蛋鸡的饲养周期较长，经过高水平代谢的产蛋高峰期后，其机体代谢能力、生理功能逐渐退化，生产性能、蛋品质等随之下降[1]。发酵中草药由发酵益生菌和底物中草药两个部分组成[2]。底物中草药药效高、耐药性低、适口性好等[3]，但其含有有益大分子物质，不易被机体消化吸收。通过益生菌的发酵作用可将有益大分子物质，转变为易被机体肠道消化吸收的活性小分子物质，从而最大限度地发挥中草药的优势药理作用[4]。范作良等[5]在56周龄的蛋鸡饲粮中添加1%的发酵中草药后，极显著提高海兰褐蛋鸡的产蛋率。杨欣伟[6]在蛋鸡饲粮中添加0.5%发酵中草药（红曲霉、山药、山楂等）可以显著提高血清中总蛋白的含量。李凤龙[7]在蛋鸡日粮中添加发酵杜仲叶粉后，发现血清中HDL的含量显著提高，TC的含量显著下降。试验旨在研究发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期生产性能、血清生化指标和脂代谢的影响，以期改善京红蛋鸡产蛋后期的生产性能和脂代谢能力，为发酵中草药应用于蛋鸡产蛋后期的实际生产提供参考。1材料与方法1.1试验动物与设计试验研究对象为产蛋后期（54周龄）京红蛋鸡，随机选取480只体重相近京红蛋鸡，设置对照组与试验组，每组设置4个重复，每个重复60只蛋鸡。试验期35 d，其中预试期为7 d。对照组采用玉米-豆粕型日粮，试验组在基础日粮中添加4 g/kg发酵中草药（发酵中草药成分为党参、白术、白芍、茯苓等，发酵微生物为枯草芽孢杆菌5×108 CFU/g）。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米58.20代谢能/(MJ/kg)11.20豆油1.10粗蛋白/%16.80米糠3.00粗脂肪/%4.00小麦麸皮0.30粗纤维/%3.00豆粕18.50钙/%3.70玉米蛋白粉2.00总磷/%0.52棉粕3.00有效磷/%0.26棉籽蛋白2.00赖氨酸/%0.78石粉8.90苏氨酸/%0.54预混料3.00蛋氨酸+胱氨酸/%0.66注：预混料为每千克日粮提供：VD3 1 500 IU、VA 12 000 IU、VK 31 mg、VE 25 mg、VB6 8 mg、VB12 0.008 mg、生物素0.30 mg、泛酸16 mg、叶酸1.80 mg、胆碱500 mg、Zn 80 mg、Fe 90 mg、Se 0.20 mg、Mn 80 mg、I 0.45 mg。1.2饲养管理试验采用舍内笼养，鸡舍温度为（20±2）℃，相对湿度为50%±5%，光照15 h/d，人工光照强度为20 lx，纵向负压通风。各组均为人工饲喂，每天定时定量喂料3次，自由饮水，其余饲养规程采用常规饲养方法进行。1.3测定指标及方法1.3.1产蛋性能测定每日准确记录并统计各重复试验鸡的总产蛋个数、总蛋重、不合格蛋数、死淘鸡数，根据试验记录计算产蛋性能指标，计算公式如下。产蛋率=总产蛋数/(饲养天数×总鸡数)×100%(1)平均蛋重(g)=总产蛋量(kg)/总产蛋数×1 000(2)合格蛋率=合格蛋数/总产蛋数×100%(3)破蛋率=破蛋数/总产蛋数×100%(4)料蛋比=总耗料量(kg)/总产蛋重(kg)(5)死亡率=死亡鸡只数/总鸡数×100%(6)1.3.2蛋品质测定试验第35 d，从每个重复中随机选取4枚鸡蛋，用于测定鸡蛋的蛋品质。具体检测指标及测定仪器见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T002表2蛋品质测定指标及测定仪器检测项目测定仪器蛋重、蛋黄色度、蛋白高度、哈夫单位多功能蛋品质分析测定仪（EA-01，以色列ORKA公司）长径、短径、蛋壳厚度游标卡尺（数显卡尺，上海九量五金工具有限公司）蛋壳强度蛋壳强度仪（EFR-01，以色列ORKA公司）蛋黄重、蛋白重和蛋壳重电子天平（精度为0.01 g）蛋黄胆固醇含量总胆固醇测定试剂盒（A111，南京建成生物工程研究所）1.3.3血清生化指标的测定试验第35 d时，以各重复为单位，随机选取3只蛋鸡，禁食12 h，自由饮水，翅下静脉采血5 mL，静置30 min后，3 000 r/min离心10 min，分离血清，待测。血清生化指标：总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、钙（Ca）、谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。血清脂代谢：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）。以上指标均使用相应试剂盒（南京建成生物工程研究所）进行测定。1.3.4肝脏脂代谢的测定试验35 d时，从每个重复中随机选取3只鸡，采取颈静脉放血方式进行屠宰后，采集完整肝脏，称重，并计算肝脏器官指数。肝脏指数=鲜活器官重/总体重×100%(7)每只试验鸡统一摘取左侧肝脏，锡箔纸包裹并标记，-20 ℃保存。用以肝脏脂代谢相关指标的测定，包括高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）以及总胆固醇（TC），以上指标均使用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件进行初步整理，采用SPSS 22.0统计软件进行T检验分析。试验结果均以“平均值±标准差”表示。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1饲粮中添加发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期产蛋性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验组蛋鸡产蛋率显著增加4.76%（P0.05），试验组全期总蛋重增加29.05 kg。死亡率方面，试验组较对照组下降0.88%。其余各指标均差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T003表3饲粮中添加发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期产蛋性能的影响项目对照组试验组产蛋率/%81.95±1.33b85.85±1.57a平均蛋重/g65.17±0.3964.76±0.50合格蛋率/%97.24±1.1297.35±1.05破蛋率/%0.76±0.360.84±0.24料蛋比/%2.22±0.042.13±0.03死亡鸡数量/只5.003.00死亡率/%2.191.31总蛋重/kg666.63695.68注：同行数据肩标字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.0）；下表同。2.2饲粮中添加发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期蛋品质的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组蛋黄比例极显著升高7.52%（P0.01），蛋白比例极显著降低2.85%（P0.01），蛋壳强度极显著升高16.76%（P0.01）。试验组蛋黄胆固醇含量极显著降低21.99%（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T004表4饲粮中添加发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期蛋品质的影响项目对照组试验组蛋重/g72.45±3.7370.81±3.84蛋壳比例/%12.42±1.1612.47±1.09蛋黄比例/%23.67±1.46B25.45±1.13A蛋白比例/%63.91±1.76A62.09±1.39B蛋形指数1.30±0.051.33±0.05蛋壳厚度/mm0.36±0.040.34±0.02蛋白高度/mm5.53±2.006.09±0.76哈夫单位75.41±5.8075.17±3.37蛋黄色度9.07±0.269.27±0.59蛋壳强度/(kg/cm2)3.70±0.44B4.32±0.27A蛋黄胆固醇/(µmol/g)116.76±20.61A91.08±14.42B2.3发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验组蛋鸡血清总蛋白含量极显著提高22.31%（P0.01），白蛋白的含量极显著提高23.53%（P0.01），球蛋白含量极显著提高17.93%（P0.01），血钙含量极显著提高14.23%（P0.01），谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性分别降低6.69%和2.21%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T005表5发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清生化指标的影响项目对照组试验组总蛋白/（g/L）49.22±3.96B60.20±4.72A白蛋白/（g/L）15.98±1.34B19.74±1.93A球蛋白/（g/L）32.12±5.23B37.88±2.10A钙/（mmol/L）2.67±0.27B3.05±0.27A谷丙转氨酶/（U/L）3.14±1.122.93±0.39谷草转氨酶/（U/L）138.78±19.31135.71±13.442.4发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清脂代谢的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，试验组蛋鸡血清中总胆固醇含量极显著降低20.93%（P0.01），甘油三酯和低密度脂蛋白的含量分别降低5.17%和17.80%（P0.05），高密度脂蛋白的含量提高8.62%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T006表6发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清脂代谢的影响项目对照组试验组甘油三酯/（mmol/L）2.32±0.802.20±0.83总胆固醇/（mmol/L）7.74±1.13A6.12±0.74B高密度脂蛋白/（mmol/L）1.16±0.231.29±0.20低密度脂蛋白/（mmol/L）1.46±0.341.20±0.15mmol/L2.5发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期肝脏指数及肝脏脂代谢的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，试验组蛋鸡肝脏指数显著降低10.05%（P0.05），低密度脂蛋白和甘油三酯的含量分别显著降低14.89%（P0.05）和8.70%（P0.05），总胆固醇的含量极显著降低17.28%（P0.01），高密度脂蛋白的含量极显著升高17.20%（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.03.007.T007表7发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期肝脏脂代谢的影响项目对照组试验组肝脏指数/%1.99±0.10a1.79±0.20b甘油三酯/（µmol/g prot）0.23±0.04a0.21±0.01b总胆固醇/（µmol/g prot）74.59±4.37A61.70±6.08B高密度脂蛋白/（µmol/g prot）10.06±0.80B11.79±0.97A低密度脂蛋白/（µmol/g prot）21.63±2.52a18.41±3.12b3讨论3.1发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期产蛋性能的影响蛋鸡生产性能是评价其经济效益的指标，同时也直接反映京红蛋鸡的饲养状况[8]。白术的主要成分为白术多糖，可以促进机体对营养物质的吸收，经枯草芽孢杆菌发酵后，可以提高其活性，并且枯草芽孢杆菌代谢产物中含有多种酶类（蛋白酶、淀粉酶等），利于提升饲料转化率，从而提高家禽的生产性能[9-10]。范作良等[5]研究发现，在56周龄的蛋鸡饲粮中添加1%的发酵中草药后，海兰褐蛋鸡的产蛋率极显著提高。文贵辉等[9]研究发现，在28周龄绿壳蛋鸡饲粮中添喂5.0%白术多糖可以显著提高产蛋率。本试验结果表明，在京红蛋鸡产蛋后期的饲粮中添加4 g/kg发酵中草药，可以显著提高京红蛋鸡的产蛋率。3.2发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期蛋品质的影响鸡蛋品质不仅直接影响蛋的营养成分，而且与蛋的市场销售价格密切相关。鸡蛋品质主要通过蛋重、蛋黄颜色、蛋壳强度以及哈夫单位等指标来综合评估[11]。鸡蛋中蛋黄所含的营养成分种类和数量比蛋白多，故蛋黄的营养价值较蛋白高[11]。哈夫单位可反映蛋的新鲜程度，哈夫单位越高说明蛋品质越好。蛋壳品质中蛋壳强度和蛋壳厚度是影响鸡蛋运输、保存和价格的关键因素[12]。TC具有维持机体正常生命活动的功能，但机体内TC含量过高，会导致机体血管变窄，引发心血管及高血压疾病等。鸡蛋和其他食物相比，更易造成机体血清TC含量升高[13]。杨迪[14]指出，蛋黄比例越高，鸡蛋的营养价值越高。崔闯飞[15]研究发现，在52周龄海兰褐蛋鸡饲粮中添喂2×109 CFU/g枯草芽孢杆菌，可以显著提高蛋壳强度。徐浩然[16]在24周龄海兰白蛋鸡饲粮中添加1%的党参复方制剂后，鸡蛋中的TC含量显著降低。师宁宁等[17]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加0.1%枯草芽孢杆菌和中草药混合制剂，可以显著降低蛋黄TC含量。本试验结果表明，在京红蛋鸡产蛋后期的饲粮中添加4 g/kg发酵中草药，可以极显著升高蛋壳强度和蛋黄比例，极显著降低蛋白比例和蛋黄TC含量。3.3中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清生化指标的影响血清总蛋白、白蛋白的含量在一定程度上共同反映机体蛋白质的吸收即代谢水平[18]，总蛋白和白蛋白含量的增加，表明机体内蛋白质的合成代谢加强[19]。球蛋白是机体内参与免疫反应的主要蛋白质之一，可反映机体体液免疫功能的状况[20]。血钙的含量直接关系到蛋壳质量，AST、ALT活性作为检测肝功能的一项重要指标，当肝功能受损时，谷丙转氨酶和谷草转氨酶就会通过细胞进入血液中，使血液中的两种转氨酶活性上升[21]。杨欣伟[6]研究表明，在蛋鸡饲粮中添加0.50%发酵中草药（红曲霉、山药、山楂等），血清TP的含量显著提高13.95%，同时显著提高了GLB的含量。范作良等[5]在蛋鸡饲粮中添加发酵中草药（黄芪、当归等），试验组血清钙含量提高10.33%。徐文风等[22]在蛋鸡饲粮添加1.0%绞股蓝粉，血清中ALT、AST均有下降趋势，但差异不显著。本试验表明，在京红蛋鸡饲粮中添加4 g/kg发酵中草药后，京红蛋鸡血清TP含量显著提高，ALB、GLB含量、血清Ca含量极显著提高，ALT、AST的活性均有降低的趋势。饲粮中添加发酵中草药，可能会降低蛋鸡肝脏损伤。可能的原因是京红蛋鸡产蛋后期饲粮中添加发酵中草药，可以促进肠上皮细胞的增殖，增加吸收表面积，从而提高养物质的吸收效率，可增强肠道对蛋白质的吸收和利用，同时可降低肠道pH值，增加Ca的溶解度，从而提高血液Ca的含量[23]。3.4发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期血清脂肪代谢的影响血清中的TG、TC、HDL和LAL含量与机体内的脂肪代谢有密切关系[24]。TC含量可反映出机体脂代谢的水平。在一定范围内，TC含量的升高，表明脂代谢水平减弱，反之增强[25]。当机体能量摄入量较高时，甘油三酯在肝脏中的合成量升高，继而血液中甘油三酯的含量也升高。此时，机体脂肪的合成量亦升高。蛋黄中TC含量取决于肝脏中的脂蛋白组成成分，而脂蛋白成分与血液中TG、TC含量有关[26]。血清中LDL将TC从肝脏运到细胞，而HDL将TC从细胞运回肝脏[27]，LDL含量越低、HDL含量越高，说明蛋鸡脂代谢能力加强，反之减弱。胡忠泽等[28]研究表明，在蛋鸡日粮中添加1%的复方中草药（决明子和大黄），可以显著降低血清中TG、LDL和TC的含量，显著提高HDL含量。马得莹等[29]研究表明，在蛋鸡日粮添加女贞子可以显著提高蛋鸡血清中HDL含量，有降低血清TC和LAL的趋势，说明女贞子具有减少血液中胆固醇的沉积，调节蛋鸡脂类代谢的功能。李凤龙[7]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加0.5%的发酵杜仲叶粉，可显著降低蛋鸡血液TC、TG、LDL含量，提高HDL的含量。本试验结果表明，在京红蛋鸡产蛋后期饲粮中添加4 g/kg发酵中草药，能显著降低胆固醇含量，血清中TG和LDL含量均有降低趋势，血清中HDL含量有上升的趋势，结果表明，发酵中草药可降低蛋鸡血清中多余的胆固醇，降低胆固醇沉积量，从而改善产蛋后期京红蛋鸡的脂代谢能力[6]。3.5发酵中草药对京红蛋鸡产蛋后期肝脏脂代谢的影响肝脏在蛋禽机体中承担着脂肪合成及转运的主要功能。因此，家禽肝脏的脂代谢能力代表机体脂代谢的水平。TG经由肝脏内质网内合成后，联结胆固醇、载脂蛋白、磷脂后，以肝细胞分泌的方式，通过血液转运至肝外组织。HDL素有“脂质清道夫”之称，可将外周组织及血浆中的胆固醇运输到肝脏进行代谢清除。LDL则相反，将胆固醇转运至肝外组织细胞中[30]。李嘉懿等[31]在蛋鸡日粮中添加1 000 mg/kg凝结芽孢杆菌，结果表明，可以显著降低蛋鸡肝脏中TG含量。温洁[32]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加党参等中草药，显著降低蛋鸡肝脏TC含量，极显著降低肝脏TG含量。吴志文[33]研究发现，在蛋鸡饲粮中添加党参等中草药能显著降低蛋鸡肝脏指数，肝脏中TG、TC、LDL均不同程度地下降，而HDL的含量上升。本试验结果表明，在京红蛋鸡产蛋后期饲粮中添加4 g/kg发酵中草药，可显著或极显著降低蛋鸡肝脏中TG、TC、LDL及肝脏指数的含量，极显著升高肝脏HDL的含量。可能原因是发酵中草药降低蛋鸡机体内LDL合成和分解的速率，使得LDL含量降低，阻碍了LDL将胆固醇从肝脏中运输到细胞，提高机体内HDL的合成和分解的速率，促进HDL将胆固醇从细胞中运回肝脏，降低胆固醇在肝脏细胞中的沉积量，从而减轻肝脏的负担，同时抑制肝脏中脂肪酸和TC的形成，进而降低血清TC含量[23]。4结论在京红蛋鸡产蛋后期饲粮中添加4 g/kg的发酵中草药后，京红蛋鸡的产蛋率、鸡蛋蛋黄比例提高；蛋黄胆固醇含量降低，血清TP、ALB、GLB、Ca的含量提高，血清TC的含量降低；肝脏TC、LDL、TG的含量降低，肝脏HDL的含量升高。研究表明，发酵中草药可以提高京红蛋鸡产蛋后期的产蛋率，降低死亡率，改善蛋品质和肝脏脂代谢能力。