蒲公英，又名婆婆丁，为菊科蒲公英属多年生草本植物[1]。蒲公英营养价值丰富，具有重要的药理价值，能够清热解毒、抗菌消炎，提高机体免疫，现已列入国家药食同源名单[2]。蒲公英多糖是蒲公英的主要功效成分，由D-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖、D-木糖及D-阿拉伯糖组成[3]。李爽等[4]研究表明，蒲公英多糖可显著提高体外抗氧化性和抑菌效果。田华等[5]研究表明，蒲公英多糖可通过抑制MAPK/ERK通路减轻幽门螺杆菌相关性胃炎大鼠胃黏膜的炎性反应，起到保护胃黏膜的作用。郭慧静等[6]以新疆野生蒲公英为原料提取蒲公英多糖，并进行降血糖和抗氧化活性研究，结果表明，蒲公英多糖具有一定的降血糖和抗氧化活性，且呈量效关系。田苗苗等[7]研究蒲公英多糖对T47D、SK-BR-3乳腺癌细胞增殖作用的影响，结果表明，蒲公英多糖对乳腺癌细胞的增殖具有一定的抑制作用。虽然关于蒲公英多糖研究已经取得了一些进展，但蒲公英多糖的许多相关药理机制及各种生理活性的机理还不明确，如蒲公英多糖的降血糖、抗肿瘤、提高免疫力等相关机理，仍需进一步探索。本试验旨在研究蒲公英多糖对肉仔鸡免疫功能、血清生化指标及生长性能的影响，为进一步拓展蒲公英的生物学功能、开发蒲公英多糖相关产品及其在肉仔鸡生产方面的应用与推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物1日龄爱拔益加（AA）肉仔鸡，由锦州鸿强牧业有限公司提供。1.1.2基础日粮基础日粮为大成农技（葫芦岛）有限公司生产的配合饲料（产品标准编号：O/DHNJ），配合饲料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.T001表1配合饲料营养水平营养水平0~21日龄22~42日龄粗蛋白/%≥22.0≥20.0粗纤维/%≤5.0≤6.0粗灰分/%≤7.0≤10.0钙/%0.6~1.20.3~4.2总磷/%≥0.55≥0.55氯化钠/%0.3~0.80.3~0.8水分/%≤14.0≤14.0赖氨酸/%≥1.0≥1.0粗蛋白/%0.42~0.890.42~0.89代谢能/(MJ/kg)11.9612.901.1.3药品和试剂蒲公英多糖购自陕西慈缘生物技术有限公司（纯度≥90%），盐酸左旋咪唑购自四川省飞天动物药业有限公司（批号：200901）。免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）ELISA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2试验设计选取1日龄肉仔仔鸡300只，随机分为5组，每组3个重复，每个重复20只鸡。空白对照组肉鸡饲喂基础日粮，阳性对照组在基础日粮中添加0.2 g/kg盐酸左旋咪唑，蒲公英多糖1 g/kg组、蒲公英多糖2 g/kg组和蒲公英多糖4 g/kg组分别在基础日粮中添加1、2、4 g/kg蒲公英多糖。试验肉仔鸡采取网上饲养，自由饮水和采食。试验期42 d。1.3测定指标及方法1.3.1免疫器官指数试验42 d，每个重复随机选取3只鸡（禁食8 h，饮水自由），称量肉鸡重量，屠宰摘取胸腺、脾和法氏囊，使用电子天平称量每只鸡的胸腺、脾和法氏囊重量，计算免疫器官指数[8]。免疫器官指数=免疫器官重量/宰前活体重(1)1.3.2脾组织切片观察试验42 d，每组随机选取3只鸡，每个重复1只鸡，屠宰摘取脾，使用10%的甲醛溶液固定，石蜡切片，苏木精伊红染色，使用倒置显微镜观察[9]。1.3.3血清中免疫球蛋白和细胞因子试验42 d，每个重复选取1只鸡，翅下静脉采血5 mL，分离血清。参考文献[10]使用ELISA试剂盒进行测定血清中IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量。1.3.4血清生化指标试验42 d，每个重复选取1只鸡，翅下静脉采血5 mL，分离血清，血清中白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总蛋白（TP）、白球比（A/G）、血糖（GLU）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、尿素（UREA）、肌酐（CREA）使用全自动生化分析仪测定[11]。1.3.5生长性能试验期间记录每只鸡初重、末重，统计试验鸡每天体重、增重、每组鸡日采食量，计算平均日增重、平均日采食量和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)平均日采食量=总采食量/试验天数(3)料重比=平均日采食量/平均日增重(4)1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 17.0进行单因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1蒲公英多糖对肉仔鸡免疫功能的影响2.1.1蒲公英多糖对肉仔鸡免疫器官指数的影响（见表2）由表2可知，蒲公英多糖1 g/kg组、蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡的胸腺指数均极显著高于空白对照组（P0.01），蒲公英多糖4 g/kg组肉鸡的胸腺指数均显著高于空白对照组（P0.05），阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡法氏囊指数和脾指数均极显著高于空白对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.T002表2蒲公英多糖对肉鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数法氏囊指数脾指数空白对照组1.77±0.17Ce7.15±0.75Cc7.15±0.75Cc阳性对照组1.90±0.10CDe8.55±0.76ABab8.55±0.76ABab蒲公英多糖1 g/kg组2.23±0.10Bb8.05±0.69Bb8.05±0.69Bb蒲公英多糖2 g/kg组2.39±0.10Aa8.95±0.83Aa8.95±0.83Aa蒲公英多糖4 g/kg组2.04±0.10Cc8.45±0.69ABb8.45±0.69ABb注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表5与此同。g/kg研究表明，蒲公英多糖能够提高肉鸡胸腺指数、法氏囊指数和脾指数，以添加2 g/kg蒲公英多糖效果较好。2.1.2蒲公英多糖对肉仔鸡脾组织结构的影响（见图1~图5）由图1~图5可知，阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡白髓和红髓中的淋巴细胞体积增大，细胞数量增多，脾小结体积增大与边缘区界限清晰。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.F001图1空白对照组肉鸡脾组织结构（400×）注：组织切片长为20 μm。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.F002图2阳性对照组肉鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.F003图3蒲公英多糖1 g/kg组肉鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.F004图4蒲公英多糖2 g/kg组肉鸡脾组织结构（400×）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.F005图5蒲公英多糖4 g/kg组肉鸡脾组织结构（400×）2.1.3蒲公英多糖对肉仔鸡血清中免疫球蛋白和细胞因子的影响（见表3）由表3可知，阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡血清IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4和IFN-γ含量均极显著高于空白对照组（P0.01），蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡血清IL-2、IL-4和IFN-γ含量极显著高于蒲公英多糖1 g/kg组和蒲公英多糖4 g/kg组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.T003表3蒲公英多糖对肉仔鸡血清中免疫球蛋白和细胞因子的影响组别IgG/(g/L)IgM/(g/L)IgA/(g/L)IL-2/(ng/L)IL-4/(ng/L)IFN-γ/(ng/L)空白对照组3.22±0.36Bc2.14±0.16Bb2.76±0.34Bb63.16±0.74Cd29.97±0.63Dd15.16±1.91Dd阳性对照组4.56±0.55Ab2.84±0.11Aa3.61±0.32Aa80.27±1.13Bc35.10±1.05Cc19.55±0.43Cc蒲公英多糖1 g/kg组5.96±0.62Aab3.07±0.23Aa3.76±0.05Aa83.54±1.25Bb38.71±0.73Bb24.25±0.57Aa蒲公英多糖2 g/kg组5.43±0.56Aa3.22±0.35Aa3.88±0.17Aa89.87±2.22Aa41.61±0.97Aa27.41±1.69Aa蒲公英多糖4 g/kg组4.62±0.17Aab3.13±0.26Aa3.70±0.22Aa80.33±1.06Bc35.53±0.85Cc20.80±2.49Bb研究表明，蒲公英多糖能够促进肉仔鸡血清中IgG、IgM和IgA产生以及IL-2、IL-4和IFN-γ分泌，以添加2 g/kg蒲公英多糖效果较好。2.2蒲公英多糖对肉仔鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡血清TP和GLB含量均极显著高于空白对照组（P0.01），ALB含量显著高于空白对照组（P0.05）；蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡血清TP和GLB含量极显著高于蒲公英多糖1 g/kg组和蒲公英多糖4 g/kg组（P0.01）。阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡血清ALP活性及UREA和CREA的含量均极显著低于空白对照组（P0.01）；蒲公英多糖1 g/kg组、蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡血清UREA含量均极显著低于蒲公英多糖4 g/kg组（P0.01），蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡血清CREA含量极显著低于蒲公英多糖1 g/kg组和蒲公英多糖4 g/kg组（P0.01）。蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡血清A/G极显著低于空白对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.T004表4蒲公英多糖对肉仔鸡血清生化指标的影响项目空白对照组阳性对照组蒲公英多糖1 g/kg组蒲公英多糖2 g/kg组蒲公英多糖4 g/kg组TP/(g/L)27.53±0.42Cd33.10±0.70Bc35.63±1.86Bb40.90±0.52Aa35.07±1.86BbcALB/(g/L)13.10±0.60Bc14.37±0.76Bb15.80±0.70ABa16.43±0.75Aa15.63±0.42ABaGLB/(g/L)14.43±0.95Cc18.73±1.35Bb19.83±1.168Bb24.47±0.93Aa19.43±1.76BbA/G0.91±0.10Aa0.80±0.10ABab0.80±0.01ABab0.67±0.05Bb0.81±0.07ABabGLU/(μmol/L)12.16±0.3112.57±0.3412.45±0.3712.67±0.2912.57±0.39ALP/(U/L)1 223.00±42.04Aa1 026.00±40.04Bb954.00±47.27Bb954.00±49.51Bb1 000.00±21.13BbALT/(U/L)1 171.00±48.811 153.00±21.281 155.00±25.711 143.00±27.221 172.00±8.84UREA/(μmol/L)1.63±0.04Aa1.37±0.04Bb1.19±0.09Cc1.12±0.03Cc1.33±0.03BbCREA/(μmol/L)10.90±0.46Aa9.17±0.23Bb8.27±0.15Cc7.83±0.25Dd8.93±0.25BCb尿酐比0.150±0.0070.133±0.0580.144±0.0120.143±0.0010.149±0.008注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。研究表明，蒲公英多糖能提高肉仔鸡血清中TP、ALB和GLB含量，降低血清A/G、ALP、UREA和CREA含量，以添加2 g/kg蒲公英多糖效果较好。2.3蒲公英多糖对肉仔鸡生长性能的影响（见表5）由表5可知，阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡的末重、平均日增重均极显著高于空白对照组（P0.01）；蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡的末重、平均日增重显著高于蒲公英多糖4 g/kg组和阳性对照组（P0.05）。蒲公英多糖2 g/kg组肉仔鸡的平均日采食量极显著高于空白对照组（P0.01），蒲公英多糖1 g/kg组肉仔鸡的平均日采食量显著高于空白对照组（P0.01）。阳性对照组、蒲公英多糖组肉仔鸡的料重比均极显著低于空白对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.007.T005表5蒲公英多糖对肉仔鸡生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日增重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料重比空白对照组42.03±4.092 214.67±90.50Bc51.73±2.34Bc90.90±1.85Bb1.84±0.12Aa阳性对照组39.54±3.582 534.33±105.10Ab59.38±2.48Ab92.76±0.59ABab1.57±0.07Bb蒲公英多糖1 g/kg组42.45±3.192 683.33±115.36Aab62.93±2.72Aab93.45±0.57ABa1.47±0.07Bb蒲公英多糖2 g/kg组40.57±1.032 818.33±162.81Aa66.09±3.80Aa94.78±2.01Aa1.38±0.06Bb蒲公英多糖4 g/kg组40.48±2.482 556.67±40.41Ab59.93±0.87Ab93.02±0.38ABab1.56±0.03Bb3讨论3.1蒲公英多糖对肉仔鸡免疫功能的影响免疫器官包括中枢免疫器官和周围免疫器官，中枢免疫器官是产生淋巴细胞的部位，周围免疫器官是淋巴细胞定居的部位。淋巴细胞是免疫活性细胞，只有接受抗原刺激后才能够分化增殖，产生特异性免疫应答，分为B细胞和T细胞。鸡的中枢免疫器官包括骨髓、胸腺和法氏囊，骨髓中产生的多功能干细胞在胸腺中分化成T细胞，在法氏囊中分化成B细胞。B细胞在抗原的刺激下大量繁殖，分化成浆细胞。浆细胞产生和分泌多种特异性抗体（免疫球蛋白），进入血液，通过血液或体液，抗体与抗原发生作用，参与体液免疫应答（由B淋巴细胞介导的免疫应答）。T细胞在抗原信息刺激后，转化增殖为致敏淋巴细胞，分泌细胞因子，杀灭各种致病菌，杀伤或抑制肿瘤细胞和同种异体移植的细胞等，参与机体的细胞免疫应答（由T淋巴细胞介导的免疫应答）。周围免疫器官包括脾、哈德氏腺、扁桃体、盲肠扁桃体、黏膜相关淋巴组织，脾是最大的周围免疫器官[12-13]。免疫器官指数在一定程度上可反映器官功能的强弱。免疫器官的重量受淋巴细胞的增殖和凋亡的影响[14]。陈福星等[15]利用蒲公英多糖给小鼠灌胃，连续用药10 d，结果发现，蒲公英多糖能够显著提高小鼠胸腺和脾指数，胸腺的白髓面积增大，胸腺小体数目增多，脾白髓、红髓分界明显，白髓面积增大，脾小体增多。高慧婕等[16]利用蒲公英多糖给小鼠灌胃，连续用药8 d，发现蒲公英多糖能够显著提高小鼠胸腺和脾指数、外周血淋巴细胞转化率及血清中TNF-α含量。王珅等[17]在1日龄肉鸡饮水中添加2、5、10 g/L蒲公英多糖，用药21 d，发现蒲公英多糖能够极显著提高肉鸡胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数，促进外周血中T细胞的增殖。陈文英等[18]给1日龄伊莎褐蛋鸡的健康雏鸡和环磷酰胺免疫抑制雏鸡灌服蒲公英多糖，连用5 d，发现蒲公英多糖可通过提高健康雏鸡外周血CD4+Ｔ淋巴细胞，从而增强雏鸡的非特异性细胞免疫和体液免疫功能；提高环磷酰胺免疫抑制雏鸡外周血CD4+和CD8+数量，降低CD4+和CD8+比值，能够通过增加CD4+Ｔ淋巴细胞数量，恢复机体免疫抑制状态。本研究发现，不同水平蒲公英多糖能够提高肉鸡胸腺指数、法氏囊指数、脾指数以及血清中IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4、IFN-γ含量，脾组织结构中的淋巴细胞体积增大，数量增多。研究表明，蒲公英多糖能够激活淋巴细胞，激活的淋巴细胞分裂增殖，提高免疫器官重量，从而提高免疫器官指数，激活的淋巴细胞分泌免疫球蛋白和细胞因子，从而提高机体的免疫功能。3.2蒲公英多糖对肉仔鸡血清生化指标的影响血清中的蛋白包括ALB和GLB。ALB形成血浆中的缓冲对调节血液的酸碱度，形成血浆胶体渗透压调节血管内外水的平衡，具有运输功能；GLB参与机体的免疫功能。血清葡萄糖又称为GLU，GLU的产生和利用处于动态平衡的状态。因此，只有GLU维持在稳定的水平，才能维持体内各个器官和组织的需要。ALB、GLB和UREA可以反映动物对蛋白质的消化吸收以及对氮的利用情况，葡萄糖可以直接反映机体能量代谢状况[19]。CREA是肌肉在体内代谢的产物，血液中的CREA主要是由肾脏过滤，由尿液排出体外，CREA的水平代表肾脏功能。ALP是肝脏和骨骼生成的主要作用是促进磷酸酯水解，能够反映机体内肝脏、骨骼的生长发育和钙磷沉积情况[20]。ALT是一种转氨酶，在体内起合成和分解代谢的作用[21]，在机体的肝、肾、心和骨骼肌中广泛分布，对肝功能状态最为敏感，可以作为肝损伤或机体中毒的重要指标。本研究发现，蒲公英多糖能够提高肉鸡血清中TP、ALB和GLB含量；蒲公英多糖2 g/kg组能够极显著降低肉鸡血清A/G。ALB含量增多表明蒲公英多糖能够促进机体对蛋白质的消化吸收和对氮的利用，GLB含量增多和白球比降低表明蒲公英多糖能够提高机体的体液免疫功能。侯丽然等[22]使用小鼠腹腔注射四氧嘧啶建立糖尿病模型，给小鼠灌胃蒲公英多糖，连用15 d，发现蒲公英多糖对四氧嘧啶糖尿病小鼠具有极显著的降糖作用。宋晓勇等[23]使用小鼠尾静脉注射四氧嘧啶建立糖尿病模型，给小鼠灌胃蒲公英多糖，连用14 d，发现蒲公英多糖对正常对照组和蒲公英多糖非糖尿病模型组小鼠血糖值无显著差异，表明蒲公英多糖对正常小鼠血糖值无影响；蒲公英多糖能够降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖值，具有剂量依赖性。本研究发现，蒲公英多糖对肉鸡GLU含量无显著影响。因此关于蒲公英多糖对动物GLU的影响有待于进一步研究。陈献宇等[24]利用庆大霉素构建急性肾损伤大鼠模型，蒲公英多糖灌胃，连喂7 d，发现蒲公英多糖组肾组织中超氧化物歧化酶-1（SOD-1）和白细胞介素-10（IL-10）mRNA均显著提高，肾组织间质中炎性细胞浸润明显减轻，表明蒲公英多糖对肾损伤具有保护作用。Park等[25]研究蒲公英多糖对四氯化碳造成肝损伤的大鼠的影响中发现，蒲公英多糖可显著降低肝损伤的大鼠谷草转氨酶和ALT活性，同时具有清除自由基的作用，通过调节炎症反应，减轻氧化应激对肝脏的作用，从而达到保护肝脏的效果。本研究发现，蒲公英多糖能够极显著降低肉鸡血清中CREA和ALP含量，表明蒲公英多糖通过降低血清中ALP含量，对肝起到保护作用；通过降低血清中UREA含量，对肾起保护作用。3.3蒲公英多糖对肉仔鸡生长性能的影响动物的生长性能对养殖经济效益具有重要作用[26]。王珅等[17]在1日龄肉鸡饮水中添加2、5、10 g/L蒲公英多糖，用药21 d，发现蒲公英多糖对肉鸡平均日增重无影响，饮水中添加5、10 g/L蒲公英多糖能够显著降低料重比。本研究发现，在基础日粮中添加1、2、4 g/kg蒲公英多糖均能够极显著提高肉鸡末重、平均日增重和平均日采食量，降低料重比，与上述研究结果有所不同，可能与试验期不同有关。本研究结果可能与下列因素有关：蒲公英多糖是糖类物质，能够增强动物的适口性，可以提高平均日采食量，从而促进动物的生长发育；蒲公英多糖作为能量物质能够促进动物生长发育；蒲公英多糖能够提高肉仔鸡的免疫功能，保证机体健康从而促进生长发育；蒲公英多糖能够改善血液中生化指标，能够促进机体对蛋白质的消化吸收和对氮的利用，促进磷酸酯水解，骨骼的生长发育和钙磷沉积。4结论本研究结果表明，蒲公英多糖能够提高肉仔鸡免疫功能，改善血清生化指标，提高肉仔鸡生长性能，以添加2 g/kg蒲公英多糖效果较好。