我国养兔的历史悠久，目前我国兔肉产量约占世界兔肉生产的30%，但我国兔肉消费不均衡，仅四川省兔肉消费占全国的50%[1-2]。兔肉具有较高的营养价值，富含蛋白质、赖氨酸，且易于消化，还具有低脂肪、低胆固醇以及热量较低的特点[3]。苜蓿具有营养丰富、适口性好的特点，是一种优质粗饲料，被称为“牧草之王”[4]。研究表明，在日粮中适当添加苜蓿有利于提升兔肉品质及兔的生长性能[5]。廖晓鹏等[6]研究发现，使用紫花苜蓿替代20%基础日粮可以提高肉兔的体重，降低料重比，提升养殖经济效益。陈继红等[7]研究发现，在兔日粮中添加50%苜蓿草粉可以提高肉兔生长性能以及肉品质。在南方等多雨地区，苜蓿干草或苜蓿草粉的制作、使用等过程中容易受潮变质[8]。但优质的青贮苜蓿没有受潮变质的问题，在苜蓿青贮发酵的过程中还产生了大量益生菌、促生长因子等，青贮苜蓿较低的pH值环境阻止了蛋白质降解与干物质损失[9-10]。随着饲料端全面禁抗，需要寻找抗生素替代物[11]。苜蓿在青贮发酵过程中会产生大量的苜蓿黄酮等活性物质，这些活性物质在动物生产中具有一定积极作用[12]。本试验通过改变等干物质量的青贮苜蓿替代苜蓿草粉的比例，研究青贮苜蓿对肉兔生长性能、养分表观消化率、免疫器官指数、血清与肌肉的抗氧化性能的影响，为青贮苜蓿在肉兔生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计选取100只（30±2）日龄、体重相近的伊拉肉兔，随机分为5组，分别为对照组（无青贮苜蓿）、A组（8%青贮苜蓿）、B组（12%青贮苜蓿）、C组（16%青贮苜蓿）、D组（20%青贮苜蓿），每组20个重复，每个重复1只。预试期5 d，正式试验期35 d。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T001表1试验日粮组成及营养水平（风干基础）项目对照组A组B组C组D组原料组成/%玉米1010101010大豆粕2020202020次粉1010101010青贮苜蓿08121620苜蓿草粉282016128大豆皮2626262626膨润土11111食用油11111预混料44444合计100100100100100营养水平消化能/(MJ/kg)11.0210.9610.9010.8510.80粗蛋白/%19.3019.3819.4619.5419.70粗脂肪/%1.861.931.961.992.02粗纤维/%19.5119.0818.8218.5618.33中性洗涤纤维/%34.6933.9733.6133.2532.89酸性洗涤纤维/%24.7223.9323.5523.1622.70钙/%0.980.970.960.950.93磷/%0.430.420.410.400.39注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 6 000 IU、VD3 400 IU、VE 15 IU、VK 1 mg、VB1 0.8 mg、VB2 3 mg、VB6 0.5 mg、叶酸0.1 mg、盐酸35 mg、Cu 6 mg、泛酸8 mg、Fe 30 mg、Zn 35 mg、Mn 8 mg、I 0.4 mg、Se 0.15 mg。2.营养水平均为实测值。试验所用青贮苜蓿与苜蓿草粉均由沧州威县艾禾有限公司苜蓿种植地2021年初花期第一茬苜蓿制作，其余试验所用原料均由沧州中特牧业提供。青贮苜蓿与苜蓿草粉的营养成分见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T002表2青贮苜蓿与苜蓿草粉的营养成分（风干基础）项目粗蛋白粗脂肪粗纤维中性洗涤纤维酸性洗涤纤维钙磷青贮苜蓿19.964.0621.1545.2130.671.950.46苜蓿草粉18.952.3226.5349.6336.652.560.74注：营养水平均为实测值。%1.2饲养管理试验前使用火焰以及消毒液对兔笼进行灭菌消毒，兔笼为三层楼梯式，在每只兔笼上标号并对每只伊拉肉兔进行单独饲养，保证伊拉肉兔的生活环境的通风与光照。饲养期间将兔舍温度控制在约为23 ℃，相对湿度控制约为55%，保证肉兔自由采食与饮水，每日8：00与18：00定时饲喂，定期打扫兔舍，保证卫生。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能正式试验开始前与结束后，记录肉兔在的空腹体重，即初重（IB）、末重（WB），计算肉兔的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）及料重比（F/G）。ADG=(WB-IB)/试验天数(1)ADFI=正式试验期间总采食量/正式试验天数(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.3.2养分表观消化率根据每组试验兔体重与身体状况，随机选出6只肉兔，共30只，放入消化代谢笼中进行全收粪消化代谢试验，试验兔每日按时饲喂两次，保证自由饮水与采食。每日9：00准时收集全部新鲜的粪便，称重，将粪平均分为两份，一份加入10%的盐酸溶液定氮，用于测定粗蛋白，另一份直接密封用于测定其他成分。将每日收集的粪便编号并放入-20 ℃的环境中保存，试验共7 d。将同一只肉兔的粪便混匀，并烘干48 h，粉碎，过筛，测定肉兔粪便中各种营养物质的含量。养分表观消化率=(饲料中的养分含量-粪中的养分含量)/饲料中的养分含量×100%(4)1.3.3免疫器官指数各组试验兔全部屠宰，取出肉兔的肝脏、心、肾脏等，去除结缔组织，称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=器官重量/动物体重(5)1.3.4抗氧化指标正式试验结束后，所有试验兔禁食12 h，每只兔抽全血5 mL，采血管呈45°静置，析出血清后，4 000 r/min离心10 min，分装上清液并在-80 ℃的环境中保存使用酶联免疫试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清和肌肉中丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）及总抗氧化能力（T-AOC）。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2016进行整理，SPSS 20.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值和总标准误（SEM）”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1不同比例的青贮苜蓿对肉兔生长性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，B组、C组与D组肉兔的WB与ADG均显著升高（P0.05），B组、C组肉兔的F/G显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T003表3不同比例的青贮苜蓿对肉兔生长性能的影响项目IB/(g/只)WB/(g/只)ADFI/[g/(只·d)]ADG/[g/(只·d)]F/G对照组969.852 109.65b103.8632.56c3.19aA组962.242 131.56b106.5233.41bc3.19aB组952.252 211.52a106.5635.98a2.96bC组960.242 215.56a106.9135.87ab2.98bD组971.722 213.48a107.6335.48ab3.04abSEM3.6015.110.660.470.05P值0.4840.0190.8710.0290.043注：同列肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同比例的青贮苜蓿对肉兔养分表观消化率的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，各试验组肉兔粗脂肪、酸性洗涤纤维表观消化率显著提高（P0.05），B组、C组肉兔的粗纤维、中性洗涤纤维表观消化率显著升高（P0.05），B组、D组肉兔的粗蛋白表观消化率显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T004表4不同比例的青贮苜蓿对肉兔养分表观消化率的影响项目干物质能量粗蛋白粗纤维粗脂肪中性洗涤纤维酸性洗涤纤维钙磷对照组63.4662.3358.18b43.39b65.17b38.80b28.95b58.3539.81A组65.0162.7063.72ab47.92ab69.94a42.31ab33.76a60.1240.39B组65.2263.5264.80a48.53a73.13a44.70a34.20a61.3940.22C组65.7064.1662.26b49.82a71.23a43.02a33.45a59.6742.49D组64.3663.9164.43a47.52ab70.70a42.29ab33.79a58.2241.72SEM0.580.580.390.490.850.530.260.620.77P值0.7720.8610.0420.0330.0410.0280.0220.5450.833%2.3不同比例的青贮苜蓿对肉兔免疫器官指数的影响（见表5）由表5可知，各组肉兔的免疫器官指数差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T005表5不同比例的青贮苜蓿对肉兔免疫器官指数的影响项目心脏指数肝脏指数脾脏指数胸腺指数圆小囊指数肾脏指数对照组3.1929.930.582.171.257.63A组3.3333.600.712.361.317.26B组3.6933.280.682.411.487.46C组3.3635.850.652.821.147.04D组3.0929.600.572.001.268.10SEM0.561.020.040.100.060.14P值0.7940.2560.7830.0790.5450.134g/kg2.4不同比例的青贮苜蓿对肉兔抗氧化指标的影响2.4.1不同比例的青贮苜蓿对肉兔血清抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，B组、C组与D组肉兔血清中MDA含量显著降低（P0.05），B组、C组肉兔血清SOD、GSH-Px活性显著提高（P0.05），A组、B组肉兔血清T-AOC显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T006表6不同比例的青贮苜蓿对肉兔血清抗氧化指标的影响项目MDA/(μmol/L)SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)T-AOC/(U/mL)对照组8.30a227.14b297.24b4.99bA组7.58ab263.51ab385.43ab7.25aB组6.87b295.95a422.24a7.48aC组6.78b266.20a459.80a5.64abD组7.13b262.63ab380.56ab6.40abSEM0.206.9618.870.31P值0.0300.0200.0340.0432.4.2不同比例的青贮苜蓿对肉兔肌肉抗氧化指标的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，B组、C组与D组肉兔肌肉中MDA含量显著降低（P0.05），B组肉兔肌肉的SOD活性显著提高（P0.05），B组、C组与D组肉兔肌肉GSH-Px活性显著提高（P0.05），B组、D组肉兔肌肉T-AOC显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.012.T007表7不同比例的青贮苜蓿对肉兔肌肉抗氧化指标的影响项目MDA/(mmol/g prot)SOD/(U/mg prot)GSH-Px/(mmol/g prot)T-AOC/(U/mg prot)对照组7.09a194.45b312.35c5.42bA组6.39ab253.42b342.82bc5.82abB组5.37b319.52a435.54a7.08aC组4.70b226.48b450.05a6.04abD组5.48b231.87b414.60ab7.05aSEM0.2912.6916.440.22P值0.0340.0110.0160.0353讨论3.1不同比例的青贮苜蓿对肉兔生长性能的影响肉兔的生长性能可直观反映机体发育与营养吸收状况，通常情况下人们以平均日增重、平均日采食量以及料重比评价肉兔的生长性能。研究发现，饲料经过青贮发酵可在一定程度上提升动物的生长性能。范金星[13]与史卉玲等[14]研究发现，青贮苜蓿替代部分苜蓿干草可提高奶牛的采食量。本试验中，与对照组相比，青贮苜蓿组肉兔的末重、平均日增重均有所增加，采食量略有增加，料重比均下降。原因可能是苜蓿在青贮过程中，经过微生物发酵产生了各种酶、有机酸、益生菌与促生长因子[15-16]，进而提高了机体生长性能。3.2不同比例的青贮苜蓿对肉兔养分表观消化率的影响肉兔的小肠仅占整个胃肠道的12%，与其他物种相比较短。而肉兔的胃容量只占整个肠胃容积的15%，所以肉兔对营养物质的消化主要依赖盲肠中的微生物发酵[17]。养分表观消化率主要反映肉兔对日粮中各营养组分吸收利用的情况，且日粮中不同的营养组成对养分表观消化率也具有一定影响[18]。青贮苜蓿发酵后的酸性洗涤纤维含量降低，提高了动物消化率和营养转化率。鲁信举[19]、武治云等[20]研究发现，发酵苜蓿可提高肉羊的表观消化率。本试验中，青贮苜蓿组肉兔的粗脂肪、粗蛋白、粗纤维与中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的消化率均高于对照组，可能是因为青贮苜蓿中的结构型碳水化合物含量较低，水溶性碳水化合物含量较高，更利于幼兔肠胃的消化吸收[21]。苜蓿在青贮发酵过程中，其粗纤维被纤维分解酶分解并用于合成菌体蛋白，菌体蛋白中含有丰富的蛋氨酸和未知的生长因子，可以增强动物的消化能力[22]。3.3不同比例的青贮苜蓿对肉兔免疫器官指数的影响免疫器官指数可以反映免疫器官的健康程度，其大小是衡量器官发育与功能的重要指标，可以从侧面反映出肉兔身体发育情况，对肉兔的生长发育具有重要意义。动物的免疫器官指数在正常的范围之内，表明动物免疫器官发育正常。器官发育正常是动物可以正常进行各种生理活动的前提，并可以应对各种动物的生理变化[23-24]。心脏通过强大的心肌将血液压向动物全身，是极其重要的器官。肝脏具有解毒与消化代谢的作用，肝脏功能异常会引起肉兔中毒以及消化不良等症状，肝脏指数反映了肉兔肝脏的发育与健康，可以反映肉兔肝功状况[25]。脾脏内部存在B细胞、T细胞等免疫细胞，可以清理体内的凋零细胞，并且具有一定的造血功能，此外，脾脏还是细胞免疫与体液免疫的枢纽，是重要的免疫器官之一[26]。胸腺是肉兔重要的淋巴器官，与肉兔免疫功能紧密相关，肉兔体内的T细胞来自胸腺。T细胞的前体细胞在胸腺中分化、发育，形成具有免疫能力的成熟T细胞，在淋巴器官产生免疫作用[27]，还可以分泌胸腺激素等。圆小囊位于回肠与盲肠交界处，是抗原入侵淋巴组织时的防御屏障，也是抗原的通道，具有重要的免疫功能[28]。肾脏是肉兔的代谢排毒器官，肾脏出现问题的肉兔无法进行正常的消化代谢。在正常的范围内，免疫器官指数与免疫能力呈正相关[29]。本试验中，青贮苜蓿组肉兔胸腺指数具有增大趋势。可能是因为青贮苜蓿中的活性更高的苜蓿多糖可以增强免疫细胞补体活性[30]，对免疫器官的发育具有积极作用[31]。3.4不同比例的青贮苜蓿对肉兔抗氧化功能的影响在生理活动正常的动物体内会产生一种活性氧分子（ROS），该分子会氧化蛋白质、脂质等细胞生物分子，破坏生物分子结构，导致细胞受损或死亡[32]。而动物机体的抗氧化性是为了消除或减轻活性氧分子造成的不良影响的一种动物的自我保护机制，抗氧化酶起到了减轻细胞分子氧化受损的重要作用[33]，其活性大小与机体抗氧化能力成正比[34]。MDA具有较强的毒性，高含量MDA会损伤细胞功能，一般使用MDA检测机体组织过氧化损伤状况[35]。GSH-Px可以清除动物机体内氧自由基，降低机体内的过氧化物含量[36]。而SOD可以保护细胞膜的结构与功能不受活性氧分析破坏。T-AOC可以反映机体内各种抗氧化酶的共同作用效果，综合体现了机体抗氧化能力。本试验中，日粮中添加青贮苜蓿显著提高了肉兔血清、肌肉中的GSH-Px、SOD活性以及T-AOC，显著降低了MDA含量，表明添加一定量的青贮苜蓿可增强肉兔的抗氧化能力，保护机体组织免于过氧化。可能是因为青贮苜蓿中不但含有活性更高的苜蓿多糖，苜蓿在青贮过程中细胞壁被破坏分解，原本存在与细胞壁中的黄酮化合物等物质被释放，苜蓿多糖与黄酮化合物均具有抗氧化作用。王梦竹[37]研究发现，苜蓿黄酮可以提高绵羊血清中GSH-Px以及SOD的含量。Wang等[38]研究表明，在日粮中添加苜蓿多糖可提高蛋鸡肝细胞的抗氧化性。青贮苜蓿中的这些抗氧化性的物质增强了机体抗氧化能力[39]。4结论本试验发现，使用一定比例等干物质的苜蓿青贮替代苜蓿草粉可以显著提高肉兔的生长性能、养分表观消化率，增强机体抗氧化能力，替代比例为12%时效果较好。