丁酸梭菌属于厌氧革兰氏阳性芽孢杆菌，可从动物肠道中获取，主要作用为利用碳水化合物发酵产生乙酸、丁酸等物质[1]。丁酸梭菌具有耐高温、强碱和强酸等优点，可作为微生态类饲料添加剂在畜禽生产中应用[2]。研究表明，丁酸梭菌可显著提高小尾寒羊平均日增重，并提高肉色和肌内不饱和脂肪酸含量[3]。在日粮中添加丁酸梭菌还可以提高肉鸽受精率和平均日增重，降低肉鸽血清中谷丙转氨酶活性[4]。丁酸梭菌可以提高凡纳滨虾增重率，调节肠道菌群[5]。宋孟泽[6]研究发现，丁酸梭菌可以提高蛋鸡的生产性能。本试验在蛋鸡日粮中添加不同水平丁酸梭菌，探讨其对蛋鸡生产性能、蛋品质、肠道菌群、血清生化指标及养殖经济效益的影响，旨在为丁酸梭菌在蛋鸡养殖中的进一步推广提供参考。1材料与方法1.1试验地点与试验材料试验于重庆永川区豪冰蛋鸡养殖场进行。丁酸梭菌微生态制剂由山东穗华生物科技有限公司生产，含量为2×109 CFU/g。1.2试验设计选取38周龄健康的海兰褐蛋鸡4 000只，随机分为4组，每组5个重复，每个重复200只蛋鸡。对照组蛋鸡饲喂基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加250、500、1 000 mg/kg丁酸梭菌微生态制剂。预试期7 d，正式试验期60 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米60.64代谢能/(MJ/kg)11.52豆粕23.65粗蛋白16.63花生粕1.72赖氨酸/%0.65棉籽粕1.32蛋氨酸/%0.36磷酸氢钙1.43钙/%3.48石粉8.55磷/%0.57DL-蛋氨酸0.23沸石粉1.11食盐0.35预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 12 500 IU、VD3 3 000 IU、VE 33 IU、VB12 3.89 mg、叶酸3.56 mg、烟酸32.04 mg、生物素1.73 mg、Cu 7.05 mg、Fe 58.26 mg、Zn 34.12 mg、Mn 55.38 mg、I 0.1 mg、Se 0.1 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理所有试验鸡使用笼养饲喂，饲养密度为2只/笼。采用自然光与人工补光结合方式为试验鸡进行光源补充，保证光照时长约为15~16 h，光照强度为20~25 Lx。空气湿度约为50%~60%，确保试验场地通风良好，温度控制在22~25 ℃范围内。试验期间试验鸡自由采食与饮水，按照养殖场规章制度对蛋鸡进行免疫、治疗等管理工作。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能试验期间，统计每组蛋鸡合格蛋与非合格蛋（破壳蛋、软壳蛋及畸形蛋等）数，产蛋数、蛋重、采食量与死淘数量，计算各组蛋鸡试验期间的合格蛋率、平均日产蛋重、平均产蛋率、料蛋比、平均日采食量及死淘率。合格蛋率=合格蛋数/总蛋数×100%(1)产蛋率=产蛋总数/(试验鸡数×试验天数)×100%(2)平均日产蛋重=总蛋重/(试验鸡数×试验天数)(3)平均日采食量=总采食量/(试验鸡数×试验天数)(4)料蛋比=总采食量/总蛋重(5)死淘率=(试验初试验鸡数-试验末试验鸡数)/试验鸡数×100%(6)1.4.2蛋品质试验最后1 d，每组各重复中挑选2枚接近该组平均蛋重的鸡蛋，进行蛋品质测定。使用ACE101-25型螺旋测微仪（东莞市快捷量具仪器有限公司）测定蛋壳厚度，HP608型蛋壳强度检测仪（济南恒品机电技术有限公司）测定蛋壳强度，MHY-N25L型蛋品质分析仪（北京美华仪科技有限公司）测定蛋壳色泽，使用电子分析天平（上海花潮实业有限公司）测定蛋白、蛋黄质量，计算哈夫单位。哈夫单位=100×log(H-1.7W0.37+7.57)(7)式中：H为浓蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。1.4.3肠道菌群试验结束后，各重复随机选择1只蛋鸡进行屠宰，获取盲肠食糜。参考陆静[7]的方法，根据活菌计数法，将食糜样品按照梯度稀释，通过对应的培养基（MRS、LB、BS、LB）分别培养乳酸菌、大肠杆菌、双歧杆菌和沙门氏菌，进行计数。1.4.4血清指标试验最后1 d，每组从各重复中随机挑选1只蛋鸡，翅静脉采血约5 mL，3 000 r/min离心10 min，获取血清，置于-20 ℃冰箱中保存，测定血清免疫和抗氧化指标，检测试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。1.4.4.1血清抗氧化指标采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清总抗氧化能力（T-AOC）及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GHS-Px）活性和丙二醛（MDA）含量，具体操作步骤参考试剂盒使用说明。1.4.4.2血清免疫指标采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。1.5经济效益指标蛋鸡饲料的采购价格为3.41元/kg，丁酸梭菌微生态制剂80元/kg，鸡蛋的销售价格为11.6元/kg，计算蛋鸡的经济效益。饲料成本=试验阶段采食量×饲料价格+丁酸梭菌微生态制剂使用量×丁酸梭菌微生态制剂价格(8)鸡蛋销售额=试验阶段总蛋重×鸡蛋销售单价(9)利润=鸡蛋销售额-饲料成本(10)1.6数据统计与分析数据采用Excel 2019软件进行初步整理，SAS 9.2软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，1 000 mg/kg组的合格蛋率显著高于对照组（P0.05），各试验组蛋鸡平均日采食量、平均日产蛋重均显著高于对照组（P0.05）；1 000 mg/kg组蛋鸡的料蛋比显著低于对照组（P0.05），各试验蛋鸡的平均产蛋率差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T002表2丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响组别合格蛋率/%平均日采食量/[g/(只·d)]平均日产蛋重/[g/(只·d)]平均产蛋率/%料蛋比死淘率/%对照组94.38±0.47b104.32±1.58b50.89±1.21c93.43±2.332.05±0.03a1.00±0.61250 mg/kg组94.65±0.39ab108.27±1.93a53.87±1.17b93.82±1.682.01±0.04ab1.20±0.57500 mg/kg组94.93±0.28ab109.72±2.07a56.27±1.46ab94.47±1.541.95±0.06ab0.90±0.541 000 mg/kg组95.30±0.32a110.35±2.23a57.18 ±1.37a94.58±1.271.93±0.04b0.90±0.42注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2丁酸梭菌对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，各试验组鸡蛋的哈夫单位显著高于对照组（P0.05）。各组蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄色泽、蛋白重量、蛋黄重量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T003表3丁酸梭菌对蛋品质的影响组别蛋壳厚度/mm蛋壳强度/(kg/m2)哈夫单位蛋黄色泽蛋白重量/g蛋黄重量/g对照组0.31±0.054.02±0.2375.32±3.91c6.16±0.3433.18±2.2315.16±0.87250 mg/kg组0.32±0.034.06±0.1980.51±2.27b6.21±0.4234.05±2.9415.43±0.99500 mg/kg组0.33±0.064.10±0.2486.83±3.15ab6.12±0.2636.86±3.2215.58±0611 000 mg/kg组0.33±0.054.11±0.1588.46±4.86a6.35±0.3037.02±4.0316.01±0.642.3丁酸梭菌对蛋鸡肠道菌群的影响（见表4）由表4可知，500 mg/kg组、1 000 mg/kg组蛋鸡肠道中乳酸菌显著高于对照组（P0.05），大肠杆菌数量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T004表4丁酸梭菌对蛋鸡肠道菌群的影响组别乳酸菌大肠杆菌双歧杆菌沙门氏菌对照组8.13±0.16c7.53±0.15a7.32±0.347.52±0.28250 mg/kg组8.33±0.27bc7.32±0.17ab7.36±0.257.47±0.19500 mg/kg组8.67±0.26ab7.24±±0.11b7.37±0.167.43±0.211 000 mg/kg组8.89±0.35a7.18±0.16b7.42±0.217.39±0.16lgCFU/g2.4丁酸梭菌对蛋鸡血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，各试验组蛋鸡血清中T-AOC以及GSH-Px、SOD活性均显著高于对照组（P0.05），MDA含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T005表5丁酸梭菌对蛋鸡血清抗氧化指标的影响组别T-AOC/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组1.54±0.27d310.86±15.33d103.43±15.35b5.03±0.51a250 mg/kg组2.27±0.33c368.07±24.62c142.66±12.17a3.18±0.69b500 mg/kg组2.93±0.20b423.85±31.94b148.28±15.09a3.26±0.38b1 000 mg/kg组3.62±0.32a536.34±38.09a153.81±20.48a3.06±0.31b2.5丁酸梭菌对蛋鸡血清免疫性能的影响（见表6）由表6可知，1 000 mg/kg组蛋鸡血清中IgG含量显著高于对照组（P0.05），各试验组蛋鸡血清中IgM含量均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T006表6丁酸梭菌对蛋鸡血清免疫性能的影响组别IgG/(g/L)IgA/(g/L)IgM/(g/L)IL-1/(ng/L)IL-6/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组2.34±0.56b0.84±0.090.92±0.13b8.95±0.8711.28±1.3619.53±1.51250 mg/kg组2.86±0.42b0.86±0.121.43±0.21a8.83±0.6711.15±1.0618.43±1.67500 mg/kg组3.31±0.60ab0.89±0.071.46±0.23a9.02±0.8410.82±1.1718.19±1.921 000 mg/kg组3.97±0.51a0.93±0.111.58±0.34a8.80±0.7310.42±1.0318.10±1.252.6丁酸梭菌对试验期间蛋鸡养殖经济效益的影响（见表7）由表7可知，250、500、1 000 mg/kg组蛋鸡的饲料成本分别比对照组高3.79%、5.18%、5.78%，鸡蛋销售额分别比对照组高5.86%、10.57%和12.36%，养殖利润分别比对照组高8.36%、17.72%、19.40%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.05.010.T007表7丁酸梭菌对蛋鸡养殖经济效益的影响组别总采食量/(kg/只)饲料成本/(元/只)丁酸梭菌用量/(g/只)丁酸梭菌使用成本/(元/只)总产蛋重/(kg/只)鸡蛋销售额/(元/只)利润/(元/只)对照组6.259 221.343 9003.053 433.770 612.426 7250 mg/kg组6.496 222.152 01.624 10.129 93.232 235.748 113.466 2500 mg/kg组6.583 222.448 73.291 60.263 33.376 237.340 814.628 71 000 mg/kg组6.621 022.577 66.621 00.529 73.430 837.944 614.837 43讨论3.1丁酸梭菌对蛋鸡生产性能的影响丁酸梭菌在家禽养殖中已经具有初步应用成果[8]。周奕含[9]在肉仔鸡日粮中分别添加500、1 000、2 000 mg/kg丁酸梭菌，饲喂21 d，发现1 000 mg/kg组、2 000 mg/kg组肉仔鸡试验末重极显著升高，平均日采食量显著下降，1 000 mg/kg组肉仔鸡平均日增重显著高于对照组。李安东等[10]分别使用100 mg/kg丁酸梭菌、100 mg/kg枯草芽孢杆菌、50 mg/kg丁酸梭菌+50 mg/kg枯草芽孢杆菌饲喂海兰褐蛋鸡，结果显示，与对照组相比，试验组蛋鸡产蛋率均显著提高，料蛋比和死淘率显著下降。刘亚男[11]在蛋鸡基础日粮中分别添加200、400 mg/kg丁酸梭菌进行蛋鸡饲喂试验，结果显示，与对照组相比，试验组蛋鸡的产蛋率、平均蛋重有提高趋势，而死淘率呈下降趋势，添加200 mg/kg丁酸梭菌蛋鸡的生产性能较好。本研究结果表明，日粮中添加丁酸梭菌可提高合格蛋比例，提升采食量和平均产蛋重，降低料蛋比。因此，丁酸梭菌可以提高蛋鸡生产性能，但由于使用的丁酸梭菌来源不同而导致在日粮中的添加量存在差异。3.2丁酸梭菌对鸡蛋品质的影响蛋壳厚度和蛋壳强度与蛋鸡体内钙代谢有关，在一定程度反映了蛋鸡生产合格蛋的能力；蛋黄色泽、哈夫单位代表鸡蛋的新鲜程度，蛋黄和蛋白重量可以反映鸡蛋的营养价值[12]。黄李蓉等[13]在产蛋后期蛋鸡基础日粮中添加1×108 CFU/kg丁酸梭菌，饲喂42 d，结果显示，丁酸梭菌对鸡蛋的蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋黄重量等蛋品质指标均无显著影响，但可以显著提高鸡蛋的哈夫单位。张茜等[14]在蛋鸡日粮中分别添加900 mg/kg丁酸梭菌、1%竹醋液、450 mg/kg丁酸梭菌+0.5%竹醋液对蛋鸡进行8周饲喂试验。结果显示，与基础日粮组相比，单独添加丁酸梭菌或使用丁酸梭菌联合竹醋液均可显著提高鸡蛋蛋壳强度与厚度，显著提高蛋黄色泽，效果以联合使用组最优。本研究认为，日粮中添加丁酸梭菌可显著提高鸡蛋哈夫单位，结论与上述研究结果类似，但由于养殖环境不同及所使用的丁酸梭菌来源不一致，因此对蛋品质指标的改善情况具有一定差异。3.3丁酸梭菌对蛋鸡肠道菌群的影响肠道菌群平衡对蛋鸡机体健康和消化系统功能均具有重要影响[15]。王成森[16]在蛋鸡日粮中分别添加1×106、5×106、10×106 CFU/g的丁酸梭菌，饲喂42 d，结果显示，与对照组相比，所有试验组蛋鸡肠道乳酸菌的数量显著上升，而大肠杆菌数量显著下降。单春乔等[17]将90只蛋鸡分为两组，分别饲喂基础日粮和含2.88×105 CFU/g丁酸梭菌的日粮。结果显示，16日龄蛋鸡肠道样本中厚壁菌门为优势菌群，而21日龄样本中微生物种类增多，其中变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门为优势菌群，并且16、21日龄蛋鸡试验组的优势菌群均高于对照组。本研究发现，丁酸梭菌可以促进蛋鸡肠道中益生菌，抑制有害菌增殖，与上述研究结果基本一致。3.4丁酸梭菌对蛋鸡血清抗氧化指标的影响血清抗氧化指标在一定程度上反映了蛋鸡体内抗氧化能力的强弱和机体健康水平。黄翠翠等[18]分别在肉鸡基础日粮中添加75 mg/kg金霉素、500 mg/kg丁酸梭菌，与对照组和金霉素组相比，丁酸梭菌组肉鸡胸肌T-AOC及GSH-Px和SOD活性显著提高，胸肌中MDA含量显著下降。孙玲玲等[19]在雏鹅基础日粮中分别添加250 mg/kg枯草芽孢杆菌、250 mg/kg丁酸梭菌、250 mg/kg枯草芽孢杆菌+250 mg/kg丁酸梭菌，与基础日粮组雏鹅相比，3个试验组雏鹅血清中T-AOC分别提高4.46%、3.39%、12.33%，SOD活性分别提高了4.94%、3.30%和7.69%，且枯草芽孢杆菌与丁酸梭菌联合使用效果更好。本研究发现，日粮中添加丁酸梭菌可以提高蛋鸡血清中T-AOC、SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，与上述研究结论基本一致。3.5丁酸梭菌对蛋鸡血清免疫指标的影响免疫球蛋白可以反映蛋鸡机体主动的免疫强弱。IL-1、IL-6及TNF-α等是重要的细胞因子，其含量可以反映机体内部炎症反应的强弱。李安东等[10]研究发现，日粮中添加丁酸梭菌可以显著提高血清中IgG、IgM和干扰素-γ的含量。赵文文[20]认为在雏鸭基础日粮中添加丁酸梭菌5×108 CFU/g，添加800 mg/kg黄芪多糖可以显著提高血清中IgM和干扰素-γ含量。刘亭婷等[21]在蛋用仔公鸡基础日粮中分别添加250、500、750、1 000 mg/kg丁酸梭菌，以基础日粮组为对照组，以基础日粮+150 mg/kg金霉素为抗生素组，饲喂42 d。结果显示，所有丁酸梭菌组鸡血清IgG含量显著高于对照组，且750、1 000 mg/kg丁酸梭菌组血清IgG含量显著高于抗生素组；750、1 000 mg/kg丁酸梭菌组鸡肠道组织IL-6基因表达量显著低于对照组，且1 000 mg/kg丁酸梭菌组TNF-α基因表达量显著低于对照组。本研究表明，日粮中添加丁酸梭菌可以提高蛋鸡血清中IgG和IgM含量。因此认为丁酸梭菌可以有效提高蛋鸡免疫性能，与本研究结果基本类似。3.6丁酸梭菌对蛋鸡养殖经济效益的影响经济效益指标是评价丁酸梭菌在蛋鸡养殖中应用可行性的核心指标。本研究发现，丁酸梭菌能够提高蛋鸡采食量，从而提高蛋鸡饲喂成本；但由于蛋鸡平均日产蛋重提升，使试验期间鸡蛋的销售额显著上升。因此，综合利润计算结果可认为，蛋鸡日粮中添加1 000 mg/kg丁酸梭菌对养殖的经济效益较好。4结论本研究认为，日粮中添加丁酸梭菌可以提高蛋鸡生产性能、蛋品质，改善肠道健康。综合经济效益分析结果，建议在蛋鸡日粮中添加1 000 mg/kg丁酸梭菌。