益生菌可降低机体疾病的发生率、维持家禽肠道菌群健康。在肉仔鸡日粮中添加益生菌可提高肉仔鸡的饲料转化率和平均日增重[1]。研究发现，在罗斯308肉鸡日粮中添加益生菌可提高肉鸡的平均日增重，降低料重比；在肉鸡日粮中混合添加益生菌和益生元的效果优于单独使用益生菌[2]。酸化剂可以提高畜禽饲料的酸度，防止饲料发生霉变或腐败。畜禽采食含有酸化剂的饲料，使胃肠道内环境的pH值降低，而适当的酸性环境利于机体对饲料的消化吸收[3]。部分酸化剂是机体物质代谢的中间产物，如柠檬酸等。柠檬酸可直接进入三羧酸循环的代谢过程中。外源酸化剂进入畜禽机体内后可直接参与物质代谢过程，为机体胃肠道营造酸性环境，使畜禽吸收更多的营养[4]。周传凤等[5]研究发现，复合酶制剂使肉鸡的日粮养分利用率明显提高，料重比明显降低。王明海等[6]研究发现，复合酶制剂可提高试验组肉鸡的蛋白利用率，显著提高消化酶活性、血清尿素氮含量。目前，关于畜禽日粮中分别添加益生菌、酸化剂、酶制剂等单一物质的研究较多，而将益生菌、酸化剂、酶制剂联合使用的研究较少。因此，本试验探讨在肉鸡生产中联合使用益生菌、酸化剂、酶制剂的可行性。1材料与方法1.1试验材料益生菌和酸化剂均由广州广牧丰生物技术有限公司提供，活菌含量为≥5.0×109 CFU/g，主要成分包括乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌等。酸化剂主要成分包括富马酸、乳酸、柠檬酸等多种生物代谢酸，乳酸≥150 g/kg，富马酸≥350 g/kg，总酸含量≥70%。复合酶溢多酶由广东溢多利生物科技股份有限公司提供，木聚糖酶活力≥10 000 U/g，酸性蛋白酶活力≥3 000 U/g，中性蛋白酶活力≥3 000 U/g，淀粉酶活力≥500 000 U/g。1.2试验设计及饲养管理选取大骨鸡公鸡1 200只，随机分成5组，每组4个重复，每个重复60只鸡。试验期63 d。大骨鸡的基础日粮依据《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）进行配制，基础日粮组成与营养水平见表1。试验设计见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T001表1基础日粮组成及营养水平项目1~4周5~9周原料组成/%玉米58.0067.00豆粕27.0018.00膨化大豆10.0010.00石粉1.001.00预混料4.004.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)11.8712.17粗蛋白质/%21.0217.09钙/%1.020.86总磷/%0.550.48有效磷/%0.310.26赖氨酸/%1.120.82蛋氨酸+半胱氨酸/%0.830.72注：1.预混料购自正大预混料有限公司。2.营养水平均为计算值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T002表2试验设计组别处理A组（对照组）基础日粮B组基础日粮+0.3%益生菌C组基础日粮+0.3%益生菌+0.2%酸化剂D组基础日粮+0.3%益生菌+100 g/t酶制剂E组基础日粮+0.3%益生菌+0.2%酸化剂+100 g/t酶制剂试验大骨鸡在育雏舍饲养42 d，转入育成舍，育成笼为三层全阶梯式养殖模式，将5只鸡放入1个小笼饲养。采用自然光照制度，以人工光照相补充，自然通风。试验鸡自由采食和饮水，每日喂料3次，每日观察试验鸡群采食、饮水、行为、粪便状态等。其他饲养管理、卫生消毒及免疫程序按照大骨鸡生产的相关规定进行。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验28、63 d，每个重复随机选取5只大骨鸡，空腹12 h，称重，统计每个试验组大骨鸡的耗料量，计算平均日增重和料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2肉品质试验63 d，每个重复中随机选取5只大骨鸡，屠宰后测定大骨鸡的肌肉成分和肌肉品质，采用凯氏定氮法检测肌肉粗蛋白含量，采用乙醚抽提法测定肌肉粗脂肪含量，采用肌肉嫩度仪测定剪切力，采用压力法检测系水力，采用蒸煮法测定蒸煮损失，采用化学测定法检测肉色，采用酸碱度计测定pH值。1.3.3血清生化指标试验第63 d，每个重复随机选取5只大骨鸡，用于测定血清生化指标。血液3 000 r/min离心15 min，取血清分装，-20 ℃保存，采用Au2700型全自动生化分析仪（Olympus公司）测定总蛋白、白蛋白、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶，试剂盒购自上海生物技术有限公司。1.3.4抗氧化指标试验第63 d，每个重复随机选取5只大骨鸡，采血5 mL，不加抗凝剂分离血清，按照试剂盒按说明书检测血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）。试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.4数据统计与分析试验数据采用SPSS 18.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，试验1~28 d时，C组、D组、E组大骨鸡的增重显著高于对照组（P0.05），E组大骨鸡的平均日增重显著高于对照组（P0.05），C组、D组、E组大骨鸡的料重比均显著低于对照组（P0.05）；试验29~63 d，各试验组大骨鸡的增重、平均日增重均显著高于对照组（P0.05），C组、D组、E组大骨鸡的料重比均显著低于对照组（P0.05）。试验1~63 d，C组、D组、E组大骨鸡的增重和平均日增重均显著高于对照组（P0.05），各试验组大骨鸡的料重比均显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T003表3益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡生长性能的影响时间项目A组（对照组）B组C组D组E组1~28 d1日龄体重/g36.68±0.9335.78±0.8335.63±0.8135.69±0.7735.83±1.1028日龄体重/g463.68±28.11c509.03±31.83b523.91±30.87ab540.81±28.30ab560.93±29.74a增重/g427.01±27.36c473.25±31.65b488.28±30.85ab505.12±27.94ab525.10±30.17a平均日增重/[g/(只·d)]15.26±2.26b16.83±2.43ab17.46±2.32ab18.15±2.34ab18.70±2.08a平均日采食量/[g/(只·d)]32.04±4.7434.34±4.9535.08±4.6635.93±4.6436.65±4.08料重比2.10±0.05a2.04±0.05ab2.01±0.04bc1.98±0.04bc1.96±0.05c29~63 d63日龄体重/g1 778.10±26.73c1 935.23±29.22b2 060.82±28.14a2 056.73±28.79a2 099.71±31.09a增重/g1 314.32±44.63c1 426.20±52.97b1 536.91±31.91a1 515.92±43.92a1 538.79±49.41a平均日增重/g37.55±1.28c40.75±1.51b43.91±0.91a43.31±1.25a43.97±1.41a平均日采食量/[g/(只·d)]93.79±3.19c99.42±3.69b103.85±2.16ab103.08±2.99ab104.53±3.36a料重比2.50±0.06a2.44±0.04ab2.37±0.05b2.38±0.04b2.38±0.06b1~63 d增重/g1 741.32±26.70c1 899.45±29.37b2 025.19±28.14a2 021.04±29.51a2 063.88±30.04a平均日增重/g27.64±2.13b30.15±2.03ab32.13±1.81a32.08±1.89a32.76±1.82a平均日采食量/[g/(只·d)]66.34±5.10b70.55±4.76ab73.26±4.13a73.14±4.30a74.37±4.12a料重比2.40±0.04a2.34±0.03b2.28±0.03c2.28±0.02c2.27±0.04c注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡肌肉成分和肉品质的影响（见表4、表5）由表4可知，D组、E组大骨鸡的胸肌粗蛋白含量显著高于对照组（P0.05），E组大骨鸡胸肌粗灰分含量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T004表4益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡肌肉成分的影响部位项目A组（对照组）B组C组D组E组胸肌水分72.42±0.9772.24±0.7971.45±1.0271.47±0.8471.26±0.81粗脂肪2.32±0.102.24±0.122.23±0.102.24±0.092.23±0.10粗蛋白23.55±0.75c24.10±0.68c24.27±0.60bc25.33±0.74ab25.46±0.77a粗灰分1.58±0.07b1.60±0.07ab1.65±0.08ab1.68±0.07ab1.70±0.07a腿肌水分73.26±1.1572.6±1.1472.43±1.0872.4±1.0272.33±1.24粗脂肪2.31±0.142.3±0.182.29±0.152.29±0.162.28±0.15粗蛋白23.31±1.5823.75±1.7223.93±1.5525.07±1.5725.24±1.44粗灰分1.57±0.091.58±0.101.60±0.101.63±0.121.66±0.12%由表5可知，C组、D组、E组大骨鸡的胸肌剪切力显著低于对照组（P0.05），E组大骨鸡的腿肌蒸煮损失显著低于对照组（P0.05），D组、E组大骨鸡的腿肌剪切力显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T005表5益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡肉品质的影响部位项目A组（对照组）B组C组D组E组胸肌滴水损失/%3.30±0.213.25±0.223.24±0.213.23±0.193.22±0.20压力损失/%22.75±1.6222.20±1.6122.10±1.5922.06±1.7821.92±1.78蒸煮损失/%20.61±0.9519.97±0.9419.88±1.0919.60±0.9819.47±0.97剪切力/N43.50±1.06a42.71±1.19ab41.38±1.30b41.13±0.92b41.08±1.08b肉色/%70.25±4.7871.30±4.3472.32±4.2772.72±4.7074.81±3.44pH值5.48±0.105.53±0.165.58±0.145.61±0.125.61±0.10腿肌滴水损失/%3.45±0.233.36±0.253.27±0.213.24±0.213.18±0.20压力损失/%23.4±1.8922.85±1.4322.67±1.8422.32±1.6522.15±1.96蒸煮损失/%21.27±1.01a20.56±1.02ab20.21±1.02ab19.68±1.19ab19.42±1.12b剪切力/N41.54±1.16a40.57±1.30ab40.21±1.11ab39.68±1.18b39.44±0.95b肉色/%73.34±5.4775.45±5.0177.62±5.4578.79±4.2078.84±4.09pH值5.51±0.135.56±0.175.62±0.135.64±0.135.63±0.102.3益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡血清生化指标的影响（见表6）由表6可知，各试验组大骨鸡血清总胆固醇、甘油三酯含量显著低于对照组（P0.05），D组、E组总蛋白含量显著高于对照组（P0.05），E组谷丙转氨酶活性显著低于对照组（P0.05），D组、E组谷草转氨酶活性显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T006表6益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡血清生化指标的影响项目A组（对照组）B组C组D组E组总蛋白/(g/L)37.28±0.90b38.21±0.94ab38.60±1.03ab39.14±1.01a39.32±0.73a白蛋白/(g/L)7.73±0.387.85±0.347.98±0.348.06±0.348.25±0.33葡萄糖/(mmol/L)8.44±0.318.59±0.228.63±0.258.65±0.338.68±0.37总胆固醇/(mmol/L)2.84±0.07a2.62±0.05b2.57±0.07b2.59±0.09b2.59±0.09b甘油三酯/(mmol/L)0.18±0.01a0.15±0.01b0.14±0.01b0.14±0.01b0.14±0.01b谷丙转氨酶/(U/L)3.41±0.10a3.34±0.08ab3.31±0.09ab3.29±0.08ab3.28±0.08b谷草转氨酶/(U/L)232.00±6.83a228.00±8.29ab223.00±6.98abc218.00±7.16bc214.00±7.35c2.4益生菌与酸化剂和酶制剂对大骨鸡抗氧化性的影响（见表7）由表7可知，各试验组大骨鸡血清MDA含量显著低于对照组（P0.05），T-SOD活性、T-AOC显著高于对照组（P0.05）；C组、D组、E组大骨鸡血清GSH-Px活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.008.T007表7益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡抗氧化性的影响项目A组（对照组）B组C组D组E组MDA/(μmol/L)5.18±0.21a4.34±0.23b3.56±0.21c3.45±0.20cd3.22±0.19dT-SOD/(U/mL)167.65±5.90c182.37±6.15b188.28±5.76ab185.75±5.15ab193.43±5.26aGSH-Px/(U/mL)1 825.78±59.74c1 872.64±61.60bc1 912.32±57.20ab1 918.57±52.14ab1 974.36±51.74aT-AOC/(U/mL)3.87±0.13c4.35±0.13b4.68±0.13a4.74±0.09a4.82±0.09a3讨论3.1益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡生长性能的影响益生菌是由多种耐酸的有益菌组成，其快速增殖和稳定需要适当的酸性环境。在家禽日粮中添加复合酸化剂能够强化家禽消化道的酸化环境，明显降低家禽肠道pH值。家禽日粮中添加复合酶可以弥补家禽体内酶含量的不足。饲用复合酶中还含有一些家禽自身不能合成的酶类，这些外源的酶类增强了家禽的消化能力，明显提高了家禽对营养物质的利用率，使家禽的生长发育速度更加快速，家禽的生产力水平大幅度提高[7]。本试验表明，益生菌与酸化剂、酶制剂联合添加的各试验组大骨鸡的增重和平均日增重均显著高于对照组，效果优于单独使用益生菌。原因是3种添加剂共同发挥协同互补作用，日粮中添加益生菌与酸化剂、酶制剂能够为肉鸡提供一些营养物质，获得较高的消化酶活性，添加酶制剂还能够使肉鸡得到一些自身不能分泌的外源消化酶，进一步加快肉鸡的生长发育速度，利于提高肉鸡养殖的经济效益。Hao等[8]研究表明，益生菌可明显增强肉鸡的食欲，提高肉鸡的饲料利用效率。刘石等[9]研究发现，益生菌能够优化雏鸡肠道微生物区系，明显增强雏鸡对营养物质的消化能力，加快生长速度。任方奎等[10]研究酸化剂对肉鸡的影响也得到了提高生长性能的结论。3.2益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡肉品质的影响肌肉的水分、脂肪、蛋白等常规成分含量决定了肉品的风味及营养价值。曾子悠等[11]研究发现，添加酸化剂后麻黄肉鸡的肌肉生长性能明显提高，饲料中添加适量酸化剂后，可有效刺激家禽的味蕾细胞，提高采食欲。胡贵丽等[12]研究益生菌和复合酶制剂对良凤花肉鸡的影响，结果发现，各试验组良凤花肉鸡的胸肌和腿肌pH值、滴水损失均无显著差异。动物肉品质主要是依靠肉质指标评判，肌肉系水力多采用失水率、滴水损失、压力损失和蒸煮损失等指标进行评定[13]。肌肉系水力可以影响肉制品的结构组成、产量和色泽等；肌肉的嫩度由肌肉组成成分和各组分的构成比例所决定[14]。剪切力可以评定肌肉的嫩度，剪切力与嫩度呈负相关关系。本试验发现，与对照组相比，益生菌与酸化剂、酶制剂联合使用可使大骨鸡的胸肌蛋白和胸肌灰分显著升高，大骨鸡的胸肌和腿肌的剪切力降低，系水力有所增加，表明益生菌与酸化剂、酶制剂联合使用可促进蛋白代谢，并提高肌肉嫩度，通过降低滴水损失改善大骨鸡肌肉品质。李菊等[15]研究发现，肉鸡的生长性能在益生菌的作用下达到了更高的水平，且肉鸡的肌肉品质得到改善，在肌肉系水力指标方面较为明显，在肌肉的营养成分方面差异不显著，与本试验结果相似。黄冠庆等[16]研究表明，在肉鸡日粮中添加由益生菌和酸化剂组成的复合添加剂可以显著降低肉仔鸡的肌肉滴水损失。3.3益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡血清生化指标的影响血清蛋白含量可以反映肉鸡机体蛋白质代谢水平。血清总蛋白和白蛋白含量可以反映动物机体对蛋白质的消化吸收状况和机体免疫力水平，血清总蛋白和白蛋白含量升高表明动物机体代谢活动旺盛[17]。家禽血清总蛋白的主要功能是维持和调整血浆渗透压，并作为机体各类营养物质的载体，负责将营养物质送至全身[18]。总蛋白也为家禽机体提供蛋白质营养。机体蛋白质代谢旺盛时血清总蛋白含量高，能够促进家禽快速生长发育[19]。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性可反映动物肝脏功能[20]。在动物机体健康情况下，这些酶主要存在于动物的肝细胞中，若大量释放并进入血液，说明肝脏发生损伤。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性提高表明肝脏机能减弱或发生损伤[21]。刘小龙等[22]研究表明，在AA肉鸡日粮联合添加抗菌肽或合生素，血清中蛋白含量指标均显著提高。本试验表明，益生菌与酸化剂和酶制剂联合使用可使大骨鸡的血清总胆固醇、甘油三酯显著降低，总蛋白含量明显提高，谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著降低。结果表明，机体代谢旺盛，蛋白质代谢水平高，肝脏机能良好。益生菌可以降低胆固醇的作用机制可能与肠道胆盐分解有关。姜丹等[23]研究表明，复合酶显著提高了肉鸡血清中总蛋白和白蛋白的含量。罗曦等[24]研究发现，酸化剂可使肉鸡总蛋白的含量显著提高。3.4益生菌、酸化剂和酶制剂对大骨鸡抗氧化能力的影响动物为降低自由基对机体的危害，形成了完善的防御体系，这个体系给予了机体较为强大的抗氧化损伤能力[25]。若自由基数量过多，生物大分子物质会受到攻击和破坏，如蛋白质、核酸等，对机体健康不利[26]。MDA是细胞膜脂质过氧化的产物，可以判断细胞的损伤程度。SOD的主要功能是清除动物体内超氧阴离子自由基的酶类物质，是一种重要的抗氧化酶[27]。GSH-Px既参与还原性谷胱甘肽（GSH）的运输，还可以清除细胞中的过氧化氢。T-AOC可以反映机体自由基代谢的强弱程度[28]。本试验发现，在大骨鸡日粮中添加益生菌与酸化剂和酶制剂能够显著降低MDA含量，显著提高T-SOD、GSH-Px及T-AOC活性，表明大骨鸡在益生菌与酸化剂和酶制剂的共同作用下机体的抗氧化能力得到提高。刘佑明等[29]研究发现，酸化剂提高了白羽肉鸡的抗氧化能力，降低了MDA含量。周岭等[30]研究发现，酸化剂和微生态制剂能够显著降低蛋鸡MDA含量。4结论本试验结果表明，益生菌、酸化剂、酶制剂协同作用可以提高大骨鸡生长性能，改善肉品质，降低血脂，增强肝脏机能，提升抗氧化能力。