青蟹（Scylla paramamosain）广泛分布于亚洲热带、亚热带和温带地区，由于体型大、产肉量高、味道鲜美和营养品质好等特点，已成为三门地区重要的池塘养殖品种[1]。目前，三门青蟹池塘养殖主要投喂鲜活贝类、冰鲜杂鱼等生物饵料，养殖效率低下，对海洋渔业资源破坏严重[2]。随着我国渔业转型升级推进，青蟹配合饲料的研制已迫在眉睫，研究高营养、低污染的青蟹饵料已成为维持青蟹生态可持续发展的重要方向[3]。黑水虻是双翅水虻科的一种昆虫，富含水产动物生长和发育所必需的氨基酸、脂肪酸以及抗菌肽等生物活性物质，是一种优质的昆虫蛋白源[4]。鱼粉是水产饵料的主要蛋白源，价格昂贵且资源有限。为解决鱼粉资源短缺的问题，利用黑水虻等昆虫蛋白源替代鱼粉已成为水产饵料工业研究的重要方向。黑水虻虫粉经脱脂处理后形成脱脂黑水虻虫粉，其蛋白含量可达50%~60%，是鱼粉理想的替代蛋白源。目前，脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉蛋白已经在大黄鱼（Larimichthys crocea）[5-6]、虹鳟（Oncorhynchus mykis）[7]、乌鳢（Chana argus）[8]、日本鲈鱼（Lateolabrax japonicus）[9]等水产动物中应用，但有关脱脂黑水虻虫粉在青蟹配合饲料中的研究鲜有报道。王悦等[10]评估了青蟹对饲料蛋白质和脂肪的需求。本研究在前期研究的基础上，利用脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉，探究黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹生长、形态学参数和营养品质的影响，评估黑水虻替代鱼粉的潜力，为合理配制青蟹饵料配方提供参考。1材料与方法1.1试验材料青蟹苗购自浙江省三门县当地的水产养殖场。试验饵料均购自浙江鸿利饲料有限公司。脱脂黑水虻虫粉由浙江昆微农业科技有限公司提供，粗蛋白含量为53%。1.2试验设计与管理选取健康、规格整齐、平均初重为5.2 g的青蟹幼苗480只，随机分到12个水泥池中（2 m×1.2 m×1.5 m），共分成4组，每组3个重复，每个重复40只青蟹。C组（对照组）青蟹饲喂基础饵料，H25组、H50组、H75组分别使用脱脂黑水虻虫粉等蛋白替代基础饵料中25%、50%、75%鱼粉，4种饵料均等氮等能。根据青蟹营养需求设计试验饵料，试验饵料组成及营养水平见表1。按试验饵料配方称重，加入10%~15%的自来水搅拌混合，经SLP-45型单螺杆饲料膨化机制成慢沉性颗粒饵料（粒径4 mm、长5 mm），饵料颗粒室内阴干，于-20 ℃冰箱内冷冻保存。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.011.T001表1试验饵料组成及营养水平项目C组H25组H50组H75组原料组成鱼粉40.030.020.010.0黑水虻虫粉011.022.433.2动物蛋白混合物8.08.08.08.0植物蛋白混合物21.521.521.521.5淀粉2.02.02.02.0面粉16.917.816.518.3胆碱0.20.20.20.2膨润土4.02.32.40预混料2.02.02.02.0磷酸二氢钙2.02.02.02.0鱼油3.43.23.02.8合计100.0100.0100.0100.0粗蛋白47.948.747.449.0粗脂肪7.97.77.58.1粗灰分15.012.212.49.7磷1.91.61.81.5注：1.预混料购自浙江鸿利饲料有限公司。2.营养水平均为实测值。%早晚饱食投喂两次，每次投放少量贝苗以增强诱食效果。养殖水体24 h充气，自然光照，水温21~26 ℃，每次换水30%。试验期4周。1.3测定指标及方法投喂试验结束后，所有试验组的青蟹苗均禁食24 h以排空胃内的食物残渣，将每个水池中的青蟹依次捕出、计数、称重。从每个水池中取出5只青蟹苗，测量试验青蟹幼苗体长、体宽、体高和体重，保存在-20 ℃冰箱内，作为分析试验青蟹体成分的样品。采用AOAC[11]方法分析试验青蟹和饲料样品的水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量，样品中的磷含量主要采用钒钼酸铵法检测。采用Sykam-433氨基酸分析仪测定青蟹氨基酸组成。采用GC/MS分析青蟹脂肪酸的组成。肥满度=100×试验结束时青蟹体重/试验结束时青蟹体长3 (1)1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹生长和形态学参数的影响（见表2）由表2可知，与C组相比，H25组和H50组蟹体的体长、体宽和体重显著升高（P0.05），各试验组青蟹的体高显著升高（P0.05），H25组和H75组蟹体肥满度显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.011.T002表2黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹生长和形态学参数的影响组别体长/(cm/只)体宽/(cm/只)体高/(cm/只)体重/(g/只)肥满度/(g/cm3)C组3.79±0.47a2.64±0.35a1.19±0.21a10.06±3.58a0.18±0.01aH25组4.41±0.70b3.18±0.51b1.67±0.32b17.64±7.62b0.20±0.02bH50组4.44±0.55b3.23±0.39b1.65±0.26b17.05±5.94b0.19±0.01abH75组3.90±0.23a2.81±0.17a1.50±0.09b12.14±2.21a0.20±0.01b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。2.2黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹营养成分的影响（见表3）由表3可知，与C组相比，H75组的蟹体水分含量显著低于H50组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.011.T003表3黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹营养成分成的影响组别水分粗蛋白质粗脂肪粗灰分磷C组69.08±1.01ab12.24±1.171.58±0.0211.95±0.180.30±0.02H25组69.26±0.45ab12.46±0.161.87±0.3411.08±1.810.28±0.01H50组73.40±2.29b10.53±1.041.19±0.4810.83±0.570.26±0.03H75组65.76±4.69a13.77±2.101.89±0.5012.09±0.570.34±0.04%2.3脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹蟹体氨基酸的影响（见表4）由表4可知，与C组相比，H75组的蟹体半胱氨酸含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.011.T004表4脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹蟹体氨基酸的影响项目C组H25组H50组H75组天门冬氨酸*△31.05±0.6531.94±2.1130.20±0.4330.86±0.02谷氨酸*△48.01±0.3853.31±3.2354.01±2.0350.62±5.20丝氨酸11.90±0.3712.28±0.4312.72±0.8011.88±0.01组氨酸8.01±0.458.98±0.088.83±0.228.45±0.48甘氨酸*17.28±0.0717.98±1.7218.24±2.2516.48±0.10苏氨酸12.89±0.0813.74±0.4213.20±0.4013.05±0.74精氨酸*41.16±0.8241.28±0.0440.33±2.1037.47±3.05丙氨酸*18.74±0.2819.24±0.5219.03±1.7018.17±0.11酪氨酸13.53±0.1914.51±0.6613.66±0.0213.99±1.71半胱氨酸0.65±0.04b0.67±0.04b0.63±0.09b0.47±0.02a缬氨酸13.18±0.4513.71±0.2213.03±0.5412.65±0.55蛋氨酸6.66±0.106.84±0.207.05±0.116.73±0.21苯丙氨酸14.04±0.5415.05±0.1815.05±0.5014.68±0.68异亮氨酸11.40±0.1611.90±0.3911.18±0.4011.11±0.72亮氨酸20.51±0.4621.66±0.1920.98±0.6820.50±0.90赖氨酸16.16±0.1316.43±0.4715.79±1.0216.51±1.35脯氨酸21.37±0.7018.58±5.4213.25±4.0615.70±2.60必需氨基酸总量143.92±1.11149.60±1.55145.44±5.53141.13±2.56呈味氨基酸156.23±0.14163.75±3.40161.81±8.51153.60±2.15鲜味氨基酸79.05± 1.0385.25±1.1284.21±2.4681.48±5.22注：1.“*”为呈味氨基酸，“△”为鲜味氨基酸。2.同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。mg/kg2.4脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹蟹体脂肪酸的影响（见表5）由表5可知，与C组相比，各试验组蟹体C12∶0含量显著降低（P0.05），H25组和H75组蟹体C16∶1,n7c含量显著增加（P0.05），H50组和H75组蟹体C16∶0含量显著增加（P0.05），H50组蟹体的14methyl C16∶0显著升高（P0.05），H25组蟹体C20∶5,n3c含量显著升高（P0.05），H75组蟹体C20∶5,n3c、C20∶2,n6c含量显著降低（P0.05），H75组蟹体多不饱和脂肪酸、PUFA（n-3）含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.011.T005表5脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对青蟹蟹体脂肪酸的影响项目C组H25组H50组H75组C8∶00.04±0.010.02±0.000.03±0.000.03±0.02C10∶00.09±0.030.12±0.100.07±0.010.12±0.02C12∶02.56±0.60b0.73±0.21a1.08±0.19a1.10±0.18aC14∶1,n5c0.03±0.020.03±0.010.03±0.000.04±0.02C14∶02.95±0.213.02±0.252.67±0.853.08±0.099Methyl C14∶00.15±0.020.17±0.000.25±0.080.27±0.0713Methyl C14∶00.06±0.000.06±0.010.09±0.070.11±0.07C16∶3,n4c0.17±0.020.26±0.050.21±0.090.22±0.03C16∶1,n9c0.52±0.060.37±0.000.38±0.100.39±0.01C16∶1,n7c5.66±0.29a7.25±0.19b6.28±0.77ab7.12±0.13bC16∶1,n5C0.07±0.010.09±0.020.09±0.020.09±0.00C16∶020.37±0.67a20.64±0.67ab22.14±0.70b23.81±0.05c7Methyl C16∶1,n10c0.21±0.000.23±0.050.20±0.060.23±0.0315Methyl C16∶00.70±0.220.66±0.040.90±0.200.93±0.0214Methyl C16∶00.29±0.03a0.28±0.04a0.39±0.03b0.35±0.01abC18∶3,n6c0.26±0.000.49±0.140.32±0.260.33±0.08C18∶2,n6c8.03±1.187.76±0.776.75±1.817.16±0.43C18∶1,n9c18.61±1.6217.44±0.6916.02±1.5916.11±0.06C18∶1,n9t2.51±0.012.46±0.112.41±0.062.45±0.19C18∶06.78±0.116.54±0.677.77±1.907.29±0.4511methyl C18∶00.21±0.030.22±0.020.26±0.090.24±0.01C20∶4,n6c4.07±0.243.81±0.514.42±1.053.86±0.00C20∶5,n3c6.23±0.23b6.81±0.14c6.68±0.08bc5.47±0.18aC20∶3,n6c0.23±0.01ab0.23±0.03b0.21±0.02ab0.18±0.01aC20∶2,n9c0.30±0.010.34±0.050.26±0.060.26±0.02C20∶2,n6c0.42±0.60b0.38±0.03ab0.39±0.04ab0.29±0.04aC20∶1,n9c1.24±0.221.46±0.091.48±0.331.48±0.17C20∶1,n9t1.31±0.071.39±0.081.29±0.131.18±0.03C20∶1,n7c0.54±0.080.56±0.030.61±0.170.54±0.02C20∶00.30±0.030.30±0.030.33±0.020.30±0.01C22∶5,n6c0.66±0.110.66±0.040.70±0.150.63±0.02C22∶6,n3c7.31±0.877.56±0.097.20±0.126.37±0.34C22∶4,n6c0.51±0.090.44±0.020.48±0.080.43±0.01C22∶5,n3c0.78±0.040.81±0.040.69±0.080.67±0.05C22∶1,n9c0.95±0.101.32±0.181.01±0.191.01±0.16C22∶00.10±0.000.12±0.020.15±0.030.10±0.00C24∶1,n9c0.09±0.01ab0.11±0.01b0.10±0.01ab0.08±0.01aC24∶00.05±0.000.05±0.010.06±0.020.04±0.00脂肪酸总量95.41±0.5595.21±0.4094.42±1.2794.33±0.20饱和脂肪酸34.68±0.22ab32.94±1.54a36.19±1.79ab37.76±0.45b单不饱和脂肪酸31.75±1.2432.71±1.4629.91±2.3130.71±0.04多不饱和脂肪酸28.98±0.47b29.56±0.48b28.32±0.76b25.86±0.60aPUFA（n-3）14.32±1.14b15.18±0.01b14.58±0.12b12.50±0.11aPUFA（n-6）14.18±0.6913.78±0.4013.27±0.7412.88±0.44单位：%%3讨论3.1黑水虻虫粉替代饵料鱼粉对青蟹生长性能的影响在非洲鲶鱼饵料中，利用黑水虻虫粉替代75%的鱼粉不会对非洲鲶鱼的生长表现及健康状况产生负面效应[12]。脱脂黑水虻虫粉替代饵料中25%~75%的鱼粉时，不会对大口黑鲈的生长性能和饲料利用产生不利影响[13]。本研究中，采用脱脂黑水虻虫粉替代不同水平的饵料鱼粉后投喂青蟹，发现H25组和H50组青蟹的体重显著高于C组，表明脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平为25%~50%更有利于青蟹的快速生长。脱脂黑水虻虫粉中不仅富含水产养殖动物生长发育所必需的蛋白质和脂肪，也含有抗菌肽、甲壳素等免疫活性成分[14]，是优良的昆虫蛋白源。可见，脱脂黑水虻虫粉能够作为水产饲料鱼粉的潜在替代物。3.2黑水虻虫粉替代饵料鱼粉对青蟹营养品质的影响贲玲芝等[15]研究发现，黑水虻幼虫粉替代饵料鱼粉对大菱鲆鱼体的粗蛋白、粗灰分含量均无显著影响。崔锡帅等[16]报道饲料中添加不同水平的黑水虻幼虫粉并未对暗纹东方鲀鱼体的粗蛋白、粗脂肪、粗灰分产生显著性影响，且肌肉粗蛋白、粗脂肪、水分以及肝脏脂肪也无显著性差异，与本研究结果一致，表明脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉不会对青蟹蟹体的粗蛋白、粗脂肪、灰分、磷含量产生显著影响。本试验中，C组与各试验组蟹体之间的必需氨基酸总量、呈味氨基酸和鲜味氨基酸差异均不显著，表明脱脂黑水虻替代鱼粉不会影响青蟹蟹体的营养价值和鲜美度，与在暗纹东方鲀[16]、黄颡鱼[17]等的研究结果一致。多不饱和脂肪酸是磷脂重要组成部分，可以增强细胞膜脂膜上磷脂的弹性和通透性，能够直接影响生物体脑神经系统的发育，对幼体的蜕皮、生长和成活至关重要，是虾蟹类生长发育过程中所必需的脂肪酸[18-19]。青蟹没有合成长链不饱和脂肪酸的能力，因此饵料中的不饱和脂肪酸等营养成分的含量显著影响青蟹的生长性能和营养品质[20-21]。本研究中，H75组蟹体的多不饱和脂肪酸和PUFA（n-3）含量显著低于C组、H25组和H50组，表明当脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉水平超过50%时，蟹体多不饱和脂肪酸和PUFA（n-3）含量呈显著下降趋势，会对青蟹的生长和发育产生负面影响。韩星星等[5]研究发现，当脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉水平≥40%时，大黄鱼肌肉中多不饱和脂肪酸总量呈显著下降趋势，与本研究结果一致。本试验中，与C组相比，各组蟹体的脂肪酸总量差异不显著，而H75组蟹体多不饱和脂肪酸和PUFA（n-3）显著降低，表明脱脂黑水虻虫粉高比例替代饵料鱼粉会改变青蟹蟹体的脂肪酸组成结构。4结论本研究结果表明，当脱脂黑水虻虫粉替代青蟹饵料中的鱼粉不超过50%时，青蟹的生长效果较好，具有较好的营养品质。当脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉的比例超过75%时，会导致青蟹蟹体的PUFA、PUFA（n-3）含量显著降低。