凝结芽孢杆菌属于硬（或厚）壁菌门芽孢杆菌属，为革兰氏阳性菌，具有兼性厌氧、可形成芽孢、产乳酸等特点[1]。凝结芽孢杆菌可促进动物对营养物质的吸收利用，提升机体免疫力，改善肠道健康等[2-3]，被批准为可食用益生菌。近年来，关于凝结芽孢杆菌在动物生产中应用的研究较多。本试验旨在研究添加凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能、体组成、血清生理生化指标的影响，为凝结芽孢杆菌在对虾养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料凝结芽孢杆菌（肠酸宁）购自三正集团，活菌数为1×1010 CFU/g。1.2试验饲料对照组为基础饲料，各试验组分别在基础饲料中添加0.02%、0.04%、0.08%凝结芽孢杆菌。使用粉碎机将试验饲料粉碎，过60目筛，过滤，混匀，置于搅拌机中搅拌15 min，加入预先处理的其他原料（虾油、豆油等），一起再搅拌15 min，加入40%蒸馏水，搅拌15 min，使用双螺杆挤条机将混合饲料挤压成粒径分别为1.0 mm和1.5 mm的颗粒饲料，控制颗粒饲料的水分含量约为10%，于-20 ℃保存。试验饲料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.009.T001表1试验饲料组成及营养水平（干物质基础）项目对照组0.02%组0.04%组0.08%组原料组成虾粉33.0033.0033.0033.00面粉23.7023.6823.6623.62花生粕7.007.007.007.00豆粕20.1020.1020.1020.10虾油1.451.451.451.45鱼粉8.058.058.058.05卵磷脂1.051.051.051.05豆油1.051.051.051.05磷酸二氢钙1.951.951.951.95胆碱0.550.550.550.55预混料2.002.002.002.00维生素C0.100.100.100.10凝结芽孢杆菌00.020.040.08合计100.00100.00100.00100.00营养水平水分10.379.579.729.81粗灰分10.8811.3510.8811.34粗蛋白质42.1342.1242.1842.24粗脂肪7.637.667.257.58注：1.预混料购自昆明三正生物科技有限公司。2.营养水平均为计算值。%1.3试验设计试验于西南大学动物科学学院所属的养殖基地进行。选取健康状态一致、体重（1.05±0.05）g的南美白对虾480尾，随机分成4组，每组4个重复，每个重复放在一个水族箱中放养，每箱30尾虾，每组使用200 L咸淡水。各组对虾分别投喂添加0、0.02%、0.04%、0.08%凝结芽孢杆菌的饲料。1.4饲养管理试验预试期2 d，各组虾饲喂基础饲料；2 d后进入试验期，正式试验期42 d。每天定时投喂3次（8：00、12：30和18：30），在试验开始至第4周对虾投喂粒径1.0 mm颗粒饲料，试验后2周投喂粒径为1.5 mm颗粒饲料。整个试验过程中保持水箱微流水状态，初始喂食量按对虾初重的4%~6%投放，依据对虾食用量调整饲料添加量。保持整个试验系统干净卫生，及时清除剩余饲料和粪便。试验期间保证水族箱水温为25~29 ℃，盐度为6‰~7‰，硫酸物水平为0~0.05 mg/L，pH值为7.5~7.9，溶解氧水平为6~7 mg/L，氨氮水平为0.20~0.40 mg/L，亚硝酸氮水平为0.05~0.10 mg/L。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能试验最后1 d，试验对虾控料24 h，对每个箱子中的试验虾进行称重和统计数量，用于计算成活率、特定生长率、增重率和饲料系数；随机从每组16个箱各取5尾虾，分别测量体长和体重，计算肥满度。成活率=试验末虾数量/试验初虾数量×100%(1)特定生长率=(ln末重-ln初重)/试验天数×100%(2)增重率=(末重-初重)/初重×100%(3)饲料系数=(饲喂料干重-剩余饲料干重)/(末重-初重)(4)1.5.2肌肉营养成分将虾体解剖，剥离背肌，进行肌肉组织分析，称取0.3~0.5 g样品在冰冷（0 ℃）的氯化钠溶液中漂洗1~2 min，去除液体部分保留组织部分，使用滤纸吸干水分，10 mL离心管盛放，加入9倍体积的冷生理盐水，快速研磨仪匀浆后取出，4 ℃、2 500 r/min离心10 min，吸取上清液分装至1.5 mL的离心管，于-80 ℃保存。将肌肉组织在105 ℃下烘干至恒重，测定水分含量；将恒重后的样品磨粉，使用索氏抽提法测定粗脂肪含量，凯氏定氮法测定粗蛋白质含量，马福炉550 ℃灼烧法测定粗灰分含量。1.5.3肝胰脏与血清免疫指标随机从每组16个箱各取5尾虾，2 mL注射器从（抗凝剂润处理）静脉窦抽血，静置2 h，4℃、4 000 r/min离心10 min，将上清液使用1.5 mL离心管分装。血清总抗氧化能力（T-AOC）及肝胰脏T-AOC和超氧化物歧化酶（SOD）、碱性磷酸酶（ALP）、溶菌酶（LZM）活性均按照南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定。1.6数据统计与分析试验数据采用SPSS 22软件进行单因素方差分析差异性，Duncan's法进行组间多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响（见表2）由表2可知，0.04%试验组对虾末重、增重显著高于对照组（P0.05），且各试验组对虾的饲料系数均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.009.T002表2凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响组别初重/g末重/g增重率/%特定生长率/(%/d)成活率/%饲料系数对照组1.05±0.035.68±0.41b440.95±10.62b4.02±0.1486.45±4.981.27±0.04a0.02%组1.03±0.045.71±0.32b454.37±21.55ab4.08±0.1384.27±6.471.18±0.11b0.04%组1.03±0.046.25±0.12a506.80±37.40a4.29±0.1190.24±4.411.14±0.08b0.08%组1.06±0.086.04±0.32ab469.81±25.45ab4.14±0.1286.44±5.831.15±0.04b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。2.2凝结芽孢杆菌对南美白对虾体组成的影响（见表3）由表3可知，各组对虾全虾的体组成含量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.009.T003表3凝结芽孢杆菌对南美白对虾体组成的影响（湿重基础）组别水分粗蛋白质粗脂肪粗灰分对照组82.57±1.2514.55±0.412.67±0.162.58±0.130.02%组81.24±0.4514.49±0.512.79±0.122.55±0.130.04%组82.22±0.2114.46±0.552.65±0.152.52±0.210.08%组82.55±0.7214.64±0.622.70±0.132.67±0.12%2.3凝结芽孢杆菌对南美白对虾肝胰脏与血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，各试验组对虾的肝胰脏LZM活性均显著高于对照组（P0.05）；试验0.04%组和0.08%组血清ALP活性显著高于对照组和0.02%组（P0.05）o10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.18.009.T004表4凝结芽孢杆菌对南美白对虾肝胰脏与血清免疫指标的影响项目对照组0.02%组0.04%组0.08%组肝胰脏/(U/mg prot)T-AOC2.20±0.112.33±0.082.39±0.072.40±0.07SOD44.66±2.4044.36±2.4345.42±1.6744.73±4.56LZM101.12±8.32b141.26±2.45a142.36±5.23a142.25±5.34a血清/(U/mL)T-AOC4.45±0.264.56±0.134.76±0.534.77±0.23ALP27.23±3.02b28.40±2.29b35.34±4.22a34.24±2.36a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。3讨论3.1凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能的影响研究表明，添加凝结芽孢杆菌有利于提高南美白对虾的成活率，可以促进其生长，并降低饲料系数[4-5]。本试验结果显示，0.04%组对虾的增重率显著高于对照组，各添加组的饲料系数均显著低于对照组。研究表明，凝结芽孢杆菌具有较好的促进生长的作用[6]，可能与凝结芽孢杆菌可利用5碳糖并将其转化为L-乳酸，从而提高饲料中淀粉多糖的转化率有关；凝结芽孢杆菌具有高产蛋白酶、抑制病微生物、平衡肠道菌群等特性[7]，对促进生长具有积极作用[8-10]。3.2凝结芽孢杆菌对南美白对虾体成分的影响本试验结果表明，饲料中添加凝结对南美白对虾体组成无明显影响，可能和凝结芽孢杆菌添加的剂量以及添加的时间有关系，未来将延长添加时间或者全程添加凝结芽孢杆菌进行验证。3.3凝结芽孢杆菌对南美白对虾肝胰脏与血清免疫指标的影响ALP可以催化骨组织释放钙元素，进而满足鱼虾类生长需要的钙元素。血液中的ALP活性可以衡量磷元素是否充足有效，反映机体中钙磷消化和沉积的情况[11-12]。本研究发现，添加凝结芽孢杆菌组对虾血清ALP活性均较高，其中0.04%组最高。结果表明，添加凝结芽孢杆菌对机体的发育具有重要的意义。LZM是一种重要的非特异性免疫因子，具有防御作用，由虾类机体中巨噬细胞和嗜中性粒细胞产生[4]。研究发现，LZM可以参与抑制细菌和调节免疫；能够将细菌细胞壁水解，导致其死亡；还可以合成并分泌一些免疫因子，积极参与机体免疫诱导和调节[13-14]。本试验中，添加0.02%、0.04%与0.08%凝结芽孢杆菌时对虾肝胰脏LZM活性均显著高于对照组，表明饲料中添加凝结芽孢杆菌能够更好地诱导产生免疫因子，积极参与机体的免疫防御，从而提高机体免疫防御力。4结论本试验表明，添加凝结芽孢杆菌可促进南美白对虾生长，提高免疫能力，以0.04%添加量较好。