维生素E（VE）与硒元素是动物生命活动必需的营养素，具有促进体内抗氧化活性、提升畜禽产品品质和繁殖性能的作用[1-3]。动物饲料中缺乏维生素E和硒元素，会造成动物生产性能下降，威胁动物健康[4]。有报道称，补充VE可缓解日粮中因缺乏硒元素引起的负面作用，而补充硒元素同样可以缓解因VE缺乏造成的负面影响，表明两种营养要素在体内代谢过程中具有协同作用，但不能完全替代[5]。《饲料添加剂安全使用规范》指出VE和硒元素在蛋鸡日粮中的推荐添加量分别为10~30 IU/kg和0.1~0.3 mg/kg，但两种营养素按照最高推荐添加量使用时会造成饲料生产成本上升。为充分利用VE与硒元素的协同作用，本研究以蛋鸡为研究对象，通过在日粮中联合使用VE和硒元素，观察VE和硒元素对蛋鸡产蛋性能、蛋品质、抗氧化等指标的影响，为VE和硒元素在蛋鸡饲料生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料及地点试验动物为28周龄且健康程度一致的罗曼蛋鸡2 700只，于山西鑫鸿皓蛋鸡养殖专业合作社进行试验。使用D-α-生育酚和酵母硒分别作为蛋鸡日粮中VE和硒元素的来源，D-α-生育酚中VE含量为500 IU/g，酵母硒中硒元素含量为1%，均购自艾丽曼动物营养有限公司。1.2试验设计将2 700只蛋鸡完全随机分为9组，每组3个重复，每个重复100只蛋鸡。试验使用3×3双因素设计，分别为3个硒元素添加水平（0、0.15、0.30 mg/kg）和3个VE水平（0、15、30 IU/kg），根据硒元素和维生素在蛋鸡日粮中的水平将各组分别定义为VE0Se0、VE0Se0.15、VE0Se0.3、VE15Se0、VE15Se0.15、VE15Se0.3、VE30Se0、VE30Se0.15、VE30Se0.15。基础日粮组成及营养水平见表1。预试期3 d，正式试验期49 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米61.55代谢能/(MJ/kg)≥12.38豆粕24.20粗蛋白/%≥16.58麸皮1.15钙/%≥3.62石粉8.10有效磷/%≥0.42预混料5.00赖氨酸/%≥0.83蛋氨酸/%≥0.49注：1.预混料由朔州市平鲁区联合饲料加工厂生产。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理各组试验鸡独栋饲喂，在预试验前1周对试验场地进行卫生打扫和消毒。使用笼养方式进行饲养，饲养密度为2只/笼，试验期间蛋鸡自由饮水与采食。光源为自然光加人工补光，光照时间持续为（16.0±0.5）h，光照强度约为（24.0±0.5）lx，保证温湿度适宜。蛋鸡日常管理遵循养殖合作社规章制度。1.4测定指标及方法1.4.1产蛋性能每日记录每组各重复的饲料投喂量与剩余量、蛋重与产蛋数，试验鸡死淘数。试验结束后统计蛋鸡平均日采食量、平均产蛋率、平均日产蛋重、料蛋比及存活率。平均日采食量=总采食量/(试验蛋鸡数×试验天数)(1)平均产蛋率=产蛋总数/(试验蛋鸡数×试验天数)×100%(2)平均日产蛋重=总蛋重/(试验鸡数×试验天数)(3)料蛋比=总采食量/总蛋重(4)存活率=试验末蛋鸡数/试验初蛋鸡数×100%(5)1.4.2蛋品质试验结束时，各重复随机选择5枚鸡蛋，测定鸡蛋品质。使用游标卡尺测定鸡蛋长径与短径，计算蛋形指数，使用蛋壳强度测定仪与蛋壳厚度测定仪（北京天翔飞域科技有限公司）分别测定鸡蛋蛋壳强度与厚度；使用Egg AnalyzerTM（Orka公司）测定鸡蛋蛋白高度、蛋黄颜色、哈夫单位指标。1.4.3血清抗氧化指标试验结束时，各重复随机选择2只蛋鸡进行翅静脉采血，获取血液约2 mL，3 000 r/min离心5 min，置于-20 ℃条件下保存，用于血清抗氧化指标检测。使用酶联免疫吸附法测定蛋鸡血清总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）。试剂盒购自艾博抗（上海）贸易有限公司，具体操作步骤参考试剂盒说明书。1.4.4免疫器官指数采血完毕，称量蛋鸡活重后将放血致死，获取蛋鸡的法氏囊、胸腺、脾脏，吸取器官表面水分，称量器官湿重，计算相关的免疫器官指数。免疫器官指数=器官湿重/蛋鸡活体重(6)1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件进行初步整理，SPSS 26软件进行双因素方差分析，LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，蛋鸡的平均产蛋率和平均产蛋重均随着维生素E和酵母硒水平上升而显著上升（P0.05）。酵母硒水平、维生素E对蛋鸡的料蛋比和死亡率具有显著影响（P0.05），但酵母硒水平和维生素E的交互作用对料蛋比和死亡率无显著影响（P0.05）。日粮中添加酵母硒蛋鸡的料蛋比和死亡率均显著下降（P0.05），但0.15、0.30 mg/kg水平间差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T002表2酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡生产性能的影响项目平均日采食量/[g/(只·d)]平均产蛋率/%平均产蛋重/[g/(只·d)]料蛋比死亡率/%VE/(IU/kg)Se/(mg/kg)00109.54±0.9880.32±0.65f47.14±0.26e2.32±0.029.67±0.5800.15109.90±1.4680.67±0.56f47.49±0.31e2.31±0.058.33±0.5800.30110.48±1.3780.67±0.38f47.38±0.11e2.33±0.047.33±0.58150110.36±0.9582.89±0.60e47.80±0.17de0.31±0.016.33±1.15150.15110.28±0.9485.56±1.18d48.52±0.45cd2.27±0.013.33±1.53150.30110.72±1.1186.81±0.50c48.79±0.45c2.27±0.033.33±0.58300110.82±1.4589.04±0.60b49.02±0.95c2.26±0.072.33±2.08300.15109.90±1.5789.95±0.46b50.11±0.18b2.19±0.031.67±0.58300.30110.43±0.9491.39±1.06a51.84±0.55a2.13±0.031.67±1.15主效应VE/(IU/kg)0109.97±0.4184.08±0.24c47.34±0.15c2.32±0.01a8.44±0.37a15110.46±0.4285.09±0.25b48.37±0.15b2.28±0.01b4.33±0.36b30110.39±0.3990.13±0.24a50.32±0.16a2.19±0.01c1.56±0.32cSe/(mg/kg)0110.24±0.4384.08±0.26c47.98±0.15c2.30±0.01a6.11±0.36a0.15110.03±0.4285.40±0.24b48.71±0.14b2.26±0.01b4.44±0.34b0.30110.55±0.4086.29±0.24a49.34±0.16a2.24±0.01b3.78±0.38bP值VE0.6760.0010.0010.0010.001Se0.6720.0010.0010.0140.001VE×Se0.8830.0060.0010.0530.480注：同列数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，维生素E、酵母硒水平及两者的交互作用显著影响鸡蛋蛋白高度（P0.05），且蛋白高度随着酵母硒和维生素E添加量增加而显著上升（P0.05）。蛋黄颜色与哈夫单位主要受酵母硒和维生素E添加水平的影响（P0.05），并随着添加水平的上升而提高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T003表3酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡蛋品质的影响项目蛋形指数蛋壳厚度/mm蛋壳强度/N蛋白高度/mm蛋黄颜色哈夫单位VE/(IU/kg)Se/(mg/kg)001.30±0.010.41±0.0240.45±1.272.54±0.08e8.52±0.1168.36±1.0600.151.31±0.010.40±0.0240.05±0.742.57±0.07e8.67±0.0574.41±2.7800.301.31±0.010.40±0.0139.62±1.012.62±0.07e8.70±0.0575.47±0.601501.32±0.010.41±0.0139.92±0.302.61±0.07e8.76±0.1374.36±2.53150.151.32±0.010.41±0.0340.51±0.713.01±0.15c9.03±0.1179.09±1.14150.301.31±0.010.39±0.0341.31±0.753.00±0.10c9.03±0.1478.17±3.073001.31±0.010.41±0.0240.51±0.732.82±0.08d8.90±0.1581.95±1.90300.151.31±0.010.40±0.0141.19±1.153.44±0.15b9.15±0.1181.33±1.82300.301.31±0.010.41±0.0340.91±1.063.84±0.07a9.14±0.0783.71±1.56主效应VE/(IU/kg)01.306±0.0030.403±0.00640.047±0.3052.579±0.032c8.631±0.036c72.746±0.664c151.312±0.0030.404±0.00640.582±0.3432.873±0.034b8.941±0.036b77.207±0.668b301.310±0.0030.406±0.00640.870±0.3213.364±0.030a9.063±0.036a82.331±0.669aSe/(mg/kg)01.311±0.0030.409±0.00640.301±0.3112.657±0.032c8.728±0.035b74.889±0.663b0.151.308±0.0030.402±0.00640.581±0.3083.007±0.032b8.950±0.035a78.279±0.667a0.301.309±0.0030.402±0.00640.617±0.3243.153±0.033a8.958±0.033a79.116±0.664aP值VE0.2880.9680.1750.0010.0010.001Se0.7210.6820.7240.0010.0010.001VE×Se0.8030.9460.3170.0010.8640.0552.3酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，维生素E和酵母硒水平的变化对蛋鸡血清抗氧化指标均具有显著影响（P0.05），未出现显著的交互效应（P0.05）。蛋鸡血清T-AOC、GSH-Px、SOD活性随着日粮中维生素E和酵母硒水平的增加而显著提升（P0.05），血清MDA含量随着日粮中维生素E和酵母硒水平的增加而显著下降（P0.05）。当维生素E添加水平为30 mg/kg时，血清T-AOC显著升高（P0.05）。与未添加酵母硒组相比，日粮中添加酵母硒可显著降低蛋鸡血清MDA含量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T004表4酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡血清抗氧化指标的影响项目T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)VE/(IU/kg)Se/(mg/kg)001.86±0.32236.44±14.1675.33±4.706.59±0.2900.151.84±0.08262.09±15.0778.51±2.736.34±0.2900.301.87±0.02265.06±17.6579.37±2.486.27±0.411501.88±0.04267.74±18.0482.94±4.026.40±0.15150.151.96±0.03286.31±15.3685.08±2.056.02±0.12150.302.02±0.18297.24±16.5591.57±4.425.87±0.143002.08±0.14294.46±13.0390.59±4.395.62±0.26300.152.22±0.15311.52±11.9697.74±4.515.41±0.21300.302.44±0.10349.96±17.88109.00±4.865.27±0.15主效应VE/(IU/kg)01.856±0.050b254.529±5.226c77.734±1.309c6.403±0.081a151.958±0.050b283.760±5.229b86.529±1.310b6.099±0.083b302.244±0.049a318.646±5.227a99.101±1.308a5.431±0.079cSe/(mg/kg)01.939±0.050b266.212±5.237c82.953±1.306c6.204±0.081a0.152.008±0.049ab286.637±5.227b87.107±1.308b5.926±0.081b0.302.111±0.049a304.086±5.223a93.312±1.308a5.803±0.080bP值VE0.0010.0010.0010.001Se0.0070.0010.0010.007VE×Se0.4000.3350.0540.9452.4酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡免疫器官指数的影响（见表5）由表5可知，日粮中酵母硒水平和维生素E变化对胸腺指数和脾脏指数的影响不显著（P0.05）。日粮中维生素E和酵母硒水平显著影响蛋鸡法氏囊指数（P0.05），但二者无显著的交互作用（P0.05）。随着维生素E水平的上升，蛋鸡法氏囊指数显著提高（P0.05），硒元素为0.30 mg/kg可显著提升蛋鸡法氏囊指数（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T005表5酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡免疫器官指数的影响项目法氏囊指数胸腺指数脾脏指数VE/(IU/kg)Se/(mg/kg)004.36±0.083.76±0.062.28±0.1300.154.41±0.043.77±0.072.38±0.1800.304.48±0.063.81±0.052.32±0.181504.53±0.053.81±0.132.24±0.08150.154.60±0.063.76±0.072.31±0.13150.304.61±0.033.77±0.082.27±0.083004.73±0.093.84±0.132.27±0.09300.154.79±0.103.77±0.082.27±0.16300.305.00±0.143.83±0.122.31±0.12续表5　酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡免疫器官指数的影响 单位：g/kgg/kg10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.010.T006项目法氏囊指数胸腺指数脾脏指数主效应VE/(IU/kg)04.417±0.045c3.779±0.0362.327±0.045154.581±0.044b3.780±0.0342.273±0.048304.841±0.043a3.826±0.0342.284±0.045Se/(mg/kg)04.541±0.045b3.802±0.0382.263±0.0460.154.601±0.042b3.768±0.0442.319±0.0470.304.697±0.044a3.814±0.0342.302±0.046P值VE0.0010.5450.680Se0.0020.6040.674VE×Se0.1510.8940.9523讨论3.1酵母硒与维生素E联合使用对蛋鸡产蛋性能的影响硒元素和维生素E是蛋鸡生命活动不可或缺的营养素，缺乏硒元素和维生素E易引发胚胎性疾病，使雏鸡不能正常出壳；幼龄蛋鸡缺乏两种营养素易导致行走困难，最终衰竭死亡；产蛋期缺乏两种营养素会导致蛋鸡生产性能下降[6]。林厦菁等[7]使用3×3双因素设计，在黄羽肉种鸡基础日粮中分别设置维生素E添加水平为0、20、40 IU/kg，硒元素添加水平为0、0.15、0.3 mg/kg，发现肉种鸡日粮中硒元素水平对产蛋性能无影响，由于基础日粮中维生素E含量已经接近30 IU/kg，因而额外添加的维生素E水平变化对产蛋性能无显著改善。张浩等[8]在海兰褐蛋鸡日粮中分别添加0.1、0.2、0.3、0.4 mg/kg酵母硒，发现与对照组蛋鸡相比，0.3、0.4 mg/kg酵母硒可显著提高平均产蛋重和产蛋率，降低料蛋比，表明单独改变日粮中硒元素水平即可提高蛋鸡生产性能。杨玉等[9]分别在蛋鸡基础日粮中添加0.2、0.6、1.0 mg/kg水平的酵母硒，饲喂8周，发现与对照组相比，添加0.2、0.6、1.0 mg/kg水平的酵母硒可以显著增加产蛋率，降低料蛋比；认为0.2 mg/kg硒水平可以显著提升蛋鸡平均日采食量，而0.6 mg/kg组蛋鸡的料蛋比最低。谭芳等[10]在罗曼蛋鸡日粮中分别以0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mg/kg硒元素和0、41.66、83.32、124.98、166.64、249.96 IU/kg维生素E，饲喂8周，1 mg/kg硒元素与83.32 IU/kg维生素E联合添加可使蛋鸡的产蛋率显著高于其他各组。尽管该研究的推荐添加量超过规定的推荐用量，但认为维生素E与硒元素联合添加可以改善蛋鸡生产性能。燕磊等[11]使用2×3两因素设计配制6种樱桃谷种鸭试验日粮，其中硒元素添加水平为0.125、0.25 mg/kg，维生素E的添加水平为50、100、200 mg/kg，发现饲料中硒元素水平对鸭产蛋率有显著影响且与添加水平呈正相关，但两种营养素水平对蛋重无显著影响。本研究认为，日粮中日粮中酵母硒和维生素E水平显著影响蛋鸡平均产蛋率、产蛋重、料蛋比和死亡率，但不同的文献关于酵母硒和维生素E的使用对家禽生产性能的改善作用报道不完全一致，可能与品种或者日粮组成有关，仍需要进一步研究。3.2酵母硒和维生素E联合使用对蛋鸡蛋品质的影响蛋壳强度与蛋壳厚度影响鸡蛋的合格率，蛋形指数反映了鸡蛋的种用价值。蛋白高度与鸡蛋营养价值有关，而蛋黄颜色主要受饲料中叶黄素含量和蛋鸡品种的影响，与鸡蛋营养价值无直接关系[12]。哈夫单位越高表明鸡蛋的新鲜程度越高[13]。冯挺财等[14]在产蛋后期的蛋鸡日粮中分别添加30、60、120、240 mg/kg维生素E，发现添加120 mg/kg维生素E可以显著提高蛋鸡产蛋性能、蛋壳强度和蛋黄颜色，认为在蛋鸡产蛋后期使用维生素E有助于提升生产性能和蛋品质。燕磊等[11]研究表明，硒与维生素E联合使用可以增强鸭蛋的蛋壳厚度，但对哈夫单位、蛋黄颜色等指标无显著影响。石慧芹等[15]研究了酵母硒和维生素E对氧化应激条件下蛋鸡的蛋品质的影响，对照组基础日粮含1%氧化鱼油，试验组分别为基础日粮中添加0.5 mg/kg硒元素、50 IU/kg维生素E、0.5 mg/kg硒元素+50 IU/kg维生素E，发现各试验组蛋鸡的平均产蛋重显著上升，并且50 IU/kg维生素E组和0.5 mg/kg硒元素+50 IU/kg维生素E组鸡蛋蛋黄颜色显著上升；0.5 mg/kg硒元素+50 IU/kg维生素E组鸡蛋哈夫单位显著高于对照组。本研究结果表明，日粮中硒元素和维生素E水平显著影响鸡蛋蛋白高度、蛋黄颜色和哈夫单位，与上述研究结果基本一致。3.3酵母硒和维生素E联合使用对蛋鸡血清抗氧化指标的影响血清抗氧化指标能够反映机体减轻氧化应激和清除自由基的能力，与机体健康密切相关[16]。杨芸瑜等[17]使用3×3两因素试验设计不同水平维生素E（0、50、100 IU/kg）和硒元素（0、0.15、0.30 mg/kg）添加在怀乡鸡日粮中，发现日粮中维生素E的添加水平与怀乡鸡血清T-AOC以及GSH-Px活性呈显著正相关，与血清MDA含量负相关，认为硒与维生素E的交互作用可显著提高怀乡鸡血清SOD活性，联合添加时可显著降低血清MDA含量，使用100 IU/kg维生素E与0.3 mg/kg硒元素联合添加对改善怀乡鸡血清抗氧化指标效果最好。刘风民[18]以地方杂交鸡为研究对象，研究维生素E（10、30、100 IU/kg）和硒元素（0、0.15 mg/kg）对鸡抗氧化能力的影响，发现随饲喂时间延长，饲喂添加有机硒和维生素E日粮的鸡血液MDA含量极显著降低，血液中GSH-Px活性极显著升高。本研究表明，日粮中添加维生素E和酵母硒显著影响蛋鸡血清抗氧化指标，但并无交互作用，与上述研究结果基本一致。3.4酵母硒和维生素E联合使用对蛋鸡免疫器官指数的影响胸腺以及法氏囊是家禽重要的初级免疫器官，其主要作用是分泌Ｔ淋巴细胞以及分泌胸腺素，脾脏重量与其所含的免疫细胞数量密切相关。因此，根据免疫器官指数可以初步判断蛋鸡体内免疫功能[19]。Hussain等[20]研究有机硒、无机硒和维生素E对鸡免疫系统的影响，使用0.25、0.50、1.00 mg/kg水平的酵母硒或无机硒与0、200 IU/kg水平维生素E配合添加，发现对照组鸡免疫器官发育不良，而单独添加硒元素并未能显著改善这一症状，硒元素与维生素E联合添加可以显著提高脾脏的器官指数，认为酵母硒的效果显著优于无机硒。袁艺森[21]考察了维生素E和硒元素对蛋鸭免疫器官指数的影响，设维生素E水平为0、15、30 mg/kg，硒元素水平为0、0.15、0.30 mg/kg，发现维生素E和硒元素互作能够显著影响蛋鸭的法氏囊指数，以30 mg/kg维生素E+0.15 mg/kg硒元素组蛋鸭的法氏囊指数最高。本研究认为，联合使用维生素E和酵母硒可以显著提高蛋鸡法氏囊指数，与上述研究结果基本类似。4结论本研究结果显示，酵母硒和维生素E联合添加可显著改善蛋鸡生产性能、蛋品质，提高机体抗氧化能力和免疫性能，二者存在交互效应，效果与添加量呈正相关，在蛋鸡日粮中添加30 IU/kg维生素E+0.15 mg/kg硒元素效果较好。