苦荞麦属蓼科(Polygonaceae)双子叶植物,在我国主要分布于西南山区,贵州省及四川省凉山彝族自治州是苦荞麦的主要产区和起源地。建立苦荞麦栽培的适应性、稳定性和丰产性,可提高荞麦种质创新和利用效率[1],低量施肥可增加苦荞产量、生物量、肥料效率,提高水分利用率,增强土壤水分恢复力[2]。通过紫外光处理,苦荞幼苗合成黄酮类化合物的关键酶基因表达量均有不同程度升高,进而提高黄酮类化合物在苦荞中的含量[3]。荞麦籽粒营养丰富,并含有丰富的活性化合物,是一种保健、营养良好的功能性食品[4]。苦荞麦加工方法不同保留的物质成分存在较大差别[5],黄酮和多糖可同步优化提取[6],微波提取黄酮类化合物效果优于超声提取[7]。热蒸气处理能够改变苦荞粉理化性质,增强抗氧化能力,提高糊化温度和糊化焓值,提高其营养价值[8]。速溶苦荞茶粉能够有效地保留其中的活性成分[9]。对苦荞原材料进行蒸煮、焙烤、过滤、调配和杀菌,可增加其抗氧化能力和感官品质,提升营养保健价值[10-11],最佳苦荞与黑苦荞米比例也可研制营养丰富和风味膳食饮品[12]。荞麦还具有较好的药理作用、生理功能和低碳排放量的特性[13],胚部代谢物含量较高,壳中芦丁含量最高[14]。苦荞麦籽粒碎粒和皮壳可提高家禽的产蛋率,加快雏禽生长速度,苦荞麦茎叶也是畜禽优质青绿饲料来源,开发中草药饲料添加剂可代替抗生素药物使用[15]。苦荞麦根、茎、叶药用成分极为丰富,药用价值极其显著。本研究主要对苦荞麦根、茎、叶不同部位活性物质成分测定,为苦荞麦植株在动物保健、饲料添加剂、中兽药开发中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1样品采集荞麦(Fagopyrum dibotrys)根、茎、叶鲜样供试样品采自贵州省紫云县板当镇语馨生态养殖场。1.1.2试验仪器Waters Synapt G2-Si Qtof质谱仪、ACQUITY UPLC I Class system液相色谱、Acquity UPLC HSS T3色谱柱(沃特世(Waters)公司)、Vortex-2 Genie涡旋混合器(美国Scientific Industries公司)、5810R低温离心机(德国艾本德公司)、WD-9415C超声波清洗器(北京市六一仪器厂)。1.1.3试验试剂甲醇、甲酸购自Thermo Fisher公司,去离子水由自MilliQ Advantage A10超纯水机制备。1.2试验方法采用Waters Synapt G2-Si Qtof高分辨质谱及Unifi软件进行样品中药化学成分及活性分析。取荞麦样品100 mg置于15 mL离心管内,加入10 mL 50%甲醇水溶液(甲醇∶水=50∶50),超声30 min,取上清1 mL置于离心管中,14 000 r/min离心5 min,取上清过0.22 μm微孔滤膜,置入进样瓶中,进行UHPLC-MS/MS分析。空白样品采用相同条件处理。1.3试验条件色谱柱:ACQUITY UPLC HSS T3 column(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),柱温:35 ℃,进样体积:10 μL,流速:0.25 mL/min,流动相:A(去离子水,含0.1%甲酸);B(乙腈,含0.1%甲酸),梯度洗脱。1.3.1液相洗脱条件时间设置分别为0、15、50、60、70 min,流动速率为0.25 mL/min,流动相A为100%、80%、0、0、100%,流动相B为0、20%、100%、100%、0。1.3.2质谱条件质谱系统为Synapt G2-Si,质量范围为50~1 500 Da,扫描时间0.1 s,扫描模式MSe,ESI-and ESI+in resolution mode,参比化合物氨酸脑啡肽(LE)1 mg/L(scanfor 0.3 s,intervall 5 s),毛细管电压,3 kV(ESI+)/2.5 kV(ESI-)。锥孔电压40 V;碰撞能10~50 eV,离子源温度125 ℃;脱溶剂温度500 ℃,锥孔气流速50 L/h;脱溶剂气流速800 L/h;分析时间70 min。2结果与分析2.1苦荞麦叶、茎、根中总离子流图(TIC)2.1.1苦荞麦叶、茎、根正离子模式下TIC(见图1)离子流随时间变化分别形成苦荞麦叶、茎、根中总离子流图(TIC)。由图1可知,苦荞麦叶形成的TIC,当反应44.89 min时峰值最大,电流强度最强为1.25×107 eV;在17.06 min时,峰值次之,电流强度为0.75×107 eV 。苦荞麦茎的TIC,在17.06 min时,形成TIC峰值最大,电流强度为6×106 eV,在49.51 min,电流强度为3×106 eV。苦荞麦根的TIC,在59.51 min,离子电流强度最大为4×106 eV,反应1.05 min,电流强度为3.4×106 eV。图1正离子模式下苦荞麦叶、茎、根TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F1a1(a)苦荞麦叶TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F1a2(b)苦荞麦茎TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F1a3(c)苦荞麦根TIC2.1.2苦荞麦叶、茎、根负离子模式下TIC(见图2)由图2可知,苦荞麦叶形成的TIC,当反应17.11 min时峰值最大,电流强度为2.7×107 eV;当在16.47 min时,电流强度为2.4×107 eV,在48.85 min后电流强度几乎为0。苦荞麦茎形成的TIC,当反应17.11 min时峰值最大,电流强度为2.2×107 eV;当在1.67 min时峰值最大,电流强度为1.25×107 eV。苦荞麦根形成的TIC,当反应1.67 min时峰值最大,电流强度为1.12×107 eV。图2负离子模式下苦荞麦叶、茎、根TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F2a1(a)苦荞麦叶TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F2a2(b)苦荞麦茎TIC10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.F2a3(c)苦荞麦根TIC2.2苦荞麦中药活性成分及微量元素的测定结果从苦荞麦根、茎、叶中检测到化合物以质谱响应值排序,分别分析排出前20的化合物的活性。本研究根据中国药典2015版总结[16],文献查询基于pubmed[17-21],化合物数据查询基于pubchem、chemicalbook以及scifinder数据库。从苦荞麦叶、茎、根中分析出排名前20的化合物,共计30种化合物的活性信息及19种微量元素。2.2.1苦荞麦中药活性成分测定结果(见表1)由表1可知,本研究检测到苦荞麦叶、茎、根中活性成分共30种,即大麦黄苷、槲皮素、绿原酸、反油酸、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、麦芽糖、豆甾-5-烯-3β-醇-7-酮、山柰酚-3-O-芸香糖苷、原矢车菊素C-1、山柰酚、原矢车菊素B4、(-)-表儿茶素、芦丁、反对香豆酸、肥皂草苷、儿茶素-3-O-没食子酸酯、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷、十六(烷)酸、壬二酸、3,4-二羟基桂皮酸、木樨草素、山梨酸、大麦碱B、原矢车菊素B2、儿茶素-(4α→8)-儿茶素、小麦黄素、腺苷、对羟基苯甲酸、3-甲氧基-4-羟基苯甲酸、5-羟甲基糠醛。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.T001表1苦荞麦中药活性成分测定结果序号活生物质种类叶茎根序号活生物质种类叶茎根1大麦黄苷53.3059.213.0816儿茶素-3-O-没食子酸酯0.2500.362槲皮素28.9526.32017槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷0.221.3403绿原酸4.515.080.1318十六(烷)酸0.170.240.184反油酸2.860.16019壬二酸0.1300.115大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷1.491.870203,4-二羟基桂皮酸0.130.1106麦芽糖1.380.123.6921木犀草素00.210.367豆甾-5-烯-3β-醇-7-酮1.151.222.0522山梨酸00.200.138山柰酚-3-O-芸香糖苷1.000.89023大麦碱B00.140.169原矢车菊素C-10.780.3523.9924原矢车菊素B20023.6810山柰酚0.670.72025儿茶素-(4α→8)-儿茶素0023.6811原矢车菊素B40.640.330.9326小麦黄素000.8912(-)-表儿茶素0.470.285.4827腺苷000.1213芦丁0.350.25028对羟基苯甲酸000.1014反对香豆酸0.2800293-甲氧基-4-羟基苯甲酸000.0815肥皂草苷0.260.390305-羟甲基糠醛000.08%苦荞麦叶和茎中活性物质种类和含量大致相似,与根中活性物质种类及含量差别较大。苦荞麦叶和茎中大麦黄苷含量最高,分别达到53.30%和59.21%,槲皮素含量分别为28.95%和26.32%,叶中前20种中含量超过1.00%的活性物质有7种,茎中前20种中超过1.00%的活性物质有6种;苦荞麦根中原矢车菊素C-1和原矢车菊素B2含量分别为23.99%和23.68%,儿茶素-(4α→8)-儿茶素含量为23.68%,苦荞麦根中活性物质前20种中含量超过1.00%的有7种。2.2.2苦荞麦元素含量测定结果(见表2)由表2可知,苦荞麦叶、茎、根中元素共19种,即钾、钙、钠、钡、锶、钛、铁、镍、铜、锌、磷、铝、镁、锰、钴、硼、铬、钒、锡。在苦荞麦叶、茎、根中钾含量最高,分别为15 803.64、24 533.12、4 843.57 µg/g;叶中钙、镁含量分别为9 269.32、5 627.71 µg/g,茎中钙和镁含量分别为4 092.16、2 534.39 µg/g,根中铁、铝、钙含量分别为2 153.08、2 125.28、1 995.49 µg/g。每克苦荞麦叶、茎、根中钾、钙、镁、铁、锰、铝、钠等7种元素的含量均超过100 µg,部分元素超过1 000 µg,含量在0~100 µg的元素还有10多种。因此,苦荞麦整株中含有较丰富的元素。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.04.023.T002表2苦荞麦元素含量测定结果序号元素名称叶茎根1钾15 803.6424 533.124 843.572钙9 269.324 092.161 995.493钠81.8781.04155.514钡24.7425.4616.125锶11.7511.277.276钛13.467.9558.317铁324.61222.382 153.088镍8.403.616.079铜16.049.9247.0910锌64.8556.5147.0911磷3 764.073 551.461 611.5312铝745.33271.342 125.2813镁5 627.712 534.39726.3014锰440.29105.1285.1915钴12.004.314.8516硼30.1522.8912.3317铬4.4004.5018钒006.1319锡2.0200µg/g3讨论3.1苦荞麦叶、茎、根中活性物质分析苦荞麦籽粒具有较丰富的营养物质和药用成分,大部分相关研究集中在籽粒、麦壳。苦荞麦籽粒中含有黄酮、甾体、萜、酚及有机酸类等化学成分。邵美红等[22]从不同品种苦荞麦叶茎和籽粒中检测出黄酮。胡一冰等[23]研究了苦荞麦的药理作用。也有研究表明,苦荞麦在临床上具有降血糖血脂、保护血管、抗癌防癌、镇痛、祛痰、抗炎、抗疲劳、抗氧化等作用[24-26]。严晶等[27]研究表明,股荞麦具有清热解毒、消痈排脓、健脾利湿等重要的药理作用,苦荞麦籽粒在经济价值和药用价值等方面也具有较好的发展潜力。但目前尚未见对苦荞麦叶、茎、根全株活性成分进行测定的报道。本研究通过对苦荞麦叶、茎、根全株检测,并将苦荞麦叶、茎、根化学成分与中国药典对照发现,槲皮素具有抗氧化、抗癌、保护心血管等作用,还具有较好的袪痰、止咳、平喘作用;原矢车菊素C-1和原矢车菊素B2均具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用;儿茶素-(4α→8)-儿茶素具有抗氧化及防治心脑血管疾病作用,还能够预防肿瘤等;槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷具有抗氧化作用,在治疗癌症、心血管疾病等方面具有重要作用;大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷具有抗炎和抗癌的特性;绿原酸具有抗血小板聚集、抗菌、消炎的作用。3.2苦荞麦叶、茎、根中元素分析元素在畜牧生产中必不可少,苦荞麦叶、茎、根中元素含量较丰富,可将苦荞麦作为矿物质饲料添加剂。在不同的生产阶段和不同的生产性能的动物需要添加不同种类和数量微量元素,如在幼龄和种用兔饲粮中添加铁、铜、锌、锰元素的含量高于肉用和毛用[28]。鸡饲粮中添加适量微量元素可提高鸡的生产性能,铁、铜、钴是鸡造血不可缺少的微量元素[29]。根据国家标准,畜禽饲料卫生标准规定铬、砷、铅、镉、汞重金属元素含量不可超过10.0、2.0、5.0、0.5、5.0 μg/g,饲料中锌添加量不高于250 μg/g;断奶两周后的仔猪饲料中锌含量低于3 000 μg/g,乳猪低于1 199 μg/g[30]。有研究表明,饲料中添加锌、硒和维生素E,母猪雌激素有所升高,初发情期时间可提前7 d左右;种公猪精子畸形率较低,精子活力、密度、精液量及雄激素量均明显提高[31]。添加有机螯合矿物质可提高猪对营养物质、钙、磷的利用率,提高母猪的繁殖性能和仔猪初生重、断奶存活数及存活率[32]。蛋鸡饲粮中添加铜、铁、锌、锰可提高产蛋率,降低蛋中胆固醇含量,蛋黄颜色较鲜[33]。因此,可利用苦荞麦的添加补充微量元素,提高畜牧产品的品质。4结论本试验发现,苦荞麦植株含有多种生物活性成分及较丰富的微量元素,苦荞麦整株中活性物质在中药和保健食品方面具有较好的开发价值,可以减少饲料中抗生素的使用。

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