鸡肉具有低脂肪、低热量以及高蛋白等特点，深受人们喜爱[1]。但在现代集约化、高密度养殖中，肉鸡养殖存在饮食、饲养环境的改变以及应激导致的肠道功能紊乱等问题，从而降低肉鸡的生产能力，导致肉品质下降，甚至死亡[2]。植物多糖具有无毒副作用、耐药性低、广谱抗菌活性等优点[3]。研究发现，日粮中添加药用植物多糖可增强肉仔鸡的免疫功能，改善抗氧化能力及其肠道屏障功能[4]。黄花蒿（Artemisia annua L.）为一年生草本菊科植物，环境适应性强，不仅富含营养物质，还含有黄酮、多糖、多酚以及挥发油等多种生物活性成分。但由于植物细胞壁的存在，黄花蒿的生物活性物质利用率较低。单独或复合使用纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶进行酶促处理均能够降解或破坏细胞壁，从而更好地释放生物活性物质[5-6]。研究表明，日粮中添加1 g/kg的酶解黄花蒿可以改善母猪因热应激导致的氧化应激以及对肠道的损伤[7]。Bao等[8]发现，黄花蒿多糖（AAP）在正常和由环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠的体液和细胞免疫中具有广泛的调节功能。本试验在肉仔鸡日粮中添加AAP，探究不同添加量的AAP对肉仔鸡生长性能及其组织抗氧化指标的影响，确定AAP在肉仔鸡中适宜的添加量，为AAP在禽类日粮中的合理应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料黄花蒿采自呼和浩特市境内，自然阴干，粉碎，按料液比为1∶15 g/mL加入600 mL蒸馏水，并按1∶1∶1加入纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶各6 g；在恒温振荡培养箱中经150 r/min 50 ℃酶解3 h，75 ℃水浴1 h，经抽滤浓缩，无水乙醇沉淀，冷冻干燥，制得黄花蒿多糖粉末。经苯酚硫酸法测定，其多糖含量约为40%。1.2试验日粮试验基础日粮为玉米-豆粕型，参照NY/T33—2004配制，各阶段营养水平均满足肉鸡的营养需要标准。试验期共42 d（前期1~21 d，后期22~42 d）。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目1~21 d22~42 d原料组成/%玉米52.5058.80豆粕40.0033.80豆油3.003.00石粉1.081.22磷酸氢钙1.901.80氯化钠0.370.37蛋氨酸0.190.07赖氨酸0.050.03胆碱0.110.11预混料0.800.80合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.4212.62粗蛋白质/%21.7719.65钙/%1.001.02有效磷/%0.440.42赖氨酸/%1.341.15蛋氨酸/%0.550.40胱氨酸/%0.400.36注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 9 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 26 mg、VB1 3.00 mg、VB2 8.00 mg、VB6 4.40 mg、VB12 0.012 mg、VK3 1.20 mg、烟酸45 mg、泛酸钙15 mg、叶酸0.75 mg、生物素0.20 mg、锰120 mg、锌108 mg、铁100 mg、铜10 mg、碘1.50 mg、硒0.35 mg。2.营养水平中粗蛋白为实测值，其余均为计算值。1.3试验设计试验采用单因素随机试验设计，选取240只健康的1日龄AA肉仔鸡，随机分为5组，每组6个重复，每个重复8只鸡（公、母各半）。对照组鸡饲喂基础日粮，各试验组分别在基础日粮中添加250、500、750、1 000 mg/kg的AAP。1.4饲养管理试验动物均采用单层笼养方式饲养，每笼为1个重复组。鸡自由采食饮水，试验期间人为调节鸡舍内的温度、湿度以及光照。１日龄首次使用新城疫滴鼻点眼；7日龄使用新城疫苗点眼；10日龄使用鸡新城疫灭活疫苗（皮下注射）；14日龄使用鸡传染性法氏囊灭活疫苗滴鼻；20日龄使用新城疫、传染性支管炎二联灭活疫苗滴鼻。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能试验第1、21、42 d，各组鸡空腹称重，以每个重复为单位准确记录各组试验鸡的体重、加料量以及剩料量，计算在试验前期、后期以及全期的平均体重（ABW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）以及成活率，统计成活率。ADG=(末重-初重)/试验天数(1)ADFI=饲料总耗量/试验天数(2)F/G=ADFI/ADG(3)成活率=(试验期鸡总数-试验期死亡鸡数)/试验期鸡总数×100%(4)1.5.2抗氧化指标试验第21 d与42 d，每个重复随机选取1只鸡进行屠宰，采集肝脏、脾脏、十二指肠、空肠以及回肠组织样品，分装在锡箔纸内，液氮冷冻后转移至-80 ℃冰箱。称取0.5 g肝脏、脾脏以及各肠段组织样，按1∶9比例在4 ℃ 0.9%生理盐水中匀浆，充分匀浆后置于4 ℃离心机中3 000×g离心15 min，取上清液，于-80 ℃保存。使用试剂盒（南京建成生物工程研究所）参照说明书测定总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量以及总超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件进行整理，SAS 9.2软件GLM模型对数据进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值和标准误（SEM）”表示，P0.01表示差异极显著，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1AAP对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，22~42日龄时，与对照组相比，添加750 mg/kg的AAP肉仔鸡的ADG极显著提高（P0.01），添加750 mg/kg和1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡的F/G显著降低（P0.05）。1~42日龄时，添加750 mg/kg的AAP肉仔鸡的末重和ADG显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T002表2AAP对肉仔鸡生长性能的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 000ABW/g1 d44.2044.1944.1944.2244.240.070.99121 d650.61661.64665.19670.85674.316.720.44642 d2 220.79b2 159.24b2 275.71b2 446.67a2 283.81b42.520.0311~21 dADFI/[g/(只·d)]40.9639.8639.5739.0438.351.640.871ADG/[g/(只·d)]30.3230.8731.0531.3431.500.330.440F/G1.351.351.331.321.360.010.519成活率/%97.92100.0097.92100.00100.001.290.56722~42 dADFI/[g/(只·d)]137.84134.09135.98131.73132.332.570.602ADG/[g/(只·d)]74.46B74.22B77.30B87.22A76.81B2.010.001F/G1.80a1.71a1.73a1.51b1.73b0.060.022成活率/%95.83100.0097.9295.8397.922.110.6171~42 dADFI/[g/(只·d)]88.5183.2385.2882.5883.221.570.192ADG/[g/(只·d)]51.82b51.33b53.16b57.68a53.15b1.260.010F/G1.681.641.651.561.640.040.413成活率/%93.75100.0097.9295.8397.922.220.334注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2AAP对肉仔鸡肝脏抗氧化指标的影响（见表3）由表3可知，21日龄时，与对照组相比，添加不同剂量的AAP肉仔鸡肝脏中MDA含量均极显著降低（P0.01），添加1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡肝脏中SOD活性显著提高（P0.05），添加500、750、1 000 mg/kg肉仔鸡肝脏中T-AOC显著提高（P0.05）。42日龄时，与对照组相比，添加500 mg/kg、750 mg/kg的AAP肉仔鸡肝脏中SOD活性显著提高（P0.05），添加750 mg/kg的AAP肉仔鸡肝脏T-AOC显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T003表3AAP对肉仔鸡肝脏抗氧化指标的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 00021 dCAT/(U/mg prot)12.2013.1811.3812.6611.751.440.971SOD/(U/mg prot)827.73b912.01ab949.13ab976.52ab1 098.40a44.190.011GSH-Px/(U/mg prot)40.2048.2144.9848.8349.634.280.811T-AOC/(mmol/g prot)0.08b0.11ab0.13a0.14a0.14a0.010.043MDA/(μmol/g prot)6.92A5.07B4.55B2.08C4.96B0.630.00342 dCAT/(U/mg prot)6.646.476.636.887.180.580.984SOD/(U/mg prot)792.25c839.51c1 053.64ab1 170.24a918.60bc66.510.011GSH-Px/(U/mg prot)45.23ab46.45ab54.68ab63.37a44.00b4.950.016T-AOC/(mmol/g prot)0.06b0.10ab0.12ab0.14a0.12ab0.020.035MDA/(μmol/g prot)4.023.633.123.303.480.440.8682.3AAP对肉仔鸡脾脏抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，21日龄时，与对照组相比，添加不同剂量的AAP极肉仔鸡脾脏中MDA含量极显著降低（P0.01），添加250 mg/kg、500 mg/kg的APP肉仔鸡脾脏SOD活性极显著提高（P0.01），添加750 mg/kg、1 000 mg/kg的APP肉仔鸡脾脏GSH-Px活性极显著提高（P0.01）。42日龄时，添加500 mg/kg、750 mg/kg的AAP肉仔鸡脾脏CAT活性显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T004表4AAP对肉仔鸡脾脏抗氧化指标的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 00021 dCAT/(U/mg prot)2.562.132.792.732.260.210.296SOD/(U/mg prot)196.81C315.24A257.43B237.45BC189.12C21.440.001GSH-Px/(U/mg prot)164.48C162.13C185.79BC263.06A211.80B15.660.001T-AOC/(mmol/g prot)0.160.140.140.190.170.010.284MDA/(μmol/g prot)6.46A4.39B3.39B2.59B3.48B0.530.00142 dCAT/(U/mg prot)0.76b0.90ab1.06a1.07a0.93ab0.060.019SOD/(U/mg prot)79.8670.8673.7778.8092.674.650.163GSH-Px/(U/mg prot)93.0575.6076.6793.8685.796.810.487T-AOC/(mmol/g prot)0.090.090.100.080.080.010.330MDA/(μmol/g prot)3.242.762.752.702.800.290.9102.4AAP对肉仔鸡十二指肠抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，21日龄时，与对照组相比，添加750 mg/kg的AAP肉仔鸡十二指肠CAT活性显著提高（P0.05），添加750 mg/kg、1 000 mg/kg肉仔鸡十二指肠SOD和GSH-Px活性极显著提高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T005表5AAP对肉仔鸡十二指肠抗氧化指标的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 00021 dCAT/(U/mg prot)2.59b3.14b4.61ab6.13a3.68b0.700.012SOD/(U/mg prot)492.70B587.01B768.49A800.37A760.28A39.780.001GSH-Px/(U/mg prot)19.58C18.64C25.39BC31.06AB36.00A2.600.008T-AOC/(mmol/g prot)0.090.120.110.110.090.020.280MDA/(μmol/g prot)3.162.032.073.112.900.420.33942 dCAT/(U/mg prot)1.35b1.48b1.31b1.41b2.72a0.220.014SOD/(U/mg prot)528.44479.30510.63558.44594.3831.060.368GSH-Px/(U/mg prot)21.85C30.05BC38.15B53.33A39.47B4.460.001T-AOC/(mmol/g prot)0.130.110.150.130.110.020.691MDA/(μmol/g prot)1.98a1.22ab1.32ab0.95ab0.31b0.310.02042日龄时，与对照组相比，添加1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡十二指肠CAT活性显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05），添加500、750、1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡十二指肠GSH-Px活性极显著提高（P0.01）。2.5AAP对肉仔鸡空肠抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，21日龄时，与对照组相比，添加1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡空肠SOD活性显著提高（P0.05），添加750 mg/kg肉仔鸡空肠GSH-Px活性和T-AOC显著提高（P0.05）；添加500、750、1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡空肠MDA含量极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T006表6AAP对肉仔鸡空肠抗氧化指标的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 00021 dCAT/(U/mg prot)3.042.742.392.602.720.300.815SOD/(U/mg prot)311.89b357.59ab318.86b396.79ab430.46a22.080.038GSH-Px/(U/mg prot)23.73b22.98b26.86ab42.42a28.14ab4.340.041T-AOC/(mmol/g prot)0.05b0.07ab0.08ab0.14a0.08ab0.020.017MDA/(μmol/g prot)3.21A2.73AB1.75BC1.38C2.02BC0.330.00842 dCAT/(U/mg prot)1.991.952.202.701.230.400.481SOD/(U/mg prot)356.57CD337.08D526.00AB646.20A477.01BC42.940.001GSH-Px/(U/mg prot)34.69b40.47ab57.46ab63.87a58.48ab6.630.036T-AOC/(mmol/g prot)0.07B0.07B0.11B0.13B0.23A0.020.001MDA/(μmol/g prot)2.041.301.862.863.040.700.68642日龄时，与对照组相比，添加500 mg/kg、750 mg/kg的AAP肉仔鸡空肠中SOD活性极显著提高（P0.01），添加1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡空肠中T-AOC极显著提高（P0.01），添加750 mg/kg的AAP肉仔鸡空肠中GSH-Px活性显著提高（P0.05）。2.6AAP对肉仔鸡回肠抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，21日龄时，与对照组相比，添加750 mg/kg和1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡回肠CAT活性显著提高（P0.05），T-AOC极显著提高（P0.01），MDA含量极显著降低（P0.01），其中以750 mg/kg添加量效果较好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.01.009.T007表7AAP对肉仔鸡回肠抗氧化指标的影响项目AAP添加量/(mg/kg)SEMP值02505007501 00021 dCAT/(U/mg prot)3.27c4.15bc4.49abc4.81ab5.71a0.340.035SOD/(U/mg prot)450.90566.68513.36572.58492.8538.850.375GSH-Px/(U/mg prot)63.8177.5779.1582.5755.097.060.109T-AOC/(mmol/g prot)0.15D0.23AB0.18CD0.26A0.19BC0.020.001MDA/(μmol/g prot)4.68A3.98A2.13B1.33B2.08B0.530.00642 dCAT/(U/mg prot)1.89b2.52ab2.86ab3.91a4.02a0.450.042SOD/(U/mg prot)390.51B380.73B404.02B474.50A378.13B18.470.001GSH-Px/(U/mg prot)24.09C38.25BC45.61B63.36A52.17B4.570.001T-AOC/(mmol/g prot)0.12B0.12B0.15B0.21A0.20A0.010.004MDA/(μmol/g prot)1.37A1.25AB1.06AB0.33C0.93B0.130.00142日龄，与对照组相比，添加750 mg/kg、1 000 mg/kg的AAP肉仔鸡回肠CAT活性显著提高（P0.05），T-AOC和GSH-Px活性极显著提高（P0.01），MDA含量极显著降低（P0.01），添加750 mg/kg AAP肉仔鸡回肠SOD活性极显著提高（P0.01）。3讨论3.1AAP对肉仔鸡生长性能的影响来自植物中的生物活性化合物可以改善动物的生长性能，其中多糖类化合物能够促进家禽的肠道发育，有利于消化吸收和代谢进入体内的营养物质，降低料重比，从而促进禽类生长[9-10]。Long等[11]研究发现，在日粮中添加2 000 mg/kg枸杞多糖可提高肉仔鸡第21 d和42 d的体重以及生长全期的平均日增重。赵伟鑫[12]研究发现，日粮中添加0.05%山药粗多糖可明显提高肉仔鸡的平均日增重和平均日采食量，降低料重比。岳永波等[13]研究发现，黄芪多糖可促进肉仔鸡的生长，且在添加量为1g/kg、2 g/kg时效果较好。本研究结果显示，添加适宜剂量的AAP可以提高肉仔鸡的体重，降低后期肉仔鸡的料重比，但对试验期间肉仔鸡的成活率无影响，表明AAP在提高肉仔鸡的体重方面具有一定的促进作用。本课题组前期研究发现，在日粮中添加750 mg/kg的黑沙蒿多糖可以显著提高试验后期肉仔鸡的平均日增重，降低料重比，其促生长效果与抗生素相当[14]。本研究结果与上述结论相似，表明适宜剂量的AAP可以改善肉仔鸡的生长性能，但不同的试验对肉仔鸡促生长性能的效果不同，可能是由于多糖种类以及添加剂量的不同导致。3.2AAP对肉仔鸡抗氧化指标的影响肝脏是禽类重要的代谢和合成器官，是氧化还原反应的主要部位，易受到氧化应激的损伤[15]。脾脏是重要的免疫器官之一，其结构和功能与动物免疫功能密切相关，氧化应激引起的氧化损伤往往会导致脾脏结构和功能改变[16]。肠道是肉仔鸡消化吸收到达体内营养物质的主要部位，是保证其健康生长和发育的生理基础[17]。肠上皮细胞通过氧代谢或肠道共生菌产生活性氧（ROS）或活性氮（RNS），从而调节肠道健康[18]。但在缺乏营养、外界环境刺激导致的应激以及病原微生物的入侵等不利条件下，肠上皮细胞完整性降低，肠道通透性增加，氧化还原失衡导致肠道黏膜易受到内外应激源的影响，大量自由基因此产生，最终导致氧化应激发生[17,19]。而机体内氧化应激产生的同时也伴随着抗氧化防御系统的激活，避免其对组织器官造成氧化损伤。因此，维持机体肝脏、脾脏以及肠道抗氧化防御系统的平衡对肉仔鸡的健康具有重要作用。抗氧化系统中的抗氧化酶在应对氧化攻击形成的不平衡中发挥重要作用，主要包括SOD、CAT、GSH-Px等，抗氧化酶可以改变会降低机体内过量活性氧自由基的水平，从而维护细胞免受氧化损伤[20]。T-AOC可以反映机体的抗氧化能力；MDA是动物机体脂质过氧化反应的主要产物之一，能够间接反映氧自由基对细胞损伤的程度，一般情况下MDA含量越高，机体抗氧化能力越弱[21]。Li等[22]使用老年鼠与幼鼠进行对比，发现老年鼠肝脏和心脏中的抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活性降低，MDA水平升高；而在日粮中分别添加500 mg/kg的枸杞多糖与维生素C后，均可提高老年鼠各组织中抗氧化酶活性，降低MDA水平，从而缓解其衰老，且多糖组优于维生素C组。赵正伟等[23]在日粮中添加0.2 g/kg的黄芪多糖，发现滩羊血清中GSH-Px活性明显提高，MDA含量明显降低。研究发现，青蒿多糖能够抑制氧化应激状态下体外免疫细胞中MDA产生，提高其GSH的水平和T-AOC，从而抑制氧化应激产生，提高其抗氧化能力[24]。本课题组前期研究表明，在日粮中添加750 mg/kg的艾蒿多糖提高了肉仔鸡小肠中总抗氧化能力和CAT、GSH-Px、SOD的活性及CAT、SOD和GPx7基因表达量，并降低MDA含量，进而调节肉仔鸡的抗氧化能力[25]。本研究结果表明，随着AAP添加量增加，可以不同程度地提高肉仔鸡肝脏、脾脏以及肠道黏膜中抗氧化酶的活性和总抗氧化能力，降低MDA含量，与上述的研究结果相似。GSH-Px、SOD及CAT等活性的增加可以消除ROS的产生，减少脂质过氧化副产物的生成，从而保持细胞膜结构和功能的完整性，提高机体的抗氧化性能[26]。因此，适宜剂量的AAP对肉仔鸡具有一定的抗氧化作用。4结论本研究结果表明，日粮中添加AAP可以显著改善肉仔鸡的生长性能，提高组织中抗氧化酶的活性和总抗氧化能力，降低MDA含量，且AAP添加剂量为750 mg/kg时效果较好。