乳酸菌繁殖代谢的过程中会产生多种有机酸、酶、多糖等物质，有效降低禽畜饲料pH值，提高禽畜饲料的营养价值[1-2]。研究发现，使用乳酸菌发酵禽畜饲料可有效降解禽畜饲料中抗营养因子[3]，调节肠道菌群[4]，提高机体对饲料营养成分的吸收率，提高禽畜的免疫水平[5-6]。研究发现，乳酸菌发酵饲料对增强禽畜的生长性能具有显著效果[7-8]。副干酪乳酸杆菌作为乳酸杆菌中的主要分支之一，其产酸、耐酸、抑菌等能力较强，能够提高仔猪的生长性能，改善机体的免疫力[9-10]。本研究以副干酪乳酸杆菌发酵饲料，研究乳酸菌发酵饲料对生长育肥猪的生长性能与免疫力的影响，为乳酸菌固态发酵饲料的应用提供参考。1材料与方法1.1试验菌种乳酸菌制剂为前期分离的副干酪乳酸杆菌菌株，活菌数为4×1010 CFU/g。1.2试验日粮试验所用基础日粮根据NRC（2012）20~50 kg猪生长所需营养配制。以基础日粮为底物，加入基础日粮0.8倍的水，副干酪乳酸杆菌接种比例为1/10 000，混匀，密封发酵，制成乳酸菌发酵饲料。发酵温度为37 ℃，发酵48 h，饲料中副干酪乳酸杆菌数为1.656×1010 CFU/g。试验日粮由90%基础日粮+10%发酵饲料制成。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.006.T001表1试验日粮组成及营养水平项目对照组试验组原料组成/%玉米64.0057.50豆粕25.0022.50小麦麸6.005.40大豆油1.601.44石粉1.201.08磷酸氢钙0.800.72食盐0.400.36发酵饲料010.00预混料1.001.00合计100.00100.00营养水平消化能/(MJ/kg)13.4913.32粗蛋白质/%17.2318.01粗纤维/%3.883.64粗灰分/%5.315.33钙/%0.800.79总磷/%0.450.46乳酸/(g/kg)051.32pH值6.794.33注：1.预混料购自杭州宝积生物科技有限公司。2.营养水平均为计算值。1.3试验设计及饲养管理选取100头健康、体重（23.21±2.13）kg生长育肥猪（公、母各半），随机分为2组，每组5个重复，每个重复10头猪。对照组育肥猪饲喂基础日粮，试验组育肥猪饲喂90%基础日粮+10%乳酸菌发酵饲料。试验期30 d。试验期间，试验猪自由采食、饮水，按照养殖场规定定期对生长育肥猪进行免疫接种。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始和结束，对试验生长育肥猪进行称重，每天收集并记录采食量，计算平均日增重、平均日采食量、料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2养分表观消化率试验最后2 d，在日粮中添加0.3%三氧化二铬作为指示剂，每日采集试验生长育肥猪100 g粪便样品，连续采集2 d混合，-20 ℃保存，用于测定饲料和粪便中干物质、粗蛋白质和总能的含量，计算养分表观消化率。养分表观消化率=(食入营养物质量-对应粪中营养物质量)/食入营养物质量×100%(4)1.4.3血清指标1.4.3.1血清生化指标每个重复随机选取5头猪，静脉采血5 mL用于检测血清，血清于-80 ℃冰箱中保存。血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）按照试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明书进行测定。1.4.3.2免疫指标采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定结合珠蛋白（HP）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量。试剂盒购自美国BETHYL公司。1.4.3.3抗氧化指标测定总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA），操作方法按照试剂盒（合肥莱尔生物科技有限公司）说明书。1.5数据统计与分析采用SPSS 22.0进行分析，t检验进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵饲料对生长育肥猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验组生长育肥猪的末重、平均日增重、平均日采食量均显著高于对照组（P0.05），料重比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.006.T002表2发酵饲料对生长育肥猪生长性能的影响项目初重/(kg/头)末重/(kg/头)平均日增重/[g/(头·d)]平均日采食量/[g/(头·d)]料重比P值0.7240.0010.0010.0010.001对照组23.14±2.0737.03±1.44b463.46±15.09b1 213.41±15.27b2.62±0.05a试验组23.29±2.1740.78±1.83a583.77±17.98a1 241.21±23.74a2.13±0.06b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2发酵饲料对生长育肥猪养分表观消化率的影响（见表3）由表3可知，试验组生长育肥猪的粗蛋白、能量、干物质、粗纤维、粗脂肪表观消化率均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.006.T003表3发酵饲料对生长育肥猪养分表观消化率的影响项目粗蛋白能量干物质粗纤维粗脂肪钙磷P值0.0420.0410.0320.0390.0490.7700.870对照组76.33±12.34b77.37±14.32b79.45±14.58b30.12±6.21b70.23±7.09b28.34±4.5826.48±4.46试验组87.41±13.41a88.26±16.45a90.33±16.33a44.23±6.72a82.11±8.35a30.22±5.0127.51±4.79%2.3发酵饲料对生长育肥猪血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，试验组生长育肥猪血清TP、GLB含量显著高于对照组（P0.05），血清BUN、TC、TG、GLU含量以及ALT活性显著低于对照组（P0.05）。两组生长育肥猪血清ALB含量和AST活性差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.006.T004表4发酵饲料对生长育肥猪血清生化指标的影响项目TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)BUN/(mmol/L)AST/(U/L)ALT/(U/L)TC/(mmol/Ｌ)TG/(mmol/Ｌ)GLU/(mmol/Ｌ)P值0.0010.1190.0010.0010.1320.0010.0010.0010.001对照组59.14±2.19b23.44±1.6635.22±1.24b4.78±0.21a38.46±4.0334.30±2.61a2.23±0.18a0.61±0.21a3.71±0.33a试验组70.03±2.41a22.97±1.3146.31±1.49a3.86±0.47b37.23±4.0728.39±3.04b1.77±0.10b0.49±0.09b3.04±0.21b2.4发酵饲料对生长育肥猪血清免疫、抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组比，试验组生长育肥猪血清IgG、IgA、IgM含量显著升高（P0.05），IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低（P0.05），T-AOC及SOD活性显著升高（P0.05），HP、MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.006.T005表5发酵饲料对生长育肥猪血清免疫、抗氧化指标的影响项目免疫球蛋白/(g/L)炎性因子/(ng/L)抗氧化指标HPIgGIgAIgMIL-1βTNF-αIL-6T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)P值0.0010.0010.0010.0010.0010.0010.0010.0010.0010.001对照组1.88±0.09a4.77±0.34b1.41±0.20b0.79±0.14b124.78±3.03a974.36±8.13a170.34±2.18a6.31±1.51b43.33±1.32b3.89±0.67a试验组0.91±0.13b5.63±0.49a1.96±0.23a0.91±0.19a121.45±3.09b913.44±8.37b166.71±2.21b7.59±1.13a57.46±3.21a2.67±0.23b3讨论3.1发酵饲料对育肥猪生长性能的影响乳酸菌是动物肠道中的重要菌群，对维持动物健康水平、调控机体免疫功能方面具有重要影响。乳酸杆菌广泛存在于动物体表与体内，在动物体内可以竞争性抑制有害微生物侵袭与侵染，通过分解动物消化道内难以吸收的成分并生成各种消化酶，增强动物对营养物质的消化吸收能力；将动物消化道与饲料中的非蛋白氮吸收并生成各种氨基酸和维生素；提高动物机体的免疫能力。研究发现，在禽畜日粮中加入乳酸菌可通过促进猪的肠道发育，调节猪的肠道菌群，促进猪对饲料中营养成分的吸收，有效提高猪的生长性能[11-13]。本研究发现，使用发酵饲料生长育肥猪对饲料的消化率与利用率更高。3.2发酵饲料对育肥猪血清生化指标的影响血清生化指标能够在一定程度上反映机体的代谢水平和器官功能。肝脏是合成血清总蛋白的场所，血清TP可作为机体的蛋白质吸收水平指标，而由浆细胞分泌的球蛋白可作为机体的免疫能力的判断指标之一。本研究发现，发酵饲料组猪血清TP、GLB含量明显高于对照组，表明发酵饲料能够提高生长育肥猪合成蛋白质能力。血清TC可反映肝脏对脂肪代谢水平。本研究发现，发酵饲料组生长育肥猪的血清TC含量明显低于对照组，表明发酵饲料可增强生长育肥猪的脂肪代谢能力。血清BUN是机体蛋白质代谢最终产物，当动物体内蛋白质代谢良好，血清BUN应处于低水平或下调状态[14]。本研究发现，发酵饲料组生长育肥猪的血清BUN含量明显降低，表明发酵饲料可促进生长育肥猪的蛋白质代谢。血清ALT和AST可以反映机体肝脏功能，其活性过高时表明肝脏细胞可能受到损伤[15]。本研究发现，发酵饲料组生长育肥猪血清中AST和ALT活性较低，表明发酵饲料可在一定程度上保护生长育肥猪的肝脏，进而增强蛋白质合成与吸收能力，提高生长育肥猪的生长性能。3.3发酵饲料对生长育肥猪血清免疫指标的影响HP是一种急性期反应蛋白，与禽畜感染、炎症、免疫功能等与免疫力相关的疾病关系密切，猪血清HP含量越高，表明机体状态越差[16-17]。本研究发现，发酵饲料组猪血清HP含量较低，表明机体更健康。免疫球蛋白作为机体免疫功能的特异性指标，可有效反映机体的免疫能力[18]。发酵日粮可改善生长育肥猪体内的免疫球蛋白水平，提高免疫力[19-20]。本研究发现，使用发酵饲料后，生长育肥猪血清内的HP、IgG、IgA、IgM含量均得到明显改善。IL-6可诱导免疫B、T细胞增殖分化，作为一种炎症标记物参与机体的免疫；TNF-α由巨噬细胞产生，能够激活淋巴细胞，是一种作用力极强的抗感染细胞因子[21]。Bleau等[22]研究表明，乳酸菌培养液中具有大量的胞外多糖，可显著提高巨噬细胞对外源病毒、细菌等吞噬能力，降低IL-6和TNF-α含量。本研究发现，发酵饲料组猪血清IL-1β、TNF-α、IL-6含量均更低，表明发酵饲料可明显降低炎症反应，提高机体免疫力。当动物机体受到损伤或刺激后，动物机体内清除自由基的酶促系统发生针对性反应，以维持动物机体氧化与还原的动态平衡[23]。MDA是动物机体氧化反应的终产物，MDA水平上升表明机体内氧化反应激烈程度增强，从而损伤动物机体细胞。SOD是参与动物机体内氧化-还原反应的重要抗氧化酶，T-AOC是反映动物机体抗氧化系统功能状况的综合性指标。体内T-AOC、SOD、GSH-Px活性升高可增强机体抗氧化能力[24]。李薛强等[25]发现，发酵饲料可显著提高母猪血清中T-AOC、GSH-Px活性，与本试验结果相似。4结论本研究发现，发酵饲料可有效提高生长育肥猪的生长性能，增强机体蛋白质、脂肪合成与代谢能力，调节机体免疫功能。