在饲用抗生素禁用的背景下，具有抑制病原微生物增殖功能的植物源多酚类物质逐渐成为替代抗生素饲料添加剂之一[1]。木兰科植物厚朴和凹叶厚朴干燥干皮、枝皮及根皮属于传统中药资源，是《饲料原料品种目录》中规定可以长期用于饲料生产的重要原料[2]。厚朴酚是厚朴及其提取物的主要活性成分。研究表明，厚朴中的酚类物质具有提高动物机体抗氧化[3]、抗炎[4]并维护肠道微生态平衡[5]等生物学功能，能够改善动物生产性能，提高动物健康水平，具有较高的饲用价值[6]。厚朴提取物在猪、禽生产中的研究较多，但在反刍动物养殖中仅有一些关于疾病治疗的报道，仍需进一步的研究。因此，本研究在日粮中分别添加不同水平的厚朴提取物，研究其对湖羊生长性能、瘤胃发酵参数、血清生化指标的影响，为厚朴提取物在反刍动物养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料本研究使用厚朴药材购自本地药材市场，参考徐洲等[7]的提取方法进行提取。工艺参数为：超声强度150 W，提取溶剂为乙醇，乙醇浓度为56%，碱浓度为0.8%，料液比为1∶36 g/mL，超声时间为29 min，获得厚朴提取物中厚朴酚、厚朴酚及总酚含量分别为9.76、1.94、11.70 mg/g。湖羊由甘肃环县农兴湖羊养殖专业合作社提供，保证湖羊日龄相近、健康、体重约为30 kg，总计72头。1.2试验设计将72头湖羊随机分为4组，每组3个重复，每个重复6只羊。A组（对照组）、B组、C组、D组分别在湖羊基础日粮中分别添加0、50、100、150 mg/kg厚朴提取物。预试期7 d，正式试验期56 d。日粮精粗比约为5∶5。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T001表1基础日粮与营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00青贮玉米秸秆14.50消化能/(MJ/kg)10.45苜蓿干草35.50粗蛋白/%15.69玉米16.38粗脂肪/%2.01豆粕25.16中性洗涤纤维/%35.48麸皮4.50酸性洗涤纤维/%24.65磷酸氢钙0.81磷/%0.48石粉0.85钙/%0.88食盐0.30预混料2.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 15 000 IU、VD 4 000 IU、VE 350 IU、铜15.5 mg、铁66 mg、锌56 mg、锰43 mg、碘1.2 mg、硒0.2 mg、钴0.01 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理每天6：30、11：30、17：30对湖羊进行饲喂，自由采食与饮水。每日观察羊的健康状况并进行记录，其他管理按照养殖场要求进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能正式饲喂试验开始与结束时对羊进行称重，每天记录湖羊饲喂量与饲料剩余量，计算湖羊平均日增重、平均日采食量及料重比。平均日增重=总增重/(试验天数×湖羊总数)(1)平均日采食量=总采食量/(试验天数×湖羊总数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2瘤胃发酵参数每个重复随机选择2头试验羊，利用瘤胃液收集管获取羊的瘤胃液，使用4层灭菌纱布过滤，分装于离心管中，-20 ℃保存。使用苯酚-次氯酸钠比色法测定氨态氮、挥发性脂肪酸含量，使用离子色谱法测定挥发性脂肪酸含量。1.4.3血清指标各重复随机选择1头试验羊，颈静脉采血，获取血液约10 mL，3 500 r/min离心10 min，取上清液于-20 ℃冰箱中保存，测定血清抗氧化、免疫及其他生化指标。血清生化指标试剂盒购自南京建成生物工程研究所。血清抗氧化指标包括：总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。血清免疫相关指标包括：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）及干扰素-γ（IFN-γ）。血清生化指标包括：总蛋白（TP）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行初步整理，SAS 9.2软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同水平厚朴提取物对湖羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，C组湖羊末重显著升高（P0.05），各试验组湖羊的平均日增重显著升高（P0.05），C组湖羊的平均日采食量显著升高（P0.05），各试验组湖羊的料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T002表2不同水平厚朴提取物对湖羊生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[kg/(只·d)]料重比A组（对照组）30.11±0.4540.89±0.68b192.47±5.46c1.58±0.05b8.21±0.25aB组29.96±0.6241.85±0.72ab212.36±5.87b1.62±0.04ab7.63±0.31bC组30.12±0.3742.98±0.81a229.67±8.32a1.71±0.06a7.45±0.27bD组29.87±0.5141.99±0.79ab216.35±6.93ab1.64±0.05ab7.58±0.31b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同水平厚朴提取物对湖羊瘤胃发酵的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，C组、D组湖羊瘤胃中氨态氮的含量显著降低（P0.05），各试验组湖羊瘤胃中丁酸含量显著升高（P0.05）。各组湖羊瘤胃中pH值及乙酸、丙酸、总挥发性脂肪酸含量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T003表3不同水平厚朴提取物对湖羊瘤胃发酵的影响组别pH值氨态氮/(mg/L)乙酸/(mmol/L)丙酸/(mmol/L)丁酸/(mmol/L)总挥发性脂肪酸/(mmol/L)A组（对照组）6.62±0.28114.78±7.25a57.69±4.3819.54±1.0711.44±0.86b90.86±5.21B组6.54±0.43108.46±6.21ab58.24±3.9620.37±0.9813.57±0.75a93.65±4.73C组6.31±0.3898.44±5.58b58.91±5.1721.08±1.5315.28±1.10a97.24±6.37D组6.46±0.3093.26±6.17b58.84±5.5520.86±1.2614.87±0.93a95.49±4.262.3不同水平厚朴提取物对湖羊血清生化指标的影响2.3.1不同水平厚朴提取物对湖羊血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验组湖羊血清T-AOC、GSH-Px、SOD活性显著升高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T004表4不同水平厚朴提取物对湖羊血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)A组（对照组）2.03±0.68c531.28±42.87d13.67±1.01b6.43±0.67aB组3.88±0.43b641.09±56.37c15.42±1.22a4.25±0.58bC组4.61±0.67ab751.43±48.55b16.01±1.45a4.20±0.43bD组5.13±0.54a868.46±61.39a16.57±1.39a4.09±0.50b2.3.2不同水平厚朴提取物对湖羊血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，C组、D组湖羊血清IgG含量显著升高（P0.05）；D组湖羊血清中IgA含量显著升高（P0.05），TNF-α含量显著降低（P0.05）；各组湖羊血清IL-2含量显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T005表5不同水平厚朴提取物对湖羊血清免疫指标的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)TNF-α/(ng/L)IL-2/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)A组（对照组）4.38±0.24b1.07±0.10b1.18±0.0963.47±8.72a228.51±29.41c51.49±5.67B组4.67±0.31b1.14±0.12ab1.17±0.1555.21±9.14ab293.45±35.90b52.43±4.18C组5.53±0.41a1.21±0.13ab1.23±0.1249.28±8.30ab325.47±32.67ab54.22±6.91D组5.89±0.38a1.32±0.09a1.15±0.1142.65±7.24b374.53±42.10a57.27±4.322.3.3不同水平厚朴提取物对湖羊血清生化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，D组湖羊血清中TG含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.02.005.T006表6不同水平厚朴提取物对湖羊血清生化指标的影响组别TP/(g/L)BUN/(mg/L)TC/(μmol/L)TG/(μmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)A组（对照组）73.32±9.353.85±0.551.72±0.350.48±0.03a15.39±3.6188.43±13.28B组76.33±6.823.64±0.421.70±0.420.47±0.04ab16.71±3.0395.59±11.07C组72.81±5.963.92±0.511.69±0.280.47±0.03ab14.32±5.1783.38±9.65D组75.89±7.033.76±0.691.66±0.340.41±0.03b15.89±4.7487.43±11.433讨论3.1不同水平厚朴提取物对湖羊生长性能的影响厚朴提取物能够提高畜禽生产性能和防治动物疾病[5,8-10]。屈圣富等[9]在断奶仔猪日粮中分别添加0.02%、0.04%水平的厚朴酚，结果表明，与对照组相比，两组试验组断奶仔猪平均日增重显著提高，料重比显著下降。廖振璋等[11]在临武鸭基础日粮中分别添加100、200、300 mg/kg水平厚朴酚，以基础日粮组为对照组，并以基础日粮中添加300 mg/kg硫酸粘杆菌素为阳性对照组，结果表明，200 mg/kg和300 mg/kg组临武鸭平均日增重显著高于对照组，与抗生素组差异不显著。车大璐等[12]分别在羔羊日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%厚朴为主要成分的混合剂，结果表明，0.5%组羔羊平均日增重显著高于对照组，添加厚朴复方制剂具有提升羔羊平均日采食量的趋势。本研究认为，厚朴提取物可提高湖羊的生长性能，但150 mg/kg组湖羊的生长性能低于100 mg/kg组，表明厚朴提取物添加水平过高时可能会对湖羊生长性能产生负面作用。3.2不同水平厚朴提取物对湖羊瘤胃发酵参数的影响pH值是反应瘤胃微生态环境健康的重要指标，瘤胃正常pH值范围为6~7[13]。本研究中，日粮加入厚朴提取物虽引起瘤胃中pH值下降，但均处于正常范围内，表明厚朴提取物不会破坏瘤胃健康情况，且对瘤胃功能无明显的负面作用。氨态氮是反刍动物日粮氮源代谢的产物，合理的氨态氮含量有利于瘤胃微生物合成菌体蛋白[14]。氨浓度过高表明微生物对液态氨的吸收效率低，易导致动物氨中毒，而过低的氨含量会引起微生物蛋白合成不足[15]。本研究中，厚朴的添加导致瘤胃中液态氨浓度下降，表明日粮中添加厚朴提取物促进了微生物对氨态氮的利用，造成氨态氮含量下降的原因也可能是厚朴提取物促进瘤胃排空速度。挥发性脂肪酸是日粮中可溶性碳水化合物被瘤胃微生物利用的代谢产物，反刍动物所需消化能由挥发性脂肪酸提供，约占总消化能的70%~80%[16]。车大璐等[12]研究表明，羔羊日粮添加厚朴复方制剂可以提高总挥发性脂肪酸、乙酸和丁酸含量。本研究结果表明，厚朴提取物提高瘤胃中丁酸含量，在一定程度上影响了瘤胃发酵参数。3.3不同水平厚朴提取物对湖羊血清抗氧化指标的影响动物在生长过程中由于体内代谢会产生大量超氧阴离子等自由基，过量的自由基会引起动物损伤并危害机体健康。机体内的抗氧化酶（GSH-Px、SOD等）可有效清除自由基，避免氧化损伤[17]。研究表明，厚朴提取物具有较强的抗氧化能力，可以高效清除DPPH自由基和超氧阴离子自由基[3]。屈圣富等[9]认为，在断奶仔猪日粮中添加0.04%厚朴酚可以提高GSH-Px、SOD和过氧化氢酶（CAT）活性。曹蓉[5]研究发现，在肉鸡日粮中添加150 mg/kg厚朴总酚可以提高SOD、CAT活性，效果与抗生素组相当，且SOD活性显著高于其他试验组，CAT活性显著高于对照组。Lima等[18]在羔羊日粮中分别添加320 mg/kg厚朴提取物、100 IU/kg维生素E、0.1 mg/kg有机硒，结果表明，厚朴提取物对羔羊血清抗氧化能力的影响与维生素E、有机硒效果类似。尽管目前厚朴提取物改善反刍动物血清抗氧化能力的报道较为缺乏，但本研究结果认为，湖羊日粮中添加厚朴提取物提高血清抗氧化活性具有较高的可行性。3.4不同水平厚朴提取物对湖羊血清免疫指标的影响IgG是动物血清中的主要免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒、抗感染等功能；IgM是机体初次接触抗原物质最早产生的抗体，主要用于激活补体；血清IgA占机体总IgA含量的85%，具有与IgG和IgM类似的生物学功能；IL-2和INF-γ由Th1型细胞分泌，主要作用为促进T淋巴细胞增殖、介导炎症和细胞免疫反应；TNF-α是参与细胞各种炎症的炎性因子，TNF-α过量反映体内炎症水平较高[19]。程迪等[6]在肉鸡日粮中分别添加50、100、200 mg/kg的厚朴总酚，结果显示，试验组肉鸡免疫器官指数、免疫指标均显著提高。目前，厚朴及其提取物在反刍动物养殖中主要用于疾病治疗[20-21]，对体内免疫指标的影响仍需进一步研究。3.5不同水平厚朴提取物对湖羊血清生化指标的影响血清中TP含量与机体蛋白质合成能力有关，BUN含量受体内氮代谢功能和饲料中氨基酸平衡的影响[22]。TC主要由游离胆固醇和胆固醇酯构成，其含量与低密度脂蛋白含量呈正相关，可以反映机体脂代谢情况。TG是体内脂肪储存的重要形式，也可以反映机体脂质代谢状况[23]。ALT和AST活性与肝脏受损有关[24]，因此可以作为评价厚朴提取物对代谢功能影响的重要指标。张宇煊等[25]在肉鸡基础日粮中添加2 g/kg厚朴超微粉作为试验组，并以饲喂基础日粮作为对照组，饲喂63 d后发现，试验组肉鸡血清TP和TC含量显著下降，其他生化指标差异均不显著。梅华迪等[26]在猪基础日粮中分别添加0、0.02%和0.04%厚朴酚，饲喂35 d后发现，试验组血清BUN和TG含量显著下降，各组其他指标差异不显著。车大璐等[12]研究发现，厚朴复方制剂对羊血清中TP和BUN等生化指标无显著影响，与本研究结果基本一致。本研究结果显示，湖羊日粮中添加厚朴提取物对上述生化指标无显著改变，表明厚朴提取物对湖羊代谢功能无负面作用。4结论本研究结果表明，日粮中添加厚朴提取物可以提高湖羊的生长性能，改善瘤胃功能，提高血清抗氧化能力和免疫能力，对机体代谢功能无负面作用，厚朴提取物的适宜添加量为100 mg/kg。