近年来，随着人们对畜禽产品需求的提高，畜牧业快速发展，但优质蛋白饲料紧缺限制了畜牧业的发展[1-2]。中国科学院培育出的杂交构树新品种是一种多年生的优质蛋白饲料，具有生长速度快、产量高、适应性强、蛋白含量高等特点[3]。杂交构树富含粗蛋白、脂肪酸、氨基酸等营养成分。本课题组前期研究发现，构树全株中水溶性较低的碳水化合物不易被消化吸收，代谢率低[4-5]。陶兴无等[6]研究表明，发酵构树叶产生大量芳香族化合物，酸香浓郁，柔软湿润，对生猪增重具有良好的效果。熊罗英等[7-8]使用枯草芽孢杆菌GZ3和HS3对构树叶进行发酵，发现发酵后构树叶的粗蛋白水平升高，粗纤维水平显著降低，且饲喂后肉仔鸡皮质厚度、肌间脂肪宽度显著降低。向凌云等[9]研究表明，饲料中添加杂交构树可改善肉兔的生长性能，显著降低肉兔的发病率和死亡率。王永峰等[10]研究发现，在蛋鸡中添加全株青贮构树替代基础日粮，可改善产蛋性能、提高蛋清重量。本试验以海兰褐蛋鸡为研究对象，探讨发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡生产性能、蛋品质和小肠组织形态的影响，为杂交构树在蛋鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验用全株杂交构树原料由河南省高新技术实业有限公司提供。选用80~110 cm株高的杂交构树进行采收，粉碎，晾干。将粉碎的杂交构树（75%）、益生菌（5%）、麸皮（10%）、糖蜜（5%）、玉米（5%）混合均匀，装袋密封发酵，全株构树发酵前后营养水平分见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.T001表1全株构树发酵前后营养水平（干物质基础）营养水平全株构树发酵前全株构树发酵后干物质26.7927.45粗蛋白15.6318.56粗脂肪2.633.10粗纤维18.8116.37粗灰分10.1310.47钙2.472.17总磷0.260.32%1.2试验设计与饲养管理试验选取24周龄、产蛋率接近的健康海兰褐蛋鸡270只，采取单因素随机设计，将蛋鸡分成6组，每组3个重复，每个重复15只蛋鸡。对照组蛋鸡饲喂基础日粮，试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组分别添加1.5%、2.5%、3.5%、4.5%、8.0%发酵杂交构树替代基础日粮。试验期8周。基础日粮参照NRC（2004）和《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）进行配制，基础日粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.T002表2基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米63.00代谢能/(MJ/kg)11.75豆粕23.50粗蛋白/%16.65麦麸1.50赖氨酸/%0.85石粉7.85蛋氨酸+半胱氨酸/%0.55豆油1.00钙/%3.67预混料3.15总磷/%0.47注：1.预混料为每千克日粮提供：Cu 16.0 mg、Mn 40.0 mg、Zn 60.0 mg、I 0.80 mg、Se 0.30 mg、Co 0.30 mg、Cu 6 mg、Fe 60 mg、VA 10 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 50 mg、VK3 15 mg、VB1 4 mg、VB2 12 mg、VB12 0.2 mg、泛酸15 mg、烟酸35 mg、叶酸1 mg、氯化胆碱300 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。试验于2021年1月5日至3月1日在巩义市养殖基地进行，试验蛋鸡采用3层阶梯式笼养，每笼3只鸡。舍内采用自然通风与机械通风相结合，自然光照与人工补光相结合，每天恒定光照16 h。试验期间每天8：00、15：30各喂料1次，期间蛋鸡自由采食、饮水；每天15：00收集鸡蛋。按照饲养管理要求进行蛋鸡的免疫接种、笼舍消毒。试验期间每天记录舍内温度和湿度，观察海兰褐蛋鸡的健康及采食情况。1.3样品采集试验期第56 d采集鸡蛋样品，每个重复随机取6枚鸡蛋用于测定蛋品质。试验结束时每个重复取体重接近的2只蛋鸡进行屠宰，屠宰前禁食12 h，致死后迅速剖开其腹腔，取出肠道，将十二指肠、空肠、回肠分段结扎，分别挤出各肠段内容物，置于液氮中冻存，取十二指肠、空肠、回肠中段组织约3 cm，于4%多聚甲醛中固定。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间，以重复为单位每天记录蛋鸡的产蛋数、破蛋数、产蛋重量、采食量，每周统计一次产蛋率、破蛋率、平均日采食量、料蛋比。产蛋率=每天蛋数/母鸡数×100%(1)破蛋率=破蛋数/总蛋数×100%(2)平均日采食量=(初始料重-剩余料重)/试验天数(3)料蛋比=平均日采食量/平均蛋重(4)1.4.2蛋品质采用游标卡尺逐个测定鸡蛋的长径和短径；蛋品质分析仪测定哈夫单位；强度测定仪测定蛋壳强度；电子天平逐个称量蛋重，取平均值；称重后分离蛋黄和蛋清，称量蛋黄重量；蛋壳分离后使用电子天平称蛋壳重量；螺旋测微器测定蛋壳厚度，去除蛋白膜后测定蛋壳锐端、中部、钝端的厚度，取平均值；使用罗氏比色扇对比蛋黄颜色，记录肉眼观察数据。蛋形指数=长径/短径(5)蛋黄相对重=蛋黄重/蛋重×100%(6)蛋壳相对重=蛋壳重/蛋重×100%(7)1.4.3小肠组织形态4%多聚甲醛固定小肠组织，常规进行石蜡包埋，切片，厚4 μm，苏木精-伊红（HE）染色，中性树胶封片，显微镜下观察切片，选取典型视野测定肠绒毛高度和黏膜隐窝深度，计算绒隐比。绒隐比(VH/CD)=绒毛高度/隐窝深度(8)1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 22.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan's法组间多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡生产蛋性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡的产蛋率随着添加比例增加有升高趋势；Ⅳ组、Ⅴ组蛋鸡的产蛋率显著降低（P0.05），料蛋比显著升高（P0.05）；Ⅱ组蛋鸡的平均日采食量显著降低（P0.05）；Ⅴ组蛋鸡的破蛋率显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.T003表3发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率/%平均日采食量/[g/(只·d)]平均蛋重/(g/枚)料蛋比破蛋率/%对照组91.43±3.47a122.53±4.19a59.97±2.402.29±0.14b1.03±0.50aⅠ组87.74±2.46a121.09±3.64a60.78±2.332.33±0.09b1.14±0.61aⅡ组88.65±2.41a120.11±4.09b60.71±2.922.28±0.08b1.21±0.68aⅢ组91.82±1.76a122.14±3.89a59.62±2.982.28±0.09b0.77±0.51aⅣ组85.52±1.97b121.40±4.87a59.49±3.312.47±0.08a0.76±0.50aⅤ组84.97±2.45b121.92±4.04a60.59±5.582.46±0.12a3.01±1.24b注：同列肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.2发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡蛋品质的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，Ⅲ组、Ⅳ组鸡蛋的蛋黄颜色显著升高（P0.05），Ⅳ组的蛋壳厚度显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.T004表4发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡蛋品质的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组蛋形指数1.280±0.031.260±0.031.240±0.021.240±0.031.290±0.061.230±0.04蛋黄颜色9.40±0.18b9.55±0.34b9.67±0.21b9.83±0.33a9.80±0.28a9.70±0.40b哈夫单位84.56±3.0285.63±2.5987.19±4.1386.96±2.6886.26±3.0885.17±3.59蛋壳强度/(kg/cm2)4.36±0.294.45±0.234.41±0.284.49±0.304.53±0.234.50±0.19蛋黄重量/g16.21±1.2516.03±1.5816.01±1.6414.86±1.2015.68±0.8715.79±1.56蛋黄相对重/%27.01±1.3226.37±2.4526.34±1.9824.95±2.0726.38±1.2526.06±0.84蛋壳重量/g5.93±0.476.02±0.536.18±0.506.15±0.556.30±0.436.05±0.40蛋壳相对重/%9.88±0.569.89±0.6910.18±0.5310.31±0.8210.48±0.3110.00±0.47蛋壳厚度/mm0.42±0.03b0.43±0.02b0.42±0.03b0.42±0.04b0.46±0.01a0.44±0.01b注：同行肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡小肠组织形态的影响（见表5、图1）由表5可知，与对照组相比，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡十二指肠绒毛高度、绒隐比显著升高（P0.05），Ⅴ组蛋鸡绒毛高度显著降低（P0.05）；与Ⅱ组相比，Ⅳ组、Ⅴ组蛋鸡绒隐比显著降低（P0.05），各试验组隐窝深度显著降低（P0.05）。随着发酵杂交构树添加比例的增加十二指肠绒毛高度、绒隐比呈先升高后降低的趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.T005表5发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡小肠组织形态的影响肠段项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组Ⅴ组十二指肠绒毛高度/μm1 272.51±33.71b1 395.57±31.65a1 341.82±45.29a1 305.55±67.40a1 255.77±55.81bc1 140.78±26.41d隐窝深度/μm255.30±23.87a233.38±9.89b218.44±14.54b227.79±8.25b233.03±14.46b233.14±7.52b绒隐比5.01±0.37c5.99±0.22ab6.16±0.30a5.73±0.27ab5.39±0.51bc5.10±0.41bc空肠绒毛高度/μm1 138.43±95.42a1 052.94±71.291 198.12±115.63a1 055.66±92.031 034.20±170.99b911.59±51.89b隐窝深/μm178.82±16.13181.31±14.69191.65±16.99182.42±10.56201.90±22.96181.48±14.43绒隐比6.38±0.51a5.83±0.536.28±0.70a5.80±0.625.11±0.42b5.04±0.40b回肠绒毛高度/μm943.41±25.25a966.46±84.96a997.39±95.04a1083.43±61.62b912.69±84.96ac847.30±46.92c隐窝深/μm164.90±21.07165.62±24.55159.34±21.12158.38±24.56148.62±12.82157.22±9.45绒隐比5.80±0.835.95±1.116.30±0.606.94±0.89a6.17±0.675.40±0.42b与对照组和Ⅱ组相比，Ⅳ组、Ⅴ组蛋鸡空肠绒毛高度、绒隐比显著降低（P0.05）。与对照组相比，Ⅲ组蛋鸡回肠绒毛高度显著升高（P0.05），Ⅴ组蛋鸡回肠绒毛高度显著降低（P0.05）；Ⅲ组蛋鸡绒隐比显著高于Ⅴ组（P0.05）。随着发酵杂交构树添加比例增加，回肠绒毛高度、绒隐比呈先升高后降低的趋势。由图1可知，小肠组织切片结果显示，各组十二指肠、空肠均未见明显异常，Ⅴ组回肠出现肠腺萎缩。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.03.009.F001图1小肠组织形态切片3讨论3.1发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡生产性能的影响构树饲料中的蛋白质结构复杂，含有单宁等抗营养因子，严重影响畜禽的消化吸收[11]。构树经乳酸菌等有益菌发酵后，大分子营养物质被分解为易消化吸收的小分子，木质素、纤维素得到一定软化，促进畜禽对营养物质的消化吸收[12-13]。构树发酵后具有果香味，湿润多汁，可提高饲料的适口性[14]。王汝霞等[15]研究表明，基础日粮中添加7%发酵构树粉对宁都三黄鸡生长性能无负面影响。张兴等[16]研究表明，构树发酵饲料替代部分全价料，可以改善湘沙猪肌肉品质，提高养殖效益。邓铭等[17]研究表明，不同比例发酵构树饲料可显著降低仔猪腹泻率。陶振阳等[18]在产蛋后期海兰褐蛋鸡中添加发酵构树饲料替代基础日粮中的玉米和豆粕，蛋鸡的死淘率显著降低。本试验中，添加1.5%、2.5%、3.5%发酵构树饲料对蛋鸡的产蛋率、平均蛋重、料蛋比、破蛋率无负面影响。原因可能是全株构树经过微生物发酵后，大分子营养物质被分解为小分子，木质素、单宁等抗营养因子被钝化，使发酵后的饲料营养丰富，且有酸香味，提高了杂交构树的消化利用率。李海新[19]研究发现，在生长猪饲料中添加10%~15%发酵构树叶可显著提高生猪平均日增重，但添加比例增加到20%时，生猪平均日增重显著降低。本试验中，发酵构树饲料增加4.5%、8.0%时，产蛋率、料蛋比显著下降；发酵构树饲料增加8.0%时破蛋率显著增加，与上述研究结果一致，提示蛋鸡日粮中添加发酵构树饲料应适量，不宜超过4.5%，原因可能是构树饲料中粗纤维含量较高，添加过多杂交构树饲料影响蛋鸡对营养物质的吸收。3.2发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡蛋品质的影响蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳重量、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈夫单位是评价鸡蛋品质的重要指标[20]。蛋黄颜色受蛋黄中沉积类胡萝卜素、叶黄素水平的影响，蛋鸡自身无法合成类胡萝卜素、叶黄素，只能从饲料中获得，发酵饲料中乳酸菌等以活菌形式存在，可促进蛋鸡对类胡萝卜素等的吸收，加速色素沉淀，使蛋黄颜色加深[21-22]。王永峰等[10]报道，在海兰褐蛋鸡基础日粮中添加5%全株青贮构树可显著改善蛋黄颜色。李艳芝[23]研究表明，在海兰褐蛋鸡基础日粮中添加1%~2%全株青贮构树可显著改善蛋黄颜色、蛋壳相对重、蛋壳厚度。研究表明，随着发酵构树饲料添加水平的增加，蛋黄颜色显著提高[18]。本试验中，Ⅲ组、Ⅳ组蛋黄颜色与对照组存在明显差异，可能是发酵构树饲料促进蛋鸡对类胡萝卜素、叶黄素的吸收，使蛋黄颜色加深。蛋壳厚度、蛋壳强度受饲料营养物质、养殖环境、蛋鸡健康状况等多重条件的影响[24]。本试验中，Ⅳ组蛋壳厚度显著提高，与李艳芝[23]研究结果一致，表明蛋鸡饲料中应用发酵构树饲料可改善蛋品质。3.3发酵杂交构树对海兰褐蛋鸡小肠组织形态的影响小肠绒毛高度、隐窝深度、绒隐比与肠道功能相关，是衡量小肠吸收功能的重要指标[25]。小肠绒毛高度与肠道接触食糜的面积成正相关，绒毛高度增加，肠黏膜与食糜有效接触面积增加，小肠对营养物质的消化、吸收越充分[26]。隐窝深度能够反映小肠上皮细胞的增殖率，隐窝深度下降表明细胞成熟率上升，营养物质吸收率升高[27]。绒隐比综合反映小肠功能，绒隐比越高，小肠消化吸收能力越强，绒隐比降低则表明肠黏膜受损，影响对营养物质的消化吸收[28]。何幼宽等[29]研究表明，饲料中添加青贮构树可降低十二指肠和空肠的隐窝深度，提高空肠、回肠的绒隐比，促进营养物质的消化吸收及肠道健康。从光雷等[30]报道，构树中含有黄酮类的植物多酚，能够改善肉鸡小肠组织形态。陈建军等[31]报道，添加发酵艾草-构树叶复合物组鲤鱼较感染组肠道绒毛发育较好，排列整齐，对营养物质的接触吸收面积更大。本试验中，添加杂交构树饲料后，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡十二指肠绒毛高度、绒隐比显著升高，各试验组十二指肠隐窝深度显著降低；小肠组织切片显示，Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组蛋鸡十二指肠、空肠、回肠均未见明显异常，提示添加适量比例的杂交构树饲料对肠道无不良影响。Ⅴ组蛋鸡回肠出现肠腺萎缩可能是杂交构树饲料添加比例过高引起，具体作用机制还有待后续研究。4结论本研究结果表明，蛋鸡基础日粮中添加发酵杂交构树比例为1.5%、2.5%、3.5%时，对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、小肠组织形态无不良影响，可提高蛋品质，改善小肠形态结构，提高蛋鸡对营养物质的消化吸收，添加比例为3.5%时改善效果较好。