.016.16±0.4174.88±4.100.10%1.33±0.010.41±0.0138.54±2.0126.09±0.016.76±0.2381.80±1.420.20%1.31±0.010.39±0.0140.90±2.1225.92±0.016.71±0.3880.71±3.09210（对照组）1.33±0.020.45±0.06b39.72±1.4826.00±0.017.62±0.3686.38±1.980.05%1.32±0.040.50±0.06a39.60±1.9926.33±0.016.92±0.3581.87±2.250.10%1.30±0.010.45±0.01b40.19±1.1225.90±0.017.3±0.3783.61±2.460.20%1.32±0.020.43±0.01b39.97±1.6026.58±0.017.18±0.2183.69±1.19350（对照组）1.33±0.010.45±0.0138.89±1.6228.58±0.016.45±0.4770.03±3.51b0.05%1.33±0.030.45±0.0139.96±1.7327.86±0.016.95±0.3781.81±2.48ab0.10%1.32±0.010.44±0.0137.24±1.6027.83±0.017.35±0.3783.14±3.06ab0.20%1.33±0.010.40±0.0133.87±1.9426.60±0.017.79±0.2087.02±1.31a490（对照组）1.32±0.010.50±0.0134.42±2.8826.44±0.016.82±0.4778.88±5.740.05%1.30±0.010.50±0.0635.48±3.2026.81±0.016.50±0.5172.17±5.770.10%1.26±0.080.49±0.0634.32±3.6127.39±0.016.94±0.5278.09±6.130.20%1.35±0.010.50±0.0633.06±2.8626.09±0.016.94±0.5078.07±5.78注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.3精油复合酸化剂对水酸化效果及抑菌效果的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，各组精油复合酸化剂组养殖场地下水pH值均显著降低（P0.05）。由抑菌试验结果可知，经不同浓度精油复合酸化剂处理后，饮水中大肠杆菌和沙门氏菌均被完全抑制。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T004表4精油复合酸化剂对水酸化效果及抑菌效果的影响项目精油复合酸化剂添加水平0.05%0.10%0.20%0（对照组）酸化水pH值2.63±0.01b2.54±0.01b2.33±0.01b7.89±0.07a大肠杆菌抑制效果完全抑制完全抑制完全抑制无抑制沙门氏菌抑制效果完全抑制完全抑制完全抑制无抑制2.4精油复合酸化剂对蛋鸡血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，各精油复合酸化剂组蛋鸡血清TP、ALB、BUN、TC、TG、HDL、LDL的含量及AST、ALT的活性差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T005表5精油复合酸化剂对蛋鸡血清生化指标的影响项目精油复合酸化剂添加水平0.05%0.10%0.20%0（对照组）TP/(g/L)48.55±0.6449.49±0.5150.12±0.5548.61±0.61ALB/(g/L)13.48±0.5413.59±0.6613.45±0.7113.54±0.60BUN/(mmol/L)0.32±0.180.25±0.160.27±0.140.34±0.11IgG/(mg/L)3.85±0.583.97±0.714.19±0.763.59±0.56AST/(U/L)197.51±15.29196.86±13.22210.38±9.58206.00±10.98ALT/(U/L)3.51±0.254.06±0.203.64±0.213.55±0.19TC/(mmol/L)3.23±0.193.11±0.223.04±0.093.19±0.17TG/(mmol/L)19.99±2.5019.31±3.0621.01±2.1619.62±3.22HDL/(mmol/L)1.75±0.201.79±0.211.83±0.221.81±0.16LDL/(mmol/L)1.09±0.261.11±0.321.12±0.211.08±0.192.5精油复合酸化剂对蛋鸡经济效益的影响（见表6）以基础日粮成本3.4元/kg，酸化剂40元/kg，鸡蛋价格9.6元/kg计算。由表6可知，添加0.10%精油复合酸化剂饲养49 d后，在经济效益上比对照组提高3.81%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.010.T006表6精油复合酸化剂对蛋鸡经济效益的影响项目精油复合酸化剂添加水平0.05%0.10%0.20%0（对照组）总产蛋量/kg361.99371.55366.51364.69总耗料量/kg849.95861.15865.28868.20基础饲料价格/(元/kg)3.403.403.403.40酸化剂价格/(元/kg)40.0040.0040.000.00饲料价格/(元/kg)3.443.483.563.40鸡蛋价格/(元/kg)9.609.609.609.60经济效益/(元)551.28570.08438.10549.14增加百分比/%0.393.81-20.220.003讨论3.1精油复合酸化剂对蛋鸡生产性能的影响家禽饮水量是采食量的1.75~2.00倍，因此，开发饮水型功能性添加剂，提高饮水质量，清洁水线至关重要[7]。研究发现，酸化剂和植物精油单独或联合使用均具有改善动物健康、提高动物生长性能的作用[5-8]。本试验所采用的植物精油为牛至油，其主要活性成分是香芹酚和百里香酚。研究表明，饲料添加牛至油可通过调节肠道微生物菌群，提高酶活性，增加营养物质转运体mRNA表达量，改善肠道形态，进而促进营养物质消化吸收，提高畜禽生产性能[9-11]。酸化剂可降低机体肠道pH值，抑制有害菌生长，改善肠道形态结构及微生物区系。Yesilbag等[12]在罗曼蛋鸡日粮中分别添加0.5%、1.0%和1.5%有机酸复合制剂，结果发现，有机酸化剂可在一定程度上提高试验蛋鸡产蛋率，而对体增重及采食量均无明显影响。王国其等[13]研究发现，饮水添加酸化剂可显著提高试验蛋鸡的采食量以及产蛋率，降低试验蛋鸡料蛋比。本试验所采用的植物精油与酸化剂复合物是由牛至油与无机酸和多种有机酸在特定配比的基础上进行复配的一种抗菌绿色健康产品，与对照组相比，饮水添加0.10%、0.20%的精油复合酸化剂可提高蛋鸡产蛋率，与上述研究结果基本一致。3.2精油复合酸化剂对蛋品质的影响蛋品质是影响生产效益的重要因素之一。酸化剂和植物精油均可不同程度地提高蛋品质，酸化剂可促进机体对营养物质的吸收，降低pH值，提高蛋白酶活性，释放矿物质元素，促进机体吸收。植物精油可促进肠道有益菌增加，继而增强肠道对矿物质的吸收能力；植物精油中的有效成分可以影响输卵管腺体分泌的浓蛋白的含量以及成分[14-15]。研究发现，精油与酸化剂复合使用提高蛋品质的效果也优于单独使用[16]。哈夫单位主要衡量蛋白品质和蛋的新鲜程度，哈夫单位越大，表示浓蛋白越高，蛋越新鲜。本试验结果表明，日粮添加0.20%比例的酸化剂提高了试验第35 d鸡蛋的哈夫单位，且在试验期内饮水添加0.05%、0.10%、0.20%精油复合酸化剂均不会对哈夫单位产生负面影响。与Park等[17]、弓浩杰等[16]、Ghasemi等[18]、王竹等[14]在日粮中添加有机酸、添加25-羟基维生素D3、植物精油和苯甲酸、精油复合物、乳酸复合酸化剂能够提高鸡蛋哈夫单位的结果一致。本试验中，饮水添加酸化剂对鸡蛋的蛋形指数、蛋壳强度、浓蛋白指数等均无明显影响，试验组和对照组各项指数均在正常值范围内。3.3精油复合酸化剂协同抑菌的影响植物精油具有强抗菌性和抗生物膜活性，能够调节肠道菌群结构[19-20]。酸化剂作为一种饲用功能型添加剂可有效抑制畜禽体内病原微生物增殖，其主要机制有能量竞争，透化细菌外膜，提高胞内渗透压，抑制大分子合成，诱导抗菌肽表达[21]。植物精油与酸化剂复合使用可实现协同抗菌作用，因为低pH值可增强植物精油的疏水性，从而更容易改变细菌细胞膜的构象，触发细胞内容物外溢。有机酸作为小分子更易穿过细菌外膜孔道进入细胞质解离，从而改变细胞内液pH值，导致细菌代谢系统紊乱，起到抑菌杀菌的效果。苏皓瑀等[22]研究表明，植物精油与辛酸、单辛酸甘油酯等酸化剂按照相应质量比组成的复合制剂，可显著抑制致病性大肠埃希氏菌、产气荚膜梭菌等病原菌的生长，且抑菌效果优于单独使用植物精油。张悻等[8]通过正交试验从15种植物精油和6种有机酸中筛选得出，肉桂醛、牛至油复合精油与甲酸复合可协同提升抑菌效果。本课题组前期研究发现，添加不同浓度液体酸化剂均能够显著降低养殖场地下水的pH值及硬度[23]。本试验所用不同浓度的精油复合酸化剂可完全抑制大肠杆菌和沙门氏菌增殖，提示添加酸化剂可以通过降低饮水中的pH值，防止生物膜的形成，切断大肠杆菌等致病菌的生存环境，保证饮水质量，防止管线的阻塞，起到清理水线的作用。3.4精油复合酸化剂对蛋鸡血清生化指标的影响血清TP和ALB含量可以反映机体对于蛋白质的合成能力。TC、TG、HDL、LDL为机体脂肪代谢指标。BUN是动物机体蛋白质分解代谢及氨基酸平衡的重要指标，其含量降低暗示机体对蛋白质利用率提高。IgG可以反映机体的免疫功能。赵旭等[24]研究发现，饮水型酸化剂可提高鸡蛋蛋黄比例，并具有提高血清ALB含量的趋势。张莉等[25]在三黄肉鸡日粮中添加50、100和150 g/L牛至油（10%），结果发现，饲喂100 g/L的牛至油一个月后机体血清IgG含量提高9.27%。本试验显示，饮水添加不同浓度精油复合酸化剂对试验蛋鸡血清TP、ALB、BUN、TC、TG、HDL、LDL的含量及AST、ALT的活性均无显著影响，但与对照组相比，添加0.10%比例的酸化剂具有提高蛋鸡血清TP、IgG含量，降低BUN含量的趋势。推测本试验所用精油复合酸化剂可降低蛋鸡肠道pH值，提高酶活性，促进机体对蛋白质的吸收，加速蛋的形成，提高蛋鸡产蛋性能[26-27]。4结论在本试验条件下，蛋鸡饮水添加0.10%的精油复合酸化剂可在不降低蛋品质的基础上，提高蛋鸡产蛋率，增加经济效益，还能够有效净化水线。