枯草芽孢杆菌是一种微生物饲料添加剂，具有抗病毒微生物、提高动物生产性能等作用[1-2]。枯草芽孢杆菌能够促进饲料养分的消化和代谢，防治动物疾病，促进动物机体生长[3-4]。柴达木绒山羊具有适应性强、抗寒能力高的优势，是绒乳肉皮兼用的一种地方品种[5]。柴达木绒山羊的体质比较结实[6]，四肢端正且有力，鼻梁微凹[7-8]。在青海省海西州境内，共有约45万只柴达木绒山羊[9]。本研究以柴达木绒山羊为研究对象，探究日粮中添加枯草芽孢杆菌对其生长性能、血清生化指标、抗氧化及免疫力的影响，为枯草芽孢杆菌在柴达木绒山羊生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料枯草芽孢杆菌单剂（5×105 CFU/kg）由天津生津集团有限责任公司提供。ELISA酶标反应试剂盒，由江苏酶标生物科技有限公司生产。1.2试验设计本试验于2020年2月至4月在青海伊清农牧科技有限责任公司进行。选取体重（20.66±2.30）kg、健康的6月龄柴达木绒山羊母羊48只，随机分为2组，每组3个重复，每个重复8只羊。对照山羊饲喂基础日粮，枯草芽孢杆菌组在基础日粮中添加5×105 CFU/g枯草芽孢杆菌，预试期10 d，正式试验期60 d。试验期间柴达木绒山羊组间分圈饲养，自由饮水。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.001.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米39.92代谢能/(MJ/kg)10.97豆粕12.99钙/%0.79小麦麸7.73总磷/%0.40菜籽饼6.93赖氨酸/%0.67石粉1.42蛋氨酸/%0.26预混料1.01中性洗涤纤维/%33.34干玉米秸秆30.00酸性洗涤纤维/%19.79粗蛋白/%15.99注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 2 000 IU、VD 342 IU、VE 272 IU、铜18 mg、锰15 mg、铁50 mg、锌16 mg、碘0.36 mg、硒0.56 mg、钴0.08 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能在试验的第1、60 d，各组柴达木绒山羊空腹体重，统计各组采食量，计算绒山羊平均日增重、平均日采食量及料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2血清指标1.3.2.1样品采集试验第30、60 d试验羊空腹采血3 mL/只，3 000 r/min离心10 min，-80 ℃保存。各血清指标均使用江苏酶标生物科技有限公司试剂盒进行测定。1.3.2.2血清抗氧化指标测定的血清抗氧化指标包括：谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）。1.3.2.3血清生化指标测定的血清生化指标包括：谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、雌二醇（E2）、生长激素（GH）、胰岛素（INS）、尿素（Urea）。1.3.2.4血清免疫指标测定的免疫指标包括：球蛋白（GLB）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、总蛋白（TP）。1.4数据统计与分析数据采用SPSS 26.0中的t检验法分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响（见表2）由表2可知，枯草芽孢杆菌组试验山羊的末重、平均日增重、平均日采食量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.001.T002表2枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响项目对照组枯草芽孢杆菌组初重/kg20.66±2.3020.53±1.05末重/kg26.03±2.71b32.47±2.18a平均日增重/[g/(只·d)]101.50±11.35b166.77±10.31a平均日采食量/[g/(只·d)]705.28±49.27b1 179.85±53.23a料重比6.99±0.237.07±0.54注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清抗氧化指标的影响（见表3）由表3可知，第30 d，与对照组相比，枯草芽孢杆菌组山羊血清SOD活性显著升高（P0.05）。第60 d，枯草芽孢杆菌组山羊血清CAT活性显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.001.T003表3枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清抗氧化指标的影响项目30 d60 d对照组枯草芽孢杆菌组对照组枯草芽孢杆菌组SOD/(U/mL)15.06±0.48b20.67±3.95a18.64±3.6529.46±4.23CAT/(U/mL)213.28±2.74164.09±7.23189.36±11.94b212.04±44.27aLDH/(IU/L)5.65±0.486.30±0.418.27±2.2511.22±2.27GSH-Px/(U/mL)1 386.05±170.772 169.46±308.542 082.00±217.202 504.05±357.99MDA/(μmol/L)6.30±0.426.31±0.346.13±0.426.48±0.362.3枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，第30 d，与对照组相比，枯草芽孢杆菌组山羊血清TC、TG、GH含量显著升高（P0.05）。第60 d，与对照组相比，枯草芽孢杆菌组山羊血清AST活性、ALB、TC、TG、E2含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.001.T004表4枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响项目30 d60 d对照组枯草芽孢杆菌组对照组枯草芽孢杆菌组AST/(U/mL)313.10±17.32336.79±18.25294.22±2.87b388.27±81.34aALT/(U/L)82.64±2.8075.56±1.94166.27±13.8883.27±10.09ALP/(U/L)12.75±1.27a12.47±0.52b17.48±2.5017.51±1.56ALB/(g/L)305.75±14.63333.65±9.19298.33±11.74b395.38±88.75aTC/(mmol/L)14.09±0.18b16.52±2.34a13.21±0.56b20.07±4.21aTG/(μmol/L)1 326.43±10.41b1 437.61±80.20a1336.46±5.40b1709.28±358.95aE2/(ng/L)145.92±10.12219.92±24.01163.75±16.43b219.20±49.44aGH/(μg/L)10.26±0.36b18.42±5.07a21.70±2.9924.53±5.97INS/(μIU/mL)42.73±1.6236.91±2.1558.40±4.7142.034±6.77Urea/(mmol/L)18.07±1.5415.71±1.4630.23±4.0016.26±3.152.4枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，第30 d，与对照组相比，枯草芽孢杆菌组山羊血清IgM、IL-1β、IL-4含量显著升高（P0.05）；枯草芽孢杆菌组山羊血清IL-6含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.001.T005表5枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响项目30 d60 d对照组枯草芽孢杆菌组对照组枯草芽孢杆菌组GLB/(mg/L)266.57±25.94437.19±79.53309.40±33.74494.11±54.61IgA/(mg/L)240.11±14.45315.08±8.91265.72±50.83408.65±52.83IgG/(mg/L)53.46±2.1065.02±2.7759.61±2.3979.59±3.07IgM(mg/L)1 505.12±87.66b2 393.33±353.59a1 726.47±165.702 862.12±339.56IL-1β/(ng/L)49.96±5.43b98.31±15.06a102.74±9.62188.70±21.17IL-2/(ng/L)872.15±31.99920.00±80.13906.43±41.65b1349.67±329.64aIL-4/(ng/L)63.76±0.77b86.13±16.31a93.42±15.76119.76±10.31IL-6/(ng/L)128.29±7.48a127.82±3.80b147.17±7.77b155.98±16.27aTP/(mg/L)402.34±21.50437.07±20.70484.93±29.82a608.16±122.43b第60 d，与对照组相比，枯草芽孢杆菌组山羊血清IL-2、IL-6、TP含量显著升高（P0.05）。3讨论3.1枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊生长性能的影响日粮中添加枯草芽孢杆菌能够提高动物的生长性能[4]。本试验中，枯草芽孢杆菌组柴达木绒山羊的末重、平均日增重及平均日采食量高于对照组，表明枯草芽孢杆菌柴达木绒山羊的生长性能具有促进作用。3.2枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清抗氧化指标的影响SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶可以发生还原反应[10]，维持机体氧化与抗氧化之间的平衡。SOD在抵御机体损伤中起重要作用，对有些细胞的凋亡起很好的抑制作用[11]。本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组山羊血清CAT活性增加幅度明显高于第30 d，表明长期补饲枯草芽孢杆菌可清除机体内有害物质。LDH可以衡量机体的糖代谢程度[12]，本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组山羊血清LDH的增加幅度高于第30 d。MDA与细胞氧化受损程度有关[13]。本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组山羊血清MDA的增加幅度高于第30 d，但不显著，表明长期补饲枯草芽孢杆菌对动物机体细胞氧化损伤小，受损程度低，与王海波等[14]的研究结果相一致。3.3枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清生化指标的影响AST存在于细胞质中[15]，可以反映动物机体肝脏功能[16]。本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组山羊血清AST、ALB的增加幅度高于试验第30 d，表明长期补饲高剂量枯草芽孢杆菌可以维持渗透压平衡和机体内营养。本试验中，第60 d柴达木绒山羊枯草芽孢杆菌组山羊血清ALT的增加幅度低于试验第30 d，表明枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清代谢指标具有影响，能够改进氨基酸在肝脏内的代谢功能。TG反映对脂肪的利用率，含量越低利用率反而越高[17-18]。本试验表明，随着补饲时间增加，TG和TC含量同步增加，可能是添加的枯草芽孢杆菌使采食量增加，提高脂肪摄入量，脂肪增加。周力等[19]研究结果与本试验相似。INS和GH可以促进糖原、脂肪和蛋白质的合成和代谢过程，INS含量可以反映动物机体能量代谢状况[20]。TP含量代表体内蛋白质的代谢情况[21]。本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组绒山羊血清TG、Urea、INS含量变化幅度低于试验第30 d，表明枯草芽孢杆菌有利于蛋白质等营养物质的生长合成代谢，但不宜于长期补饲。因此，补饲枯草芽孢杆菌可维持机体渗透压，促进营养物质的合成与代谢。3.4枯草芽孢杆菌对柴达木绒山羊血清免疫指标的影响IgA、IgM和IgG在动物机体中起免疫调节的作用[22-23]。在本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组绒山羊血清IgA、IgG、IgM含量增加，表明添加枯草芽孢杆菌可使柴达木绒山羊提高增强免疫力。本试验中，绒山羊血清TP含量随补饲时间的增加而增加，表明补饲枯草芽孢杆菌有利于动物生长代谢并促进其发育，与程连平等[24]的研究结果相似。IL-2通过刺激体内T淋巴细胞使其增殖从而增强机体免疫力[10]。本试验中，第60 d枯草芽孢杆菌组山羊血清的IL-2含量提高，表明日粮中添加枯草芽孢杆菌可以提高柴达木绒山羊的免疫力。4结论本试验条件下，日粮中添加5×105 CFU/g枯草芽孢杆菌可以改善柴达木绒山羊的生长性能、免疫力、抗氧化性能及机体代谢能力。