牛结核病是一种由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引发的渐进性消耗性人畜共患病[1]，以组织脏器的结核结节性肉芽肿和干酪样、钙化的坏死病灶为特点。分枝杆菌分为3种类型：牛分枝杆菌（牛型）、结核分枝杆菌（人型）和禽分枝杆菌（禽型）[2]。牛分枝杆菌大小约为1~4 μm×0.4 μm，无鞭毛，不能运动，也不产生芽孢和荚膜，为专性需氧菌，革兰染色为阳性[3]，因该菌具有分枝生长的趋势而得名[4]。牛分枝杆菌常用罗氏固体培养基培养，菌落为结节状、颗粒状或菜花状，呈不透明的乳白色或米黄色。分枝杆菌不耐热，在60 ℃ 30 min即可死亡[5]，最易感动物是奶牛、水牛，其次是黄牛和牦牛[6]。牛结核病一年四季均可发生，主要经呼吸道、消化道感染，人、犊牛还可通过奶制品感染[7]，潜伏期为10~15 d甚至数月之久[8]。畜牧业作为一个具有民族特色的重要基础产业，是牧民赖以生存的依靠和经济来源，对促进新疆的经济发展与社会稳定意义非凡。但由于地域差异、人文环境的影响，牧民大多直接饮用新鲜牛乳，并不会对牛乳进行消毒，直接增加了感染牛结核的风险。传统的结核诊断方法耗费大量时间且需要重复抓牛测量其皮厚度，会使动物产生应激反应，也会出现假阳性、假阴性的现象，耗费人力物力，也可能误淘汰健康奶牛，而且检测人员操作不规范也会对结果造成影响[9-11]。牛结核抗体快速检测卡具有简便快速、肉眼快速判读和不需要特殊仪器设备、试剂等诸多优点，广泛应用于临床传染病诊断与动物检疫检验[12-13]。本试验利用牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）对新疆阿克苏地区某规模化奶牛场牛结核抗体进行监测，并对监测结果进行比对分析，为该场牛结核的防控与净化提供参考。1材料和方法1.1样品来源2020—2021年间，在阿克苏地区某规模化奶牛场采集全血3 215份（其中2020年1 668份，2021年1 547份）。记录全血的编号，查阅奶牛场档案资料获得奶牛的繁殖状态、月龄、胎次等信息。1.2仪器与试剂消毒的一次性采血器、EP管、量筒、烧杯、微量移液器（德国Eppendorf公司），多管架自动平衡离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）、高压灭菌锅（日本平山制作所株式会社）、涡旋混合器（Scientific Industries公司）。牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）试剂盒（上海快灵生物科技有限公司）。1.3样本采集使用一次性采血器采集奶牛尾静脉血，采集后，放置于多管架自动平衡离心机中3 000 r/min离心10 min，用微量移液器吸取透明清亮的上清液至1.5 mL干净无菌的EP管中，立即检测或置于-20 ℃保存待检。1.4抗体检测及结果判定方法按照牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）试剂盒操作说明书进行，结果判定方法见图1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.F001图1结果判定方法Fig.1Result judgment diagram2结果与分析2.12020—2021年某规模化奶牛场牛结核抗体的检测结果对阿克苏地区某规模化奶牛场全场采集全血3 215份进行检测，部分检测结果见图2。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.F002图2部分样品检测结果Fig.2Test results of some samples2.22020—2021年不同繁殖状态奶牛牛结核抗体的检测结果（见表1、表2）由表1可知，2020年共计检测1 668份不同繁殖状态样品，阳性样品23份，可疑样品3份，阳性率为1.38%。其中，未配种奶牛679份，有3份阳性样品，阳性率为0.44%；未妊娠奶牛300份，有6份阳性样品，阳性率为2.00%；妊娠奶牛689份，有14份阳性样品，阳性率为2.03%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T001表12020年不同繁殖状态奶牛结核抗体的检测结果Tab.1Detection results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows in different breeding states in 2020组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计1 6682331.38未配种奶牛679300.44未妊娠奶牛300612.00妊娠奶牛6891422.03由表2可知，2021年共计检测1 547份不同繁殖状态样品，阳性样品35份，可疑样品5份，阳性率为2.26%。其中，未配种奶牛583份，有6份阳性样品，阳性率为1.03%；未妊娠奶牛277份，有5份阳性样品，阳性率为1.81%；妊娠奶牛687份，有24份阳性样品，阳性率为3.49%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T002表22021年不同繁殖状态奶牛结核抗体的检测结果Tab.2Detection results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows in different breeding states in 2021组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计1 5473552.26未配种奶牛583611.03未妊娠奶牛277511.81妊娠奶牛6872433.492.32020—2021年不同月龄奶牛牛结核抗体的检测结果（见表3、表4）由表3可知，2020年共计检测1 577份不同月龄样品（2月龄以下不计入内），阳性样品23份，可疑样品3份，阳性率为1.46%。其中，2~3月龄奶牛84份，阳性率为0；4~6月龄奶牛84份，有1份阳性样品，阳性率为1.19%；6~10月龄奶牛110份，有2份阳性样品，阳性率为1.82%；10~22月龄奶牛378份，有6份阳性样品，阳性率为1.59%；22月龄以上奶牛921份，有14份阳性样品，阳性率为1.52%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T003表32020年不同月龄奶牛结核抗体的检测结果Tab.3Results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows of different ages in 2020组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计1 5772331.46断奶犊牛（2~3月龄）84000小育成牛（4~6月龄）84101.19大育成牛（6~10月龄）110201.82青年牛（10~22月龄）378611.59成母牛（22月龄以上）9211421.52由表4可知，2021年共计检测1 477份不同月龄样品（2月龄以下不计入内），阳性样品35份，可疑样品5份，阳性率为2.37%。其中，2~3月龄奶牛66份，阳性率为0；4~6月龄奶牛96份，有2份阳性样品，阳性率为2.08%；6~10月龄奶牛141份，有4份阳性样品，阳性率为2.84%；10~22月龄奶牛339份，有7份阳性样品，阳性率为2.06%；22月龄以上奶牛835份，有22份阳性样品，阳性率为2.63%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T004表42021年不同月龄奶牛结核抗体的检测结果Tab.4Results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows of different ages in 2021组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计1 4773552.37断奶犊牛（2~3月龄）66000小育成牛（4~6月龄）96202.08大育成牛（6~10月龄）141412.84青年牛（10~22月龄）339712.06成母牛（22月龄以上）8352232.632.42020—2021年不同胎次奶牛牛结核抗体的检测结果（见表5、表6）由表5可知，2020年共计检测874份不同胎次样品，阳性样品20份，可疑样品3份，阳性率为2.29%。其中，1~2胎奶牛525份，有10份阳性样品，阳性率为1.90%；3~4胎奶牛233份，有6份阳性样品，阳性率为2.58%；5~6胎奶牛98份，有3份阳性样品，阳性率为3.06%；7胎以上奶牛18份，有1份阳性样品，阳性率为5.56%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T005表52020年不同胎次奶牛结核抗体的检测结果Tab.5Results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows with different parity in 2020组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计8742032.291~2胎5251011.903~4胎233612.585~6胎98313.067胎以上18105.56由表6可知，2021年共计检测777份不同胎次样品，阳性样品29份，可疑样品4份，阳性率为3.73%。其中，1~2胎奶牛504份，有14份阳性样品，阳性率为2.78%；3~4胎奶牛205份，有9份阳性样品，阳性率为4.39%；5~6胎奶牛49份，有4份阳性样品，阳性率为8.16%；7胎以上奶牛19份，有2份阳性样品，阳性率为10.52%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.03.012.T006表62021年不同胎次奶牛结核抗体的检测结果Tab.6Results of rapid detection of tuberculosis antibody in dairy cows with different parity in 2021组别样品数/份阳性数/份可疑血清数/份阳性率/%合计7772943.731~2胎5041432.783~4胎205914.395~6胎49408.167胎以上192010.523讨论本试验通过采用抗体快速检测卡（胶体金法）对2020、2021年阿克苏地区部分规模化奶牛场内奶牛牛结核病抗体进行检测，并从奶牛的不同繁殖状态、不同月龄和不同胎次进行牛结核病抗体阳性率的统计分析。结果显示，本试验在2020年采集不同繁殖状态奶牛血样1 668份，2021年采集不同繁殖状态奶牛血样1 547份，抗体的平均阳性率分别为1.38%和2.26%。本调查结果明显高于叶丽[14]在2017—2018年间对贵州省9个州市的规模化奶牛养殖场随机抽取检测的报道的数据；与袁溶英[15]对靖边县6个乡镇牛结核情况进行监测的结果高；比郑汝芸等[16]在2020年度使用两种方法对阿勒泰地区的8 580头牛进行检测报道的结果低。综合上述研究，阿克苏地区牛结核病的抗体阳性率处于中等水平，相较低于国家控制标准（控制标准：6周龄以上的奶牛每年抽样检测2次，连续2年个体阳性率小于3%，阳性动物已扑杀）。本研究结果显示，2020年和2021年未配种奶牛、未妊娠奶牛和妊娠奶牛的结核抗体阳性率分别为0.44%、2.00%、2.03%以及1.03%、1.81%、3.49%。通过对比分析，在2020年到2021年之间，妊娠奶牛阳性数均最多，为2.03%和3.49%，表明妊娠期奶牛对结核菌素的敏感度下降，易感染结核，与胡立国等[17]和刘爱玲等[18]报道一致。妊娠这一特殊因素不可小觑，在平时的饲喂中应多关注是否有妊娠结核患病奶牛混入健康群，以免造成全群感染。本试验分别在2020年和2021年采集不同月龄奶牛血样1 577份和1 477份（2月龄以下不计入内），牛结核抗体平均阳性率为1.46%和2.37%。采集不同月龄奶牛血样中，断奶犊牛（2~3月龄）、小育成牛（4~6月龄）、大育成牛（6~10月龄）、青年牛（10~22月龄）、成母牛（22月龄以上）在2020年抗体阳性率分别为0（0/84）、1.19%（1/84）、1.82%（2/110）、1.59%（6/378）和1.52%（14/921），2021年牛结核抗体阳性率分别为0（0/66）、2.08%（2/96）、2.84%（4/141）、2.06%（7/339）和2.63%（22/835）。通过对比分析，2020年、2021年所检测不同月龄的奶牛中，大育成牛（6~10月龄）阶段的牛结核抗体阳性率最高，为1.82%和2.84%，与袁溶英[15]报道0~6岁以上的牛结核病阳性率相近，年龄越小，感染概率越小，证实了牛结核病的发生概率随奶牛年龄增大而增长。因此，在平时的检测工作中要加强对育成牛的监测，做到及时淘汰阳性牛。本试验在2020年和2021年采集不同胎次奶牛血样874份和777份（未生产的奶牛不计入内），牛结核抗体平均阳性率为1.46%和2.37%，其中，在采集不同胎次奶牛血样中，1~2胎、3~4胎、5~6胎和7胎以上等4种胎次的结核抗体阳性率中，2020年抗体阳性率为1.90%、2.58%、3.06%和5.56%，2021年抗体阳性率为2.78%、4.39%、8.16%和10.52%。2020年和2021年，1~2胎阶段检测出的阳性数均为最多，其次是3~4胎。夏青等[19]对某奶牛养殖集团20个奶牛场的32 833头成年母牛数据进行了分析，得出患病奶牛大多是第2胎和第3胎胎次，可能是因为没有经历过生产、环境恶劣等问题而引起免疫力下降、感染而患病。因此，养殖场人员要多注重对头胎和多胎动物的精心养护。随着时间推移，不同繁殖状态、不同月龄和不同胎次检出的牛结核病抗体阳性率越来越高，可能与场内圈舍拥挤、环境恶劣和对引进牛检疫不当等诸多因素有关。养殖场要加强消毒力度并定期更换消毒药剂[20]；定期对牛群进行检疫，新引进的牛要对其来源、健康状况进行彻底核查[21]；牛场定期对场内工作人员进行奶牛疾病培训，提升基层工作人员认识素养，养殖期间更加注重牛群情况。再次合理规划奶牛圈舍密度，清理环境，保证圈舍通风。综上所述，为牛群营造一个舒适的生活环境，才能降低牛群患病的风险。4结论本试验利用牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）对2020、2021年阿克苏地区部分规模化奶牛场内奶牛牛结核病抗体进行检测，并从奶牛的不同繁殖状态、不同月龄和不同胎次进行牛结核病抗体阳性率的统计分析。结果表明，该地区2020—2021年牛结核抗体阳性率小于国家控制标准，牛结核快速检测卡（胶体金法）可作为初步检测依据。