豆粕因具有蛋白质含量高、氨基酸比例平衡的优点，成为畜牧业中主要蛋白质饲料。随着规模化养殖场快速发展，蛋白质饲料需求量逐年上升，寻找利用现有蛋白质饲料资源具有重要意义[1]。饼粕类饲料包括棉粕、菜籽粕、花生粕、胡麻粕、干酒糟及其可溶物（DDGS）、玉米胚芽饼等，蛋白含量高，氨基酸含量丰富，且价格低廉[2-4]。据统计，我国每年生产的饼粕类饲料近3 000万t，但利用率较低[5]。合理开发利用饼粕类饲料对我国畜牧业可持续发展具有重要意义。目前，在猪[6]、禽[7-8]和鱼[9]中的研究发现，合理利用棉粕和菜粕可取得良好的饲喂效果。研究表明，肉羊育肥阶段使用棉籽粕、菜籽饼、葵仁饼等杂粕代替豆粕作为主要蛋白质源不影响其生长性能和屠宰性能，且使用葵仁饼、菜籽饼以及混合饼粕代替豆粕可获得更高的经济效益[10]。易军等[11]研究发现，在日粮中添加30%菜粕代替豆粕饲喂育肥牛，日增重最高和料重比最低。但目前使用杂粕作为蛋白质源替代豆粕在绵羊中的研究有限，杂粕对绵羊瘤胃发酵参数对氨基酸产量的影响尚不明确。因此，本试验开展不同蛋白原料对绵羊瘤胃体外发酵参数和氨基酸产量的影响，为生产中合理选用蛋白质饲料提供参考。1材料与方法1.1试验材料豆粕、棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS和玉米胚芽饼由河北省石家庄新奥牧业有限公司提供。1.2试验设计采用单因素试验设计，将6种蛋白质原料作为发酵底物，分别作为6个处理组，每个处理组设6个重复，发酵时间为2、4、6、8、10、12、24、36、48 h。每个纤维滤袋装1.5 g料，1个发酵袋中放入2个纤维滤袋。发酵底物营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T001表1发酵底物营养水平（干物质基础）组别干物质/%总能/(MJ/kg)粗蛋白/%中性洗涤纤维/%酸性洗涤纤维/%豆粕90.1118.6041.3212.116.40棉仁粕91.6118.7846.7030.6911.42花生粕92.8419.7646.5416.6511.47菜粕93.2720.8636.6329.0619.80DDGS87.8622.1627.2833.7114.58玉米胚芽饼92.0219.2320.0128.977.931.3体外瘤胃发酵试验采用Menke等[12]的体外产气法进行。于河北省保定市唐县振宏屠宰场采集新鲜瘤胃液，经4层纱布过滤后装入保温瓶保存带回实验室开始准备试验。收集的滤液与人工瘤胃液按1∶2混合。准确称量1.5 g试验饲料装入F57纤维滤袋中并封口，在滤袋封口端用绳固定1个玻璃珠以使滤袋下沉，确保其浸于发酵袋（500 mL，中国杭州安思科技有限公司）中，1个发酵袋中放入2个纤维滤袋，使用真空包装机（中国湖州奥德居公司）进行脱氧和密封以创造厌氧条件。使用注射器抽取200 mL混合液注入发酵袋，密封，排气后于39.0 ℃水浴摇床连续培养48 h，摇床频率为45 r/min。在培养2、4、6、8、10、12、24、36、48 h后，使用注射器分别抽取该时间点产气量并记录。待培养48 h后，将发酵袋置于冷水浴中终止发酵。取10 mL瘤胃液装于含有4 mL 25%偏磷酸的15 mL离心管中，-20 ℃保存，用于测定挥发性脂肪酸（VFA）含量；取10 mL至离心管-20 ℃保存，用于测定氨态氮（NH3-N）和菌体蛋白（MCP）含量；另取2 mL至离心管-80 ℃保存，用于测定氨基酸含量。1.4测定指标及方法1.4.1产气量及产气参数将各组2、4、6、8、10、12、24、36、48 h的产气量代入产气模型计算各部分产气量[13]：GP=a＋b(1－e-ct)(1)式中：GP为t时间的产气量（mL）；t为发酵时间（h）；a为快速降解部分产气量（mL）；b为慢速降解部分产气量（mL）；c为b的产气速率（%/h）；a＋b为理论总产气量（mL）。1.4.2常规营养成分干物质（DM）、总能（GE）、CP含量的测定参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[14]中的方法。中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定采用ANKOM 2000i全自动纤维分析仪。将装有发酵残渣的纤维滤袋用蒸馏水冲洗3次，105 ℃烘4 h至恒重，采用Bodas等[15]的方法测定DM、GE、CP、NDF和ADF的消化率养分消化率=(日粮中养分含量－发酵残渣中养分含量)/日粮中养分含量×100%(2)1.4.3pH值、NH3-N、MCP和VFA测定采用EL20型酸度计测定发酵液中pH值；采用比色法测定NH3-N含量，具体参照冯宗慈等[16]方法；采用考马斯亮蓝法测定MCP含量[17]；采用气相色谱分析法测定VFA（乙酸、丙酸、异丁酸、戊酸、异戊酸）含量[18]。1.4.4瘤胃液氨基酸含量瘤胃液中氨基酸含量采用液相色谱仪（Waters Acquity UPLC）、质谱仪（AB SCIEX 5500 Qtrap -MS）进行测定，采用内标分析法。所用色谱柱为XBridge BEH Amide Column（3.5 µm，4.6 mm × 150 mm），柱温40 ℃，流速为0.45 mL/min，流动相组成为A-水（0.1%甲酸）和B-乙腈（0.1%甲酸），运行时间为12 min，进样量为6 µL/次。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2010进行统计和初步整理，SPSS 20.0进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同蛋白原料对体外发酵GP及产气参数的影响（见表2）由表2可知，体外发酵2、4 h时，DDGS组GP显著高于其他组（P0.05）；发酵6、8、10 h时，DDGS和豆粕组GP显著高于棉仁粕、花生粕、菜粕、玉米胚芽饼组（P0.05）；在发酵24 h时，DDGS、菜粕、玉米胚芽饼和花生粕组GP显著低于豆粕组（P0.05）；在发酵12、36、48 h时，棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS、玉米胚芽饼组GP显著低于豆粕组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T002表2不同蛋白原料对体外发酵GP及产气参数的影响项目豆粕组棉仁粕组花生粕组菜粕组DDGS组玉米胚芽饼组GP2 h/mL12.94±.3.49b9.11±1.78bc8.72±2.56bc10.39±2.11bc21.11±2.43a5.56±1.19dGP4 h/mL20.11±4.15b13.5±2.10cd15.17±2.71bc13.50±1.91cd28.17±3.13a11.00±2.48dGP6 h/mL31.78±4.61a22.83±2.54b25.33±2.11b21.78±2.52b35.22±3.29a21.78±2.74bGP8 h/mL41.22±4.45a31.67±2.09b32.17±2.27b29.67±3.40b43.00±3.27a31.17±2.91bGP10 h/mL50.11±4.50a41.11±2.17b39.11±2.67b37.00±4.52b49.94±3.25a39.94±3.37bGP12 h/mL59.33±4.19a47.61±2.71cd46.22±3.13cd43.56±4.61d54.90±3.79b50.22±3.76cGP24 h/mL78.33±3.90a73.72±6.32ab58.33±3.62c68.28±6.91b71.22±4.95b67.83±3.22bGP36 h/mL98.06±3.24a77.94±7.42c71.50±3.91c73.22±7.47c75.44±5.20c88.94±3.57bGP48 h/mL108.78±3.96a79.72±5.32c75.28±7.06c79.44±7.98c76.89±4.62c99.00±4.00ba/mL0.99±3.93b-8.09±2.52e-1.96±3.41bc-4.40±1.50d8.96±2.81a-7.85±2.84deb/mL114.96±5.86a92.54±10.82b79.70±8.14cd85.05±7.64bc71.60±5.22d115.09±3.82ac/(%/h)0.080±0.009a0.070±0.005b0.050±0.005c0.070±0.003b0.050±0.006c0.080±0.006a(a+b)/mL115.95±4.35a84.45±9.67c77.73±4.86c80.66±7.66c80.56±5.71c107.24±5.63b注：1.“-”表示产气滞后。2.同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表6与此同。体外发酵产气参数结果表明，玉米胚芽饼、花生粕、棉仁粕、菜粕的快速降解部分产气量均为负值，表明四者均存在产气滞后效应，其中花生粕产气滞后时间最短，菜粕次之，棉仁粕和玉米胚芽饼较长，豆粕、DDGS无产气滞后现象。DDGS组的a值显著高于豆粕组（P0.05），棉仁粕、菜粕、玉米胚芽饼组的a值显著低于豆粕组（P0.05）；棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS组的b值显著低于豆粕组和玉米胚芽饼组（P0.05），棉仁粕组b值显著高于花生粕和DDGS组（P0.05）；棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS组c值、a+b值显著低于豆粕组和玉米胚芽饼组（P0.05）。2.2不同蛋白原料对体外发酵养分降解率的影响（见表3）由表3可知，棉粕、花生粕、菜粕、DDGS和玉米胚芽饼组的DM、NDF和ADF降解率显著低于豆粕组（P0.05），其中DM降解率排序为豆粕玉米胚芽饼棉仁粕DDGS花生粕菜粕组，NDF、ADF降解率排序为豆粕DDGS玉米胚芽饼组棉仁粕菜粕花生粕。棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS组的GE降解率显著低于豆粕组和玉米胚芽饼组（P0.05）；玉米胚芽饼组的CP降解率显著高于豆粕组（P0.05），棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS组的CP降解率显著低于豆粕组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T003表3不同蛋白原料对体外发酵养分降解率的影响组别DMGECPNDFADF豆粕组64.33±2.67a58.77±2.68a74.41±1.48b54.79±4.06a49.42±1.49a棉仁粕组52.20±0.79c46.06±0.66c71.18±3.23c27.78±1.22d21.57±0.18d花生粕组43.33±1.75e37.82±2.37d58.02±1.05d17.24±1.24f15.11±1.54f菜粕组38.25±1.18f31.73±1.46e59.88±0.35d22.67±1.57e19.00±0.32eDDGS组49.47±2.46d49.62±1.85b60.75±1.93d44.32±1.09b33.08±2.23b玉米胚芽饼组55.65±2.03b56.36±2.20a77.97±1.26a37.24±2.46c25.56±0.31c注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表4、表5与此同。%2.3不同蛋白原料对发酵液pH值及NH3-N、MCP含量的影响（见表4）由表4可知，棉仁粕、花生粕组pH值显著高于豆粕组（P0.05），玉米胚芽饼组pH值显著低于豆粕组（P0.05）；棉仁粕、菜粕组NH3-N含量显著高于豆粕组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T004表4不同蛋白原料对发酵液pH值及NH3-N、MCP含量的影响组别pH值NH3-N/(mg/L)MCP/(mg/L)豆粕组6.43±0.08cd485.5±35.0b214.4±17.7棉仁粕组6.62±0.04a631.4±44.8a222.8±8.4花生粕组6.52±0.04b460.5±44.0b205.8±17.6菜粕组6.50±0.01bc661.9±48.1a209.5±10.4DDGS组6.38±0.08de468.9±35.5b218.8±15.9玉米胚芽饼组6.33±0.05e463.1±34.9b216.3±10.22.4不同蛋白原料对发酵液VFA含量的影响（见表5）由表5可知，棉仁粕组发酵液中乙酸含量显著高于豆粕组（P0.05），玉米胚芽饼组乙酸含量显著低于豆粕组（P0.05）。菜粕组丙酸含量显著低于豆粕组（P0.05）。棉仁粕组丁酸含量显著高于豆粕组（P0.05），菜粕、DDGS组丁酸含量显著低于豆粕组（P0.05）。棉仁粕组异丁酸含量显著高于豆粕组（P0.05），花生粕、菜粕、DDGS组显著低于豆粕组（P0.05）。玉米胚芽饼组戊酸含量显著高于豆粕组（P0.05）。棉仁粕组异戊酸含量显著高于豆粕组（P0.05），花生粕、菜粕、DDGS组显著低于豆粕组（P0.05）。棉仁粕组总挥发性脂肪酸含量显著高于豆粕组（P0.05）。棉仁粕、菜粕组乙丙比显著高于豆粕组（P0.05），DDGS、玉米胚芽饼组乙丙比显著低于豆粕组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T005表5不同蛋白原料对发酵液VFA含量的影响组别乙酸/(mmol/L)丙酸/(mmol/L)丁酸/(mmol/L)异丁酸/(mmol/L)戊酸/(mmol/L)异戊酸/(mmol/L)总挥发性脂肪酸/(mmol/L)乙丙比豆粕组56.58±7.41b33.72±3.91ab12.17±1.42b1.66±0.16b5.48±0.69bc4.69±0.50b114.30±3.93b1.67±0.04b棉仁粕组62.71±6.27a37.82±4.33a14.07±1.36a2.13±0.19a5.92±0.50b5.41±0.45a135.47±6.73a1.90±0.08a花生粕组54.71±2.37bc31.70±4.02b11.09±0.19bc1.35±0.09c4.18±0.07d3.43±0.05d106.00±3.61b1.72±1.72b菜粕组53.51±2.04bc26.56±2.69c9.66±1.00d1.38±0.13c4.29±0.43d3.64±0.31cd101.83±4.50b1.88±0.05aDDGS组54.83±0.10bc37.79±0.17a9.90±0.26cd1.49±0.02c4.99±0.14c4.04±0.11c113.05±0.61b1.44±0.02c玉米胚芽饼组48.96±1.02c33.46±0.48ab11.74±0.27b1.66±0.03b6.48±0.25a4.71±0.11b106.93±1.43b1.44±0.01c2.5不同蛋白原料对发酵液中氨基酸含量的影响（见表6）由表6可知，6种蛋白饲料发酵48 h后，花生粕、菜粕、DDGS组发酵液中总氨基酸含量显著高于豆粕组（P0.05），棉仁粕、玉米胚芽饼组总氨基酸含量显著低于豆粕组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T006表6不同蛋白原料对瘤胃液氨基酸含量的影响项目豆粕组棉仁粕组花生粕组菜粕组DDGS组玉米胚芽饼组必需氨基酸缬氨酸9.21±1.01c7.49±2.03e5.83±2.11f13.72±1.22a9.81±2.31b8.95±2.02d苏氨酸0.08±0.02e0.07±0.02e0.10±0.02d0.17±0.01b0.21±0.03a0.14±0.01c亮氨酸1.43±0.42e1.47±0.21d1.76±0.24b1.62±0.31c2.30±0.41a1.14±0.48f赖氨酸7.55±2.23d8.15±2.36c8.81±3.31b12.54±4.32a5.88±2.34e5.76±3.21f蛋氨酸0.82±0.11e0.90±0.23d1.20±0.33c2.79±1.25a1.35±0.89b0.73±0.37f组氨酸3.42±1.32c3.15±1.26d3.58±2.21b3.92±2.69a3.59±2.48b2.06±2.39e苯丙氨酸0.52±0.21c0.50±0.09d0.65±0.31b0.46±0.27e0.68±0.22a0.37±0.15f异亮氨酸1.54±0.59d1.55±0.47d1.83±0.83b1.73±0.72c2.43±1.56a1.20±0.99e色氨酸0.21±0.08d0.22±0.12d0.24±0.12c0.26±0.06b0.28±0.14a0.14±0.07e续表6　不同蛋白原料对瘤胃液氨基酸含量的影响 单位：mg/Lmg/L10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.T007项目豆粕组棉仁粕组花生粕组菜粕组DDGS组玉米胚芽饼组总氨基酸27.72±6.35d26.43±4.33e30.91±6.52c43.70±7.99a34.77±7.70b20.15±8.64f非必需氨基酸精氨酸0.05±0.01f0.22±0.01e2.51±0.33b2.55±0.12a1.57±0.35c1.41±0.29d酪氨酸0.10±0.03d0.10±0.03d1.03±0.05a0.40±0.04b0.10±0.07d0.27±0.03c丝氨酸1.01±0.01e0.89±0.69f1.27±0.58d1.38±0.98c2.75±0.96a1.44±1.30b丙氨酸0.08±0.01d0.08±0.01d0.10±0.01c0.14±0.04b0.56±0.22a0.09±0.05cd脯氨酸0.15±0.11e0.15±0.10e0.22±0.09d0.28±0.05c0.85±0.31a0.34±0.26b天门冬氨酸1.28±1.10d1.11±0.69e1.45±0.48b1.37±0.67c2.01±1.78a0.83±0.83f胱氨酸0.01±0.01b0.01±0.01b0.02±0.01b0.02±0.01b0.08±0.01a0.02±0.01b甘氨酸0.02±0.01ab0.01±0.01b0.02±0.01ab0.03±0.01a0.03±0.01a0.02±0.01ab谷氨酸0.23±0.22d0.35±0.25a0.27±0.21b0.35±0.19a0.27±0.17b0.25±0.11c2.6产气参数、养分消化率、发酵参数、VFA及总氨基酸含量热图分析结果（见图1）由图1可知，玉米胚芽饼组与豆粕组的各相关指标相似性较高，其次由高到低分别为棉仁粕组、DDGS组、花生粕组、菜粕组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.002.F001图1原料营养物质含量、产气参数、养分消化率、发酵参数、VFA及部分氨基酸含量热图分析结果3讨论3.1不同蛋白原料对体外发酵GP及产气参数的影响研究发现，饲料中NDF、ADF等不易发酵成分含量越高，GP含量越低[19]。本研究中，豆粕组的48 h产气量最高，原因可能是豆粕含有更多的可发酵碳水化合物且NDF、ADF含量较低，利于瘤胃微生物发酵，与樊庆山等[20]研究结果一致。本试验中，玉米胚芽饼组的48 h GP显著高于DDGS、棉仁粕、花生粕和菜粕组，但其可提供的粗蛋白质含量比DDGS、棉仁粕和花生粕组少。因此，DDGS、棉仁粕和花生粕更具有替代豆粕的潜力。本研究结果发现，DDGS组的快速降解部分GP和产气速率值均为最大，原因可能与DDGS中含有较高的有效纤维和较低的木质素含量有关。有效纤维含量较高和木质素含量较低的饲料能够刺激瘤胃液中某些分解纤维的微生物快速增长，有助于促进瘤胃微生物的发酵能力[21-22]。慢速降解部分产气量主要反映纤维素、半纤维素等非可溶性物质的消化程度[23]。本研究中，棉仁粕、菜粕、花生粕和DDGS组的慢速降解部分产气量显著低于玉米胚芽饼和豆粕组，表明玉米胚芽饼较其他杂粕对其非可溶性物质有较强的分解能力，但玉米胚芽饼含有粗蛋白质含量较少，若日粮中单独将其作为蛋白原料供给，会导致蛋白供给不足，应与其他蛋白原料混合配制日粮。此外，棉仁粕、菜粕、花生粕、DDGS组的慢速降解部分产气量比豆粕组分别降低了19.51%、26.02%、30.69%和37.72%，因此棉仁粕和菜粕替代豆粕效果优于花生粕和DDGS。3.2不同蛋白原料对体外发酵养分降解率的影响饲料中DM降解率越高表明瘤胃微生物活性越强[24]。本试验结果显示，玉米胚芽饼、棉仁粕、DDGS、花生粕和菜粕组DM降解率相较于豆粕组偏低，其中以玉米胚芽饼和棉仁粕替代豆粕潜力较为突出。有研究发现，棉籽粕替代日粮中33%的豆粕效果最优，DM降解率可达61.56%[23]。周贤文等[25]研究发现，在生长育肥猪日粮中添加10%的玉米胚芽粕能够改善其生长性能、血清生化指标及营养物质表观消化率。本研究中，DDGS、花生粕和菜粕DM降解率略低于玉米胚芽饼和棉仁粕。DDGS浓缩了玉米中除淀粉和糖以外的蛋白质、脂肪、维生素、纤维及发酵中产生的未知生长因子等营养物质，可替代肉羊日粮中的豆粕和部分玉米。有研究表明，DDGS替代豆饼可提高过瘤胃蛋白及产奶量[22]。在本试验条件下，花生粕和菜粕DM降解率相对较低，原因可能与原料中抗营养因子和饲料品质有关，因此在使用过程中最好经过脱毒处理，降低或消除抗营养因子。CP在瘤胃中的降解率影响动物体内菌体蛋白合成和小肠蛋白质供给的平衡。本研究结果发现，玉米胚芽饼组的CP降解率最高，原因可能是玉米胚蛋白具有较高的生物学效价。玉米胚蛋白主要由球蛋白和白蛋白构成，含量达60%以上，通过酶解测定，其总蛋白和碱溶蛋白均不低于酪蛋白，按其氨基酸构成评定，近似人奶和鸡蛋生物学价值[26]。本试验中，CP降解率排序为豆粕棉仁粕DDGS菜粕花生粕，且棉仁粕CP降解率显著高于DDGS、菜粕和花生粕。富丽霞等[27]研究表明，瘤胃发酵48 h后各饼粕CP降解率排序为棉籽粕花生粕菜籽粕DDGS。鲍坤等[28]进行鹿常用饲料原料（吉林）瘤胃降解规律试验时发现，瘤胃发酵48 h后CP消化率排序为棉籽粕DDGS玉米胚芽菜籽粕。上述研究结论均与本试验结果不一致，造成这种差异的原因可能是原产地不同。以取样自黑龙江和河南的豆粕为例，尽管粗蛋白含量相似（分别为42.5%和43.3%），但生长牛的消化率分别为56.5%和40.9%[29]。由富丽霞等[27]、鲍坤等[28]研究结果可知，CP消化率均以棉仁粕为最高，与本研究结果相近，表明棉仁粕的粗蛋白质在瘤胃中利用率较好，可以考虑其作为豆粕的替代品。NDF、ADF降解率可以反映反刍动物对日粮纤维的利用力及日粮的相对价值[30]。本研究结果发现，6种蛋白原料发酵48 h后，各组的NDF、ADF降解率排序为豆粕DDGS玉米胚芽饼棉仁粕菜粕花生粕。DDGS的NDF、ADF降解率仅次于豆粕，原因可能是与其他蛋白原料相比，DDGS具有较高的纤维含量和较低的木质素含量；且DDGS本身为酵母发酵谷物籽实后的副产品，可促进瘤胃细菌微生物生长，抑制病原菌繁殖，进而提高瘤胃发酵功能[31]。布登付等[31]研究表明，日粮中添加30%酒糟能够显著提升奶牛对NDF、ADF的消化效果。也有研究表明，饲喂一定比例的酒糟还有助于改善瘤胃微生物的生长环境，提高纤维分解菌分泌酶活性[32]，促进瘤胃对纤维的降解。本试验中，玉米胚芽饼、棉仁粕、菜粕和花生粕的NDF、ADF降解率虽比豆粕和DDGS低，但其降解率仍在正常范围内，表明这4种蛋白原料具有替代豆粕的可行性。3.3不同蛋白原料对发酵液pH值、NH3-N、MCP含量的影响瘤胃内稳定的pH值对保证瘤胃内的正常发酵具有重要作用，瘤胃中大多数细菌的最适pH值在6.0以上[33]。本试验中，发酵液的pH值介于6.33~6.62，表明瘤胃液与人工瘤胃液具有较好的缓冲能力，为瘤胃微生物提供了适宜的生长环境。当瘤胃中的碳水化合物和能量比例不适时，瘤胃微生物无法利用NH3合成菌体蛋白，进而导致瘤胃NH3-N含量增加，甚至引起瘤胃氨中毒。瘤胃NH3-N含量最佳范围是23.7~273.0 mg/L[34]。本试验中，各组发酵液中NH3-N含量均高于273.0 mg/L。原因是本试验为体外发酵，不具有瘤胃内食糜排空和瘤胃壁对其吸收的功能，导致部分NH3-N溶解在发酵液中，进而使NH3-N含量升高[35]。本试验中，棉仁粕和菜粕组NH3-N含量显著高于豆粕、DDGS、玉米胚芽饼和花生粕组，表明棉仁粕和菜粕较豆粕、DDGS、玉米胚芽饼和花生粕更易被瘤胃微生物分解，原因与饲料本身含有较高粗蛋白质以及饲料中有毒物质有关。因棉粕和菜粕中分别含有游离棉酚、硫葡萄糖苷和芥子碱等有毒物质，低水平棉酚和硫葡萄糖苷能够促进瘤胃微生物生长繁殖，导致瘤胃微生物分解含氮化合物的速度增强，使NH3-N含量升高。有研究发现，在绵羊日粮中按0.1 g/kg的剂量添加棉酚后，瘤胃中总细菌和原虫的数量显著增加，NH3-N含量也显著提高[36]。王鉴波[37]研究表明，瘤胃微生物可分解部分芥子苷，对牛毒性较弱。因此，棉仁粕和菜粕宜作为替代豆粕的蛋白饲料，但在生产实际中应注意用量，防止中毒。本研究结果表明，各组间MCP虽无显著差异，MCP排序为棉仁粕DDGS玉米胚芽饼豆粕菜粕花生粕。结合产气速率、NH3-N及VFA含量结果可知，棉仁粕在以上3个指标结果中皆为最高，表明棉仁粕替代豆粕具有较大优势。郎朝丽[38]研究发现，与豆粕相比，棉籽粕可促进肉牛瘤胃微生物合成更多的MCP，与本研究结果一致。棉仁粕中的棉酚可能与产生较多MCP相关，有研究报道，体外培养研究中运用棉酚作为碳源分离培养大量棉酚降解菌[38]，瘤胃微生物可能利用棉酚作为碳源供自身生长，促进合成MCP。3.4不同蛋白原料对发酵液VFA含量的影响VFA可为反刍动物提供60%~80%的可消化能[39]。本研究中，棉仁粕的乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、异戊酸和总挥发性脂肪酸含量最高，表明棉仁粕较豆粕及其他蛋白原料发酵得更完全。原因可能是本试验中棉仁粕相较其他蛋白饲料含有更多的粗蛋白质[20]，且低水平棉酚能促进瘤胃微生物生长繁殖[36]。通常情况下，当饲料中纤维素和半纤维素相比可溶性碳水化合物和淀粉的含量高时，乙丙比也随之上升[29]。本试验中，棉仁粕和菜粕组的乙丙比显著高于花生粕、豆粕、DDGS和玉米胚芽饼组，原因是菜粕中纤维素含量高，会使瘤胃内纤维降解菌和厌氧真菌的数量增多，此时瘤胃以乙酸发酵为主，乙酸产量增加，导致乙丙比增大[40]；而棉仁粕乙丙比高于菜粕，表明棉仁粕在提供能量方面更具优势。3.5不同蛋白原料对发酵液氨基酸含量的影响目前，国内外关于瘤胃液游离氨基酸的研究很少，尚无瘤胃液氨基酸最适含量范围的相关报道。本试验中，菜粕和DDGS发酵液总氨基酸含量显著高于花生粕、豆粕、玉米胚芽饼和棉仁粕，可能是因为DDGS和菜粕中的总能含量相对较高，促进了瘤胃微生物的生长繁殖，产生了更多的氨基酸。韩正康等[41]指出，饲料中能量水平与瘤胃微生物的生长繁殖呈正相关。本研究中，各组间发酵液中每种氨基酸含量产生差异，可能与本试验饲料蛋白可溶性和蛋白底物的性质有关[29]，进而对瘤胃微生物分解游离氨基酸产氨和微生物利用氨基酸的效率产生影响，仍待进一步深入研究。4结论本试验结果表明，与豆粕相似性由高到低分别为玉米胚芽饼、棉仁粕、花生粕、菜粕、DDGS，养殖生产中，可以根据实际情况选择以上蛋白原料适当替代豆粕。