自2015年国家开展“粮改饲”工程以来，农业产业结构得到了进一步优化，促进高产、高效的现代化农业发展，满足人们在农业生产过程中的需求[1]。杀虫剂、除草剂等农药在生产过程中起着至关重要的作用，但农药残留已成为食品质量安全的重大隐患[2]。有关青贮玉米中杀虫剂、杀菌剂、杀螨剂等同时检测的方法少有报道[3-5]。吴志华等[6]运用气相色谱仪建立饲料中拟除虫菊酯类农药残留量的检测方法，回收率在74.19%~105.37%范围内，符合检测要求。但是，该方法每个样品需要高达100 mL丙酮，有机试剂用量大，石油醚萃取后浓缩，耗时长，降低工作效率。宋合兴等[7]将样品经一步提取三步净化后，以选择离子模式经气相色谱-质谱仪进行检测。针对基质复杂的饲料样品，虽达到很好的净化效果，添加回收试验后回收率在82.82%~118.54%范围内，相对标准偏差为3.11%~9.22%，但前处理过程烦琐。现有国家标准只涉及单一种类农药残留检测，如GB/T 19372—2003《饲料中除虫菊酯类农药残留量的测定 气相色谱法》[8]。方法在检测过程中使用石油醚等对试验人员健康危害较大的有机试剂，安全性低；前处理使用的层析柱，需要自主填充，操作复杂，降低检测效率，不利于方法的推广和大批量样品的检测。文章选择玉米生长时期常用农药进行研究，建立一种同时检测青贮中多种农药残留量的快速、高效的分析方法，为青贮玉米多种农药残留检测提供技术参考。1材料与方法1.1仪器与设备GM-K06格明厨房机械（破壁料理机）购自佛山市顺德区格明电器实业有限公司；T-200电子天平购自常熟双杰仪器制造厂；CSR-1-10Ⅱ超纯水器购自北京爱思泰克科技开发有限公司；T25均质器购自IKA公司；TTL-DC Ⅱ型氮吹仪购自北京同泰联科技发展有限公司；Vortex-2漩涡混匀仪购自上海沪析实业有限公司；GC-2010PLUS气相色谱仪，配有电子捕获检测器（ECD），购自日本岛津公司。1.2材料与试剂氯化钠为分析纯购自福晨（天津）化学试剂有限公司；乙腈、丙酮均为色谱纯，购自Fisher Chemical；青贮玉米购自饲料市场。1.2.1农药标准溶液标准品异丙甲草胺、氰戊菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、腐霉利、虫螨腈浓度均为1 000 mg/L。1.2.2农药混合标准溶液分别取各农药标准储备液50 μL于5 mL容量瓶中用丙酮分别稀释定容到5 mL，配成浓度为10 mg/L的使用液，密封储存于4 ℃冰箱，备用。1.3仪器条件GC-2010PLUS气相色谱仪，配有电子捕获检测器（ECD），毛细管柱RTX-5和Wondacap1。进样口温度：200 ℃。检测器温度：320 ℃。柱温：初温150 ℃保持2 min，以6 ℃/min升至270 ℃并保持18 min。气体流量：14 mL/min。进样量：1 μL。分流比：10∶1。1.4样品前处理1.4.1样品提取将样品四分法取样，放入破壁机中打碎，准确称取25 g样品，加入50 mL乙腈和25 mL超纯水，放于高速匀浆机内，匀浆提取2 min，转入至装有15 g氯化钠100 mL具塞量筒中（氯化钠量以足量饱和即可），剧烈振荡约30 s，室温下静置30 min，使有机相和水相分层。1.4.2样品净化从具塞量筒中吸取10.00 mL溶液置于15 mL玻璃试管中，提取液在80 ℃的条件下氮吹至近干，加入2 mL正己烷，在涡旋混合器上涡旋30 s后待净化。将弗罗里矽固相萃取柱依次用5 mL丙酮+正己烷（10+90）及5 mL正己烷预淋洗。当溶液液面达到柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用15 mL刻度离心管接收洗脱液，用5 mL丙酮+正己烷（10+90）冲洗试管后淋洗弗罗里矽柱，并重复3次，收集洗液，在50 ℃的氮吹仪上缓慢吹到约5 mL以下，用正己烷定容到5 mL，混匀，经0.22 μm的有机系滤膜过滤后移入进样瓶中，待测。1.5加标回收试验在青贮玉米空白样品中异丙甲草胺、氰戊菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、腐霉利、虫螨腈6种农药，添加浓度为0.02、0.06、0.10 mg/kg，每个浓度重复6次。2结果与分析2.1青贮玉米样品加水量的研究青贮玉米中含有较多纤维，样品前处理过程中进行未加水试验，匀浆提取时样品成糊状，匀浆不充分。参照NY/T 761—2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[9]。对青贮玉米中的含水量进行测定，结果为60%~70%。而蔬菜及水果含水量高达90%左右，因此对比加入0、10、25、50 mL的超纯水，添加浓度为0.06 mg/kg时，重复3次，青贮玉米样品的回收率和RSD值见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.T001表1青贮玉米样品不同加水量的回收率和RSD值加水量/mL回收率/%RSD值/%048.33~79.444.37~21.001063.44~88.893.13~12.572583.33~104.122.98~8.125046.47~88.8915.95~37.30由表1可知，当加水量为0和50 mL时，RSD值均超过20%。且当加水量为50 mL时，提取液总体积过大，影响操作。因此，综合考虑在同一添加浓度条件下，将加水范围缩小到15、25和30 mL进行试验，结果见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.T002表2青贮玉米样品不同加水量的回收率和RSD值加水量/mL回收率/%RSD值/%1566.67~95.006.15~15.262589.44~103.331.67~8.703071.11~125.567.75~28.04由表2可知，当加水量为15和30 mL时，RSD值均大于10%，最高值为28.04%；加水量为25 mL时，回收率及RSD均满足检测要求，因此，确定加水量为25 mL。2.2定量限该方法的定量限取值为30 mL，具有可接受的回收率，范围在70%~120%之间和RSD小于10%时的最低浓度。不同添加浓度加水30 mL对回收率、RSD值的影响见表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.T003表3不同添加浓度加水30 mL对回收率和RSD值的影响添加量/（mg/kg）回收率/%RSD值/%0.0153.33~76.675.39~26.150.0284.12~104.632.95~7.020.0387.40~109.323.69~9.34由表3可知，当添加量为0.01 mg/kg，回收率及RSD值均不符合检测需求，当添加量为0.02和0.03 mg/kg，回收率及RSD均较好。因此，用该方法可检测的最低浓度为0.02 mg/L。2.3方法应用2.3.1空白样品的测定6种农药色谱图见图1。由图1可知，6种农药峰形较好，响应值较高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.F001图16种农药的色谱图青贮玉米样品上机检测见图2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.F002图2饲料样品由图2可知，异丙甲草胺、氰戊菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、腐霉利、虫螨腈6种农药未检出。2.3.2方法的线性关系、回收率及精密度取空白青贮玉米样品，添加农药混合标准溶液，加标量为0.02、0.06、0.10 mg/kg，每个浓度重复6次，结果见表4。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.021.T004表4方法的线性关系、回收率、精密度（n=6）农药名称线性方程保留时间/min添加水平0.02 mg/kg0.06 mg/kg0.10 mg/kg回收率/%精密度%回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%异丙甲草胺Y=1.060 66×106X13.893104.633.56102.113.97103.752.53腐霉利Y=828 962X15.61795.134.1997.234.06105.832.44虫螨腈Y=809 370X17.72386.315.0386.124.8388.134.81氯氟氰菊酯Y=140 343X22.20387.365.1591.235.2690.834.97氯氟氰菊酯Y=765 769X22.54584.967.0283.006.7982.926.08氰戊菊酯Y=489 356X29.03788.365.2386.975.4689.674.29氰戊菊酯Y=330 041X29.77987.152.9584.314.2688.963.07溴氰菊酯Y=376 003X31.10884.123.0286.143.8488.542.74溴氰菊酯Y=262 461X32.00787.563.6992.135.9690.424.60注：1.由于进行的是单点添加回收试验，因此R2为1。2.其中氯氟氰菊酯，氰戊菊酯和溴氰菊酯均为2个峰，因此每种药有2个线性方程。由表4可知，利用该方法对青贮玉米中杀虫剂、杀菌剂、除草剂、杀螨剂类农药回收率在82.92%~105.83%之间，RSD值在2.44%~7.02%之间，满足检测需求。3结论试验建立了测定青贮玉米中4类6种农药残留量的方法，回收率为82.92%~105.83%，RSD值为2.44%~7.02%，定量限为0.02 mg/kg。该方法经过多次试验验证，具有选择性好、灵敏度高、结果准确、前处理过程简单、涉及的仪器设备和试剂数量少、操作简便、安全性高。