抗生素作为饲料添加剂，可以改善动物机体健康状态、促进动物生长。但是，长期滥用抗生素可造成环境污染、产生的耐药性、影响畜产品安全。饲用抗生素的禁用可在一定程度上和一段时间内会造成畜禽生长性能降低、发病率上升以及养殖经济效益降低。因此，开发筛选合适的饲料添加剂替代抗生素具有重要意义。葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）属需氧脱氢酶类。在有氧条件下，葡萄糖氧化酶能将β-D-葡萄糖分解为葡萄糖酸和过氧化氢。由于GOD酶解耗氧，产物葡萄糖酸具有酸化剂性质。过氧化氢具有杀菌、解毒功能。因此，葡萄糖氧化酶是一种具有多种生理功能、无毒、无抗药性的绿色饲料添加剂。葡萄糖氧化酶可以保证饲料新鲜、防止霉菌感染、改善生猪健康状态、促进生长。葡萄糖氧化酶作为饲料添加剂[1]，在仔猪、母猪上试验报道较多[2-3]，但在种公猪上的应用报道很少。本试验深入探讨葡萄糖氧化酶对公猪健康及生产性能影响，确定其在公猪饲养中的应用方案。1材料与方法1.1试验材料葡萄糖氧化酶（15 U/g）由保定鲜尔康生物工程有限公司提供。1.2动物分组及试验设计选择18~24月龄、达到体成熟、体重在150~200 kg、精液品质良好、正在使用的健康长白种公猪25头，分为5组，每组5个重复。对照组公猪饲喂基础日粮，试验1、2、3、4组公猪在基础日粮基础上分别添加1、2、3、4 kg/t葡萄糖氧化酶。根据种猪营养需要和饲养标准，配制基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.007.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100玉米60消化能/(MJ/kg)13.85麦麸10粗蛋白/%16.31豆粕21钙/%0.82豆油4有效磷/%0.48预混料5赖氨酸/%1.05蛋氨酸+胱氨酸/%0.32注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 1 500 IU、VK 5 mg、VE 25 mg、VB1 2 mg、VB2 20 mg、VB6 8 mg、VB12 0.025 mg、叶酸0.5 mg、生物素0.035 mg、泛酸25 mg、烟酸35mg、Fe 95 mg、Cu 5 mg、Zn 80 mg、Mn 35 mg、Se 0.3 mg、I 0.25 mg。2.营养水平消化能为计算值，其他为实测值。试验预试期7 d，正式试验期28 d，采用常规饲养管理，圈舍饲养，自由饮水。室内温度15~25 ℃。每头猪每天定量饲喂2.5 kg，每天7：00和16：00各喂1次。每天清扫猪舍，舍内通风良好，保持猪舍卫生。1.2测定指标及方法1.2.1生化指标测定试验结束时每头猪采集颈下血液10 mL，测定血清生化指标，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定，所有生化指标均采用试剂盒测定。芳香化酶活性及睾酮和雌二醇含量测定试剂盒购自美国R＆D Systems公司，按说明书指示进行操作。采用ELISA法测定血清样品中的总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及丙二醛（MDA）水平。试剂盒购自北京海瑞祥天生物科技有限公司，按说明书指示进行操作。1.2.2精液质量测定精液采集：收集公猪一次射出的全部精液，保证精液不受污染；采精频率为每周2次。依据世界卫生组织提供的标准方法检测公猪精液量、精子密度、精子活力、精子畸形率[4]。精子畸形率：精子用吉姆萨染液染色3 min，并在显微镜400倍下观察，计算畸形精子的百分率。精子密度：精子密度仪测定。精子活率：悬滴法检测。1.3数据统计与分析采用Excel 2010对数据进行初步计算，采用SPSS 20.0软件对数据进行均值比较和差异性检验，采用One-way ANOVA程序检验各组数据间差异是否显著，用LSD法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1葡萄糖氧化酶对公猪血清激素和酶活性的影响（见表2）由表2可知，试验1、2、3、4组公猪血清中雌二醇含量分别提高12.54%、23.05%、50.06%、62.04%，其中试验3、4组达到显著水平（P＜0.05）；芳香化酶活性分别提高11.54%、4.19%、29.38%、21.11%，其中试验3组与对照组差异显著（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.007.T002表2葡萄糖氧化酶对公猪血清激素和酶活性的影响组别睾酮/(μg/L)雌二醇/(ng/L)芳香化酶/(U/mL)对照组1.54±0.1215.62±0.98a19.33±3.12a试验1组1.56±0.2017.58±1.87ab21.56±1.98a试验2组1.62±0.1419.22±1.35ab20.14±4.15a试验3组1.65±0.2323.44±4.01b25.01±3.44b试验4组1.63±0.1825.31±3.25b23.41±5.02ab注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P＞0.05）；下表同。2.2葡萄糖氧化酶对公猪血清抗氧化指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验2、3、4组谷胱甘肽过氧化物酶含量分别提高24.51%、39.00%、44.28%，其中试验3、4组达到显著水平（P＜0.05），试验1~4组超氧化物歧化酶含量分别提高2.56%、9.39%、14.87%、10.82%，其中试验3、4组达到显著水平（P＜0.05），总抗氧化力分别提高8.87%、27.41%、36.29%、32.26%，其中试验2、3、4组达到显著水平（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.007.T003表3葡萄糖氧化酶对公猪血清抗氧化指标的影响组别谷胱甘肽过氧化物酶/(ng/L)超氧化物歧化酶/(μg/L)丙二醛/(μmol/L)总抗氧化能力/(U/mL)对照组143.24±9.16a268.27±35.14a3.98±2.151.24±0.15a试验1组140.57±13.25a275.14±41.01a4.06±3.181.35±0.24a试验2组178.35±16.14ab293.46±28.14ab3.12±4.011.58±0.17b试验3组199.11±14.25b308.15±41.15b2.98±3.921.69±0.22b试验4组206.67±19.46b297.31±30.18b3.04±4.181.64±0.08b2.3葡萄糖氧化酶对公猪精液质量的影响（见表4）由表4可知，试验3组采精量最多；与对照组相比，试验1、2、3、4组采精量分别提高1.73%、2.61%、5.06%、5.02%，但各组间差异不显著（P＞0.05）。试验2组精子密度最高；与对照组相比，试验1、2、3、4组精子密度分别提高0.23%、7.65%、6.94%、7.37%，各处理间差异不显著（P＞0.05）。试验2组精子活率最高；与对照组相比，试验1、2、3、4组精子活率分别提高2.53%、7.04%、5.84%、5.87%；试验2、3、4组精子活率显著高于对照组（P＜0.05）。随葡萄糖氧化酶增加，种公猪的精子畸形率依次降低；与对照组相比，试验1、2、3、4组分别降低17.11%、35.22%、32.71%、45.16%；试验2、3、4组精子畸形率显著低于对照组（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.02.007.T004表4葡萄糖氧化酶对公猪精液质量的影响组别采精量/mL精子密度/(个/mL)精子活率/%精子畸形率/%对照组237.20±12.104.340×10881.15±3.12a11.16±0.41a试验1组241.30±10.024.350×10883.21±4.15ab9.25±0.19ab试验2组243.40±14.184.672×10886.86±4.25b7.23±0.21b试验3组249.20±10.414.641×10885.89±3.16b7.51±0.24b试验4组249.10±15.134.660×10885.91±4.01b6.12±0.16b3讨论猪场中种公猪质量对猪场效益的影响很大。因此，通过技术手段提高种公猪配种能力，为猪场提供优质精液十分重要。精液品质是公猪的繁殖能力的重要体现，直接影响母猪的受胎率和繁殖性能[5-6]。公猪的一次射精240 mL左右，一次采精量在150~500 mL范围都属正常。因此，本试验中种公猪的采精量都在正常范围内。本试验中，添加2、3、4 kg/t葡萄糖氧化酶后，精子活率显著提高，精子畸形率显著降低。因此，葡萄糖氧化酶可以提高公猪精液质量。种公猪的繁殖性能可能受多种因素影响，其中营养因素是关键因素之一。营养因素主要包括饲料能量、蛋白和氨基酸等。对公猪而言，除了要求营养素平衡充足，饲料安全也是重要因素之一[7-8]。饲料由于原料收获、贮存不当及活性成分丰富等原因，饲料氧化酸败、霉菌感染普遍，而霉菌毒素，特别是玉米赤霉烯酮，具有明显的生殖毒性，长期摄入会造成种用动物繁殖技能明显损伤。王国强[9]对全国12省市收集的饲料样品进行检测，结果显示，玉米赤霉烯酮阳性率92.59%，平均值为332.2 μg/kg。GOD可以将β-D-葡萄糖降解成葡萄糖酸和过氧化氢，葡萄糖酸属有机酸，可以降低胃肠道pH值，激活胃蛋白酶源等消化酶活性，提高畜禽对营养物质的消化。试验证明葡萄糖酸在小肠一般较少被降解吸收，大部分能够完整到达肠道后段，然后乳酸菌利用该类物质生成丁酸，用于促进肠道黏膜发育，从而提高消化道养分吸收能力；其次，GOD本身具有氧化还原能力，可以达到清除肠道上皮细胞自由基，保护肠道上皮细胞的物理完整作用。此外，GOD催化反应中耗氧，在肠道形成厌氧环境，抑制好氧微生物（多数为有害菌）的生长与繁殖，同时，过氧化氢在肠道达到一定浓度时，可直接抑制大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、葡萄球菌和弧菌的生长繁殖，从而达到调整肠道微生态平衡的作用[10]。GOD还可以消减动物霉菌毒素中毒和预防饲料霉菌感染。GOD可直接进入肝脏，提高肝脏抗氧化能力，从而加速毒性成分的代谢，减少对机体伤害。本试验结果显示，添加葡萄糖氧化酶后公猪血清总抗氧化力、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性显著提高，丙二醛含量显著下降，说明肝脏抗氧化能力改善；同时，反应产生的过氧化氢可抑制霉菌的生长，同时可以使具备氧杂萘邻酮基团的霉菌毒素被氧化脱氢或通过氧化作用打开其呋喃环，进而发挥脱毒作用，解除饲料中真菌毒素的危害[11]。GOD通过这两方面作用，改善动物健康状态，提高睾酮、雌二醇、芳香化酶等相关激素和酶活性，从而改善种公猪繁殖能力。4结论饲料中添加葡萄糖氧化酶可以通过提高种公猪机体抗氧化能力和性激素水平，改善健康状态和精液质量；综合效果与成本，葡萄糖氧化酶在公猪日粮中的适宜添加量为2 kg/t.