在规模化养猪生产中，由于环境、生理、营养等因素影响，仔猪极易处于免疫应激状态[1]。免疫应激是导致仔猪高腹泻率及生产性能下降的主要原因。因此，如何减轻仔猪免疫应激是目前生猪养殖产业亟须解决的难题。豆蔻明是姜科山姜属植物草豆蔻的干燥近成熟种子中提取的一种黄酮类查耳酮化合物，具有良好的抗肿瘤、抗氧化、抗炎抑菌、抗病毒等药理作用，毒性低，安全性好[2-5]。研究发现，豆蔻明能够抑制细胞内活性氧（ROS）产生，发挥免疫调节作用，影响促炎细胞因子肿瘤坏死因素-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素-1β（IL-1β）等产生[6-7]。豆蔻明也可通过激活核因子E2相关因子（Nrf2）信号通路，增强超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）等抗氧化酶的活性，显著上调小鼠心肌细胞的抗氧化能力[8]。研究表明，豆蔻明通过活化芳香烃受体（AhR），激活Nrf2-醌氧化还原酶（NQO1）信号通路，抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）炎性小体激活，缓解小鼠结肠炎[9]。目前，对豆蔻明的研究主要集中在小鼠等试验模型动物或细胞方面，对仔猪免疫应激的缓解作用未见报道。本研究拟通过腹腔注射LPS建立免疫应激模型，比较不同剂量豆蔻明对免疫应激仔猪脏器指数、血清生化指标、炎性因子及抗氧化能力的影响，为豆蔻明应对仔猪免疫应激损伤提供参考。1材料与方法1.1试验材料豆蔻明（纯度≥98％）购自南京景竹生物科技有限公司；脂多糖（LPS）购自Sigma公司。1.2试验设计选取健康状况良好的21日龄“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪24头，按体重相近、公母各半原则随机分为4组，每组6个重复，每个重复1头仔猪。CON组仔猪饲喂基础日粮，LPS组仔猪腹腔注射100 μg/kg BW LPS，LCDN组仔猪腹腔注射3 mg/kg豆蔻明+注射100 μg/kg BW LPS，HCDN组仔猪腹腔注射6 mg/kg豆蔻明+注射100 μg/kg BW LPS。试验期15 d。LCDN组、HCDN组从试验第8 d开始注射豆蔻明[使用无菌生理盐水和少量二甲基亚砜（DMSO）配制]，每天注射1次，CON组和LPS组仔猪注射等量生理盐水。试验第15 d，LPS组、LCDN组、HCDN组腹腔注射100 μg/kg BW的LPS（使用无菌生理盐水配制），CON组注射等量生理盐水。6 h后，所有仔猪麻醉后屠宰采样。基础日粮参照NRC（2012）营养需要进行配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.004.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米55.70消化能/(MJ/kg)14.57豆粕18.80粗蛋白质/%20.22膨化大豆8.50钙/%0.79鱼粉5.50总磷/%0.66乳清粉4.50赖氨酸/%1.52豆油1.90蛋氨酸/%0.50蔗糖1.88苏氨酸/%0.86磷酸氢钙0.70色氨酸/%0.29石粉0.60L-赖氨酸0.33DL-蛋氨酸0.14L-苏氨酸0.05L-色氨酸0.05食盐0.35预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 9 000 IU、VD3 1 200 IU、VE 65 IU、VK3 2.5 mg、VB1 2.5 mg、VB2 6.0 mg、VB12 0.03 mg、叶酸1.5 mg、烟酸25 mg、泛酸22 mg、生物素0.2 mg、Cu 80 mg、Fe 120 mg、Mn 45 mg、Zn 120 mg、Se 0.3 mg、I 0.3 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验于中国热带农业科学院品资所畜牧研究基地进行。仔猪单栏饲养，自由采食饮水，每天饲喂两次（8：00、18：00）。每天定期清扫猪舍并消毒，所有仔猪按照猪场的正常免疫措施进行饲养。1.4测定指标及方法1.4.1样品采集试验第15 d清晨给所有仔猪注射LPS或等量生理盐水，后续屠宰、采样流程参照杨文等[10]的方法。1.4.2脏器指数脏器指数=脏器重(g)/仔猪活体重(kg) (1)1.4.3血清生化指标使用迈瑞全自动生化分析仪（BS-2000）测定血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）活性及总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、肌酐（CREA）含量。试剂盒由北京丹大生物技术有限公司提供。1.4.4血清抗氧化指标血清丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）以及总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性等指标测定严格依据试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明书方法进行。1.4.5血清炎性因子指标使用上海酶联生物科技有限公司的试剂盒测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件进行整理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1豆蔻明对断奶仔猪脏器指数的影响（见表2）由表2可知，与CON组相比，HCDN组仔猪的肾脏指数显著提高（P0.05）。与LPS组相比，LCDN组、HCDN组仔猪的肝脏指数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.004.T002表2豆蔻明对免疫应激仔猪脏器指数的影响组别心脏肝脏脾脏肺脏肾脏CON组6.53±0.2926.52±1.61b1.81±0.1411.13±0.36ab4.27±0.24bLPS组5.71±0.2231.481±2.13a2.36±0.2511.93±0.55ab5.16±0.31abLCDN组6.40±0.4624.95±0.37b2.21±0.1612.64±0.67a4.87±0.51abHCDN组5.90±0.5125.07±1.13b2.46±0.2810.36±0.77b5.89±0.39a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。g/kg2.2豆蔻明对断奶仔猪血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，与CON组相比，LPS组仔猪血清ALT、ALP活性及CREA含量显著提高（P0.05）。与LPS组相比，HCDN组仔猪血清ALT活性显著降低（P0.05），LCDN组、HCDN组仔猪血清AST、ALP活性显著降低（P0.05），LCDN组仔猪CREA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.004.T003表3豆蔻明对免疫应激仔猪血清生化指标的影响组别ALT/(U/L)AST/(U/L)AST/ALTALP/(U/L)TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)A/GCREA/(µmol/L)CON组87.67±8.80b136.17±26.87b1.60±0.28338.67±17.19bc41.22±1.0621.30±0.3719.92±1.031.08±0.0667.17±6.12cLPS组98.83±13.57a142.17±36.19ab1.36±0.15435.33±64.50a40.33±1.0622.40±0.9817.93±1.561.32±0.16100.20±8.18aLCDN组93.40±17.61ab104.20±14.32c1.21±0.20325.80±36.55bc41.62±1.9220.70±1.3220.92±1.621.02±0.1275.40±5.05cHCDN组62.67±6.45c97.67±12.49c1.57±0.14315.83±28.83bc41.15±3.4323.22±2.2117.93±1.291.29±0.0688.33±3.82ab2.3豆蔻明对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与CON组相比，LPS组中仔猪血清MDA含量显著提高（P0.05），血清T-SOD、CAT活性显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.004.T004表4豆蔻明对免疫应激仔猪血清抗氧化指标的影响组别MDA/(mmol/L)T-SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)T-AOC/(mmol/L)CON组6.58±0.42c170.85±17.51a13.57±2.14a99.22±7.221.71±0.04aLPS组12.39±3.03a146.11±8.48c5.16±0.76c103.11±3.031.52±0.06abLCDN组10.26±4.15ab160.65±12.49b7.15±1.04bc107.89±2.381.76±0.03aHCDN组6.06±0.93c164.67±12.08b10.29±1.06ab96.22±0.931.72±0.06a与LPS组相比，HCDN组仔猪血清MDA含量显著降低（P0.05），LCDN组及HCDN组仔猪血清T-SOD活性显著提高（P0.05），HCDN组仔猪血清CAT活性显著提高（P0.05）。2.4豆蔻明对断奶仔猪血清炎性细胞因子含量的影响（见表5）由表5可知，与CON组相比，LPS组仔猪血清IL-10含量显著降低（P0.05），TNF-α含量显著上升（P0.05）。与LPS组相比，HCDN组仔猪血清IL-1β含量显著降低（P0.05），LCDN组IL-6含量显著降低（P0.05），LCDN及HCDN组清IL-10含量显著上升（P0.05），HCDN组TNF-α含量显著下降（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.004.T005表5豆蔻明对免疫应激仔猪血清炎性细胞因子含量的影响组别IL-1βIL-6IL-10TNF-αCON组372.49±11.27ab587.44±22.53ab135.56±4.22b154.70±8.49bLPS组400.50±19.43a605.73±26.96a117.08±3.10c163.16±7.35aLCDN组362.34±13.14ab513.39±18.96b149.47±7.68a159.78±6.22abHCDN组343.42±18.69b531.98±29.25ab135.86±1.43b137.07±3.54cng/L3讨论当病原菌特别是革兰阴性菌侵入动物机体后，在免疫系统和酶系统的共同作用下，细菌的细胞壁结构被破坏并释放出LPS，LPS可诱导促炎细胞因子的表达和释放，进而产生炎性损伤[11]。本试验中，屠宰前6 h对断奶腹腔注射LPS建立免疫应激模型，测定仔猪脏器指数、血清生化指标、抗氧化指标及炎性细胞因子含量，结果发现，LPS组仔猪血清ALT、ALP活性以及CREA、MDA、TNF-α含量提高，IL-10含量及T-SOD、CAT活性下降，明确了腹腔注射LPS对断奶仔猪机体具有免疫损伤的作用。3.1豆蔻明对断奶仔猪脏器指数的影响脏器指数是试验动物主要的生物学特性指标之一，其在正常范围内的提高表示体内器官功能增强[12]。动物的心脏指数越高，表明心脏射血越多，心脏功能越好。肝脏是机体内重要的解毒器官，而肝脏指数过高会引起脂肪肝，危害机体健康[13]。肾脏是重要的代谢器官，肾脏指数的上升表明可能具有肾肿大，脾脏是动物体内主要的免疫器官，脾脏中包含着大量的免疫细胞，是体液免疫和细胞免疫的中枢[14]。本试验中，LPS应激后仔猪肝脏指数显著上升，3、6 mg/kg豆蔻明的处理使仔猪的肝脏指数回归至正常水平，表明豆蔻明对仔猪肝脏具有一定积极作用；添加6 mg/kg豆蔻明仔猪肾脏指数明显高于对照组，表明6 mg/kg豆蔻明可能会导致仔猪肾肿大。3.2豆蔻明对断奶仔猪血清生化指标的影响血清中的一些成分在动物生理和病理活动中发挥重要作用，可以一定程度上反映动物的健康状况。血清中TP、ALB含量能够较准确地反映动物机体蛋白质合成代谢能力和氮代谢的平衡状况。本试验中，各试验组仔猪血清TP、ALB、GLB含量差异均不显著。ALT和AST是肝功能的敏感标志物，其活性升高表明肝脏受到损伤[10]。ALP是胆汁淤积性肝病中最先升高的酶[15]。本试验中，添加豆蔻明能够缓解LPS导致仔猪血清ALT、AST、ALP活性上升，且以6 mg/kg剂量最佳。CREA含量升高表明肾功能受到损伤[16]。本试验中，添加豆蔻明的处理缓解了LPS导致仔猪血清CREA含量上升，表明豆蔻明可以促进机体代谢，排出蓄积毒素，减轻对肾脏的损伤。因此，豆蔻明腹腔注射对LPS诱导的免疫应激仔猪肝脏、肾脏功能具有一定积极作用。3.3豆蔻明对断奶仔猪血清抗氧化指标的影响哺乳仔猪在断奶后易发生氧化应激，导致机体内活性氧含量增多，从而损害机体健康[17]。MDA是自由基生成和随后氧化应激发展的重要标志物之一，机体可通过GSH-Px、CAT、T-SOD等抗氧化酶清除体内自由基，T-AOC可反映细胞外自由基的清除能力及体内抗氧化剂之间的相互协作[18]。Gao等[19]研究发现，在大鼠肾损伤模型中，豆蔻明处理降低了大鼠肾小管上皮细胞MDA的水平，提高了GSH-Px和SOD活性。Oliveira等[20]发现，二甲基豆蔻明显著提高了小鼠胃溃疡组织的SOD、GSH-Px、CAT活性。本试验发现，LPS显著降低了仔猪血清MDA含量，提高了仔猪血清T-SOD、CAT活性，而豆蔻明处理提升仔猪血清T-SOD、CAT活性及T-AOC，降低了MDA含量，且添加6 mg/kg豆蔻明对仔猪抗氧化能力的提升效果最佳。本试验表明，腹腔注射豆蔻明对免疫应激仔猪血清抗氧化能力的提升具有积极作用，且以6 mg/kg的注射剂量效果最佳。3.4豆蔻明对断奶仔猪血清炎性细胞因子含量的影响促炎细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α等）含量升高是机体炎症的表现之一，而抗炎细胞因子IL-10可以对抗免疫细胞的活化，减弱炎症反应[21]。对BV2小胶质细胞的体外试验表明，豆蔻明是一种潜在的炎症抑制剂，其对促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、PGE2、IL-1β、NO）的产生具有免疫调节作用[7]。Hou等[22]研究发现，豆蔻明治疗可减轻肠道疾病，包括复发性结肠炎和结肠炎相关的肿瘤发生，减少IL-1β、TNF-α的分泌。Wang等[23]研究发现，豆蔻明显著降低了单钠尿酸盐刺激的大鼠IL-1β分泌、caspase-1活性和COX-2产生。Voon等[24]研究表明，豆蔻明在大鼠风湿性关节炎模型中对血浆TNF-α、IL-1β、IL-6含量具有明显的抑制作用。本试验表明，与LPS组相比，仔猪腹腔注射豆蔻明可使血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低，IL-10含量上升，与上述研究结果一致，表明豆蔻明可以缓解免疫应激仔猪血清炎症水平。4结论本试验条件下，腹腔注射豆蔻明能够增强断奶仔猪抗氧化能力，缓解LPS诱导的免疫应激及炎症，且以6 mg/kg注射剂量效果较好。