云南半细毛羊是经过长期选育的适于南方高寒湿润山区放牧饲养的一种毛肉兼用型羊品种[1]。磷是动物生长必需的矿物元素，在骨骼发育、遗传信息传递、能量代谢和酸碱平衡等方面均具有重要作用[2]。研究表明，空怀期母羊体况恢复、繁殖性能和其他矿物元素的代谢受到饲粮中磷水平的影响。饲粮中磷水平过高，母羊磷排泄量增加易造成环境污染和资源浪费[3]。有学者研究饲粮磷水平对崂山奶山羊[4]、内蒙古白绒山羊生长羯羊[5]、生长期波杂山羊[6]、欧拉型藏系后备母羊[7]和陕北白绒山羊断奶羔羊[8]等生产性能、养分排放、营养物质消化率和血清生化指标等方面指标的影响，以评定不同品种不同生理阶段的磷需要量。本文研究不同饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊能量代谢和血清繁殖激素指标的影响，确定磷的适宜水平，为制定云南半细毛羊饲养标准提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验采用单因素完全随机设计，选用健康、体重相近（46.36±2.77）kg、38月龄的经产两胎空怀期云南半细毛羊50只，随机分为5组，每组10只。5个处理组饲粮磷水平分别设为0.19%、0.32%、0.45%、0.56%和0.64%。基础日粮组成及营养水平见表１。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.001.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目磷添加水平/%0.190.320.450.560.64原料组成/%玉米33.4027.0026.8020.0019.00麦麸0.0010.7011.0022.5023.30豆粕9.505.304.900.000.00磷酸氢钙0.000.000.400.000.30碳酸钙0.400.350.000.200.00磷酸二氢钠0.000.150.400.800.90食盐0.600.500.500.500.50小苏打0.100.000.000.000.00预混料1.001.001.001.001.00小黑麦草14.0027.0030.0046.0046.00小麦秸41.0028.0025.009.009.00合计100.00100.00100.00100.00100.00营养水平总能/(MJ/kg)16.5016.7016.6216.7516.73代谢能/(MJ/kg)8.008.038.038.048.01粗蛋白质/%9.879.9010.1410.9210.94粗脂肪/%2.632.852.863.052.96中性洗涤纤维/%45.9848.4748.6049.7550.25酸性洗涤纤维/%27.9827.5427.2826.5826.56钙/%0.500.490.460.450.44磷/%0.190.320.450.560.64注：1.预混料为每千克日粮提供：Fe 245 mg、Mn 98 mg、Zn 80 mg、Cu 10 mg、I 2.5 mg、Co 0.65 mg、Se 0.65 mg、VA 10 000 IU、VD3 1 000 IU、VE 50 IU。2.营养水平中代谢能为计算值，其余指标均为实测值。1.2饲养管理试验在云南省昆明易兴恒畜牧科技有限公司进行。预试期14 d，正式试验期30 d。试验羊采用单栏舍饲养，试验前对栏舍进行打扫和消毒，母羊已经药物驱虫和免疫处理。每天饲喂2次（8：00和17：00），自由采食与饮水，5 d后按清晨空腹体重分层随机分组。1.3消化代谢试验试验第9~16 d，从各组中选择健康且体重相近的5只羊进行消化代谢试验。试验羊放入代谢笼中单笼饲养，预试期3 d，正式试验期5 d。每天采集各组200 g饲料和剩料样本。采用全收粪尿法收集母羊粪和尿。鲜粪样按质量的20%取样。使用盛有10%稀HCl的塑料桶收集尿液，经8层纱布过滤后按体积的10%取样。每只羊5 d的粪样和尿样混匀后用于能量指标测定。全部样品均于-20 ℃保存备用。1.4测定指标及方法1.4.1饲粮、粪和尿中常规营养成分测定饲粮、粪样测定初水分后经65 ℃烘干48 h，取出置空气中回潮24 h，利用粉碎机粉碎过60目筛制成风干样品，尿样经湿法消解后用于能量指标测定。饲粮样品中粗脂肪（EE）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、钙（Ca）和磷（P）含量参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[9]测定方法进行，粗蛋白质（CP）含量采用凯氏定氮仪（KT200 KjeltecTM，丹麦FOSS）测定。饲粮、粪样和尿样的能值采用氧弹测热法测定。1.4.2能量代谢指标计算公式食入总能(MJ/d)=投料饲粮总能-剩料总能(1)消化能(MJ/d)=GE-粪能(2)代谢能(MJ/d)=GE-粪能-尿能-甲烷能(3)总能消化率=(GE-粪能)/GE×100%(4)总能代谢率=(GE-粪能-尿能-甲烷能)/GE×100%(5)消化能代谢率=(GE-粪能-尿能-甲烷能)/(GE-粪能)×100%(6)粪能损失=粪能/GE×100%(7)尿能损失=尿能/GE×100%(8)甲烷能损失=甲烷能/GE×100%(9)甲烷能(MJ/d)=3.67+0.062×D+0.05×D-2.37(10)式中：D为总能消化率。甲烷能参照Blaxter等[10]的方法估算求得。1.4.3血清繁殖激素含量在试验结束前3 d，每组随机挑选5只试验羊清晨空腹颈静脉采血5 mL，室温下倾斜静置30 min，待血液凝固后3 000 r/min离心15 min，取上清液置于1.5 mL EP管中，-80 ℃保存备用。空怀期云南半细毛羊血清中雌二醇（E2）、黄体酮（P4）、促卵泡激素（FSH）和黄体激素（LH）含量采用酶联免疫法（ELISA）测定，由北京华英生物技术研究所完成。1.5数据统计与分析采用Excel 2010软件整理试验数据，采用SPSS 23.0软件进行单因素方差分析，选择Duncan氏法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，Ｐ0.05表示差异显著，Ｐ0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊能量代谢的影响（见表2）由表2可知，0.19%和0.32%磷水平组总能显著高于0.64%磷水平组（P0.05）。0.19%和0.32%磷水平组消化能和代谢能显著高于0.45%、0.56%和0.64%磷水平组（P0.05）；0.19%和0.32%磷水平组总能代谢率显著高于0.45%和0.56%磷水平组（P0.05），0.32%磷水平组总能代谢率显著高于0.64%磷水平组（P0.05）；0.19%和0.32%磷水平组粪能显著低于0.45%磷水平组（P0.05）。0.19%磷水平组粪能损失显著低于0.45%和0.56%磷水平组（P0.05），0.32%磷水平组粪能损失显著低于0.45%、0.56%和0.64%磷水平组（P0.05）。0.19%磷水平组尿能损失显著低于0.56%磷水平组（P0.05），前者消化能代谢率显著高于后者（P0.05）。0.32%磷水平组甲烷能、甲烷能损失和总能消化率显著高于0.45%、0.56%和0.64%磷水平组（P0.05），0.19%磷水平组甲烷能显著高于0.56%和0.64%磷水平组（P0.05），甲烷能损失和总能消化率显著高于0.45%和0.56%磷水平组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.001.T002表2饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊能量代谢的影响项目磷添加水平/%0.190.320.450.560.64能量的采食和排泄/(MJ/d)总能24.98±0.95a24.90±0.97a24.79±0.95ab24.24±0.95ab24.10±1.22b粪能7.92±0.44ABb7.80±0.93Bb8.56±0.48Aa8.21±0.69ABab8.14±0.74ABab尿能0.34±0.080.37±0.070.37±0.100.39±0.070.36±0.08甲烷能2.24±0.12Aab2.24±0.12Aa2.14±0.14ABbc2.11±0.13ABc2.10±0.14Bc消化能17.06±1.01ABa17.10±1.01Aa16.23±1.15ABCb16.04±1.09BCb15.97±1.11Cb代谢能14.48±0.9Aa14.49±0.92Aa13.72±1.00ABb13.53±0.94Bb13.51±0.99Bb能量利用效率/%总能消化率68.26±2.04Aab68.69±3.51Aa65.40±2.58Bc66.11±2.93ABc66.23±2.82ABbc总能代谢率57.94±1.88Aab58.22±3.23Aa55.27±2.36Bc55.78±2.55ABc56.03±2.64ABbc消化能代谢率84.87±0.53a84.74±0.53ab84.50±0.66ab84.37±0.42b84.58±0.59ab粪能损失31.74±2.04Bbc31.31±3.51Bc34.60±2.58Aa33.89±2.93ABa33.77±2.82ABab尿能损失1.38±0.34b1.48±0.3ab1.51±0.41ab1.63±0.28a1.49±0.33ab甲烷能损失68.26±2.04Aab68.69±3.51Aa65.40±2.58Bc66.11±2.93ABc66.23±2.82ABbc注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01）；下表同。2.2饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊血清繁殖激素含量的影响（见表3）由表3可知，0.64%磷水平组试验羊血清促黄体激素含量极显著高于0.56%磷水平组（P0.01），0.19%、0.32%和0.45%磷水平组显著高于0.56%磷水平组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.001.T003表3磷水平饲粮对空怀期云南半细毛羊血清繁殖激素含量的影响项目磷添加水平/%0.190.320.450.560.64雌二醇/(ng/L)18.82±4.3322.49±8.7718.86±9.2216.48±3.5418.72±6.83黄体酮/(μg/L)2.03±0.162.15±0.151.46±0.521.51±0.762.1±0.36促卵泡激素/(IU/L)6.37±0.755.33±1.77.3±1.295.47±1.916.79±0.63促黄体激素/(IU/L)6.03±0.79ABa6.18±1.31ABa5.78±0.57ABa3.98±0.94Bb6.81±0.17Aa3讨论3.1饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊能量代谢的影响反刍动物能量代谢与动物年龄、性别、生理状态、品种、饲粮营养水平、环境等因素有关[11-13]。反刍动物从饲粮摄取的总能量中以粪能形式损失的占20%~50%，以尿能形式损失的占4%~5%，粪能损失受不同饲粮组成影响较大，而尿能损失多与饲粮能量及蛋白质水平、氨基酸平衡等因素有关[14-15]。空怀期云南半细毛羊粪能损失为31.31%~34.60%，当饲粮磷水平超过0.32%时，其粪能排泄量和粪能损失将显著升高，与王文奇等[16]和崔璨等[17]报道的空怀期萨福克×阿勒泰杂交羊和杜蒙F1杂交羊粪能损失平均值相近（34.08%和31.70%），而低于张少丰等[18]报道的空怀期萨福克×阿勒泰杂交在0.30%磷水平饲粮100%饲喂条件下的粪能损失平均值（49.89%）。本试验中，空怀期云南半细毛羊尿能损失为1.38%~1.63%，稍低于楼灿等[11]和王惠等[19]报道的空怀期杜寒杂交母羊和陕北白绒山羊适宜磷水平（0.34%和0.20%）饲粮下尿能损失平均值（分别为2.63%和2.86%）。此外，空怀期云南半细毛羊尿能排泄量不受饲粮磷水平影响，而尿能损失则随着饲粮磷水平升高而增加。研究表明，空怀期云南半细毛羊消化能和代谢能平均值分别为16.48 MJ/d和13.95 MJ/d，与张少丰等[18]报道的0.30%磷水平饲粮对空怀期萨福克×阿勒泰杂交羊消化能和代谢能影响相似。而楼灿等[11]研究0.34%磷水平饲粮100%饲喂条件下空怀期杜寒杂交羊消化能和ME分别为9.34 MJ/d和7.34 MJ/d，均比本研究0.32%磷水平组低。本试验还表明，对于空怀期云南半细毛羊，有效能摄入量（消化能和代谢能）随着饲粮磷水平的降低呈逐渐下降趋势。本试验中，空怀期云南半细毛羊总能消化率和总能代谢率均比楼灿等[11]和张少丰等[18]结果偏高，而消化能代谢率则基本一致。王惠等[19]报道，空怀期陕北白绒山羊在0.20%磷水平饲粮下，能量利用效率与本研究结果相近。试验结果表明，0.19%至0.32%磷水平饲粮有利于空怀期云南半细毛羊有效能摄入量和能量的利用效率。3.2饲粮磷水平对空怀期云南半细毛羊血清繁殖激素的影响饲粮中磷供给长期不足或钙磷比例不当时直接影响反刍动物繁殖性能，可造成母畜发情异常、卵巢功能障碍、受胎率降低等情况[2,20]。母羊血清促卵泡激素和促黄体激素分泌可促使卵巢卵泡发育成熟、诱导排卵、促进黄体生成及雌激素合成[21]。血清黄体酮除维持子宫内环境稳定、促进胚胎着床外，可与雌二醇相互协作，通过对下丘脑-垂体轴负反馈作用来调节促卵泡激素和促黄体激素分泌[22]。本试验表明，空怀期云南半细毛羊血清雌二醇、黄体酮和促卵泡激素含量均不受饲粮磷水平影响。毕浩磊[23]研究发现，空怀期永昌肉羊血浆雌二醇和黄体酮含量分别为74.50 ng/L和0.23 μg/L。华蕊等[24]报道，空怀期海南黑山羊血清雌二醇、黄体酮、促卵泡激素和促黄体激素含量分别为70.68 ng/L、0.19 μg/L、5.14 IU/L和5.98 IU/L，空怀期永昌肉羊和海南黑山羊含量雌二醇含量均高于云上黑山羊，黄体酮含量均低于云上黑山羊，而海南黑山羊促卵泡激素和促黄体激素含量则与云上黑山羊接近。李卫娟等[25]研究表明，空怀期云南半细毛羊血清黄体酮、促卵泡激素和促黄体激素不受饲粮中钙水平的影响，而低钙饲粮组雌二醇含量最高。有研究表明，促黄体激素分泌在空怀期母羊排卵前会明显增加，排卵数增加有利于配种率的提高[22]。因此，中低磷水平饲粮就可以维持空怀期云南半细毛羊正常的繁殖激素分泌。4结论随着粪能排泄量和粪能损失的减少，低磷水平（0.19%、0.32%）饲粮显著提高空怀期云南半细毛羊的总能、消化能、代谢能、总能消化率、总能代谢率和消化能代谢率。空怀期云南半细毛羊血清雌二醇、黄体酮和促卵泡激素含量均不受饲粮磷水平影响。0.19%至0.32%磷水平饲粮既提高空怀期云南半细毛羊有效能摄入量和能量利用效率，又维持母羊正常的繁殖激素分泌，从而最低限度减少磷排泄带来的环境污染问题。