酿酒酵母作为一种益生菌，其细胞壁及其培养物中含有丰富的粗蛋白、甘露聚糖、β-葡聚糖、核苷酸等物质，具有提升免疫力、改善生长性能、抑制有害菌生长等多种功效。随着对酵母及其培养功能研究的不断深入，其在畜禽和水产养殖生产中已经广泛应用[1-3]。酵母对鸡生长性能和免疫性能的影响，与添加酵母活性物质的剂量、添加形式和鸡的种类、饲喂日龄、生理状态等有关[4-5]。酵母添加剂产品种类包括酵母细胞壁、酵母抽提物、酵母培养物、活性干酵母等[6]。有关酵母多糖、酵母细胞壁或酵母培养物对快大型肉鸡的生长性能和免疫性能的影响已有部分报道[7-9]，而关于酵母菌对慢速型肉鸡的生长性能及疫苗免疫抗体水平，尤其是禽流感抗体水平的影响鲜见报道。本试验研究酿酒酵母对麻黄肉鸡生长性能、免疫性能及疫苗免疫抗体水平的影响，为酿酒酵母在肉鸡生产中的合理利用提供参考。1材料与方法1.1试验材料酿酒酵母活菌数约200亿CFU/g，购自佳美生物科技有限公司。新城疫病毒（LaSota株）-禽流感病毒（H9亚型）二联灭活疫苗（批号为160022133），由普莱柯生物工程有限公司提供。新城疫抗体检测血凝抑制试验用抗原、阳性血清与阴性血清（批号为154028082），购自青岛立见生物科技有限公司。麻黄肉鸡购自广西某农牧集团。1.2试验仪器NABIGATORTM电子天平购自奥豪斯仪器（上海）有限公司，H1650高速离心机购自湖南湘仪离心机仪器有限公司，96孔血凝板购自国康宁公司。1.3试验设计与饲养管理选择1日龄健康麻黄肉鸡60只，随机分成对照组和酵母组，每组3个重复，每个重复10只。对照组肉鸡饲喂基础日粮，酵母组肉鸡饲喂基础日粮+107 CFU/g酿酒酵母。试验期84 d。基础日粮为参照NRC（1994）与《鸡饲养标准》（NY/T 33—2004）配制的玉米-豆粕型日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.007.T001表1基础日粮组成及营养水平项目0~21 d22~84 d原料组成/%玉米55.9062.00豆粕26.9023.00玉米蛋白粉5.904.60菜籽粕2.382.00大豆油4.003.80L-赖氨酸0.270.27DL-蛋氨酸0.150.13磷酸氢钙2.001.70石粉1.201.20氯化钠0.300.30预混料1.001.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.1012.50粗蛋白质/%21.0019.00赖氨酸/%1.101.00蛋氨酸/%0.500.40钙/%1.000.90总磷/%0.650.60注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 5 000 IU、VD3 1 000 IU、VE 10 mg、VK 0.5 mg、VB1 1.8mg、VB2 3.6 mg、VB6 3.5 mg、VB12 0.02 mg、泛酸钙20 mg、VB3 35 mg、生物素0.15 mg、叶酸0.55 mg、Fe 80 mg、Cu 8 mg、Mn 80 mg、Zn 60 mg、I 0.35 mg、Se 0.15 mg。2.营养水平均为计算值。肉鸡采用单层笼养方式饲养，自然通风，自由采食与饮水。分别于1日龄和21日龄颈部皮下接种新城疫病毒-禽流感病毒二联灭活疫苗0.3 mL/只。1.4测定指标及方法1.4.1肠道指数、死淘率饲喂3周后开始，定期从每组随机挑取2只肉鸡，分别称量个体活重，之后屠宰分离出整个肠道（从幽门到泄殖腔），除去肠中内容物后，称量每只肉鸡整个肠道的重量，计算肠道指数，记录各个重复死亡鸡只数，计算死淘率。肠道指数=肠道总重量/活重×100%(1)死淘率=重复组死淘鸡只数/重复组鸡总数×100%(2)1.4.2生长性能每3周称量一次肉鸡体重并记录饲料采食量，计算平均日采食量、平均日增重、料重比。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(3)平均日采食量=总采食量/试验天数(4)料重比=平均日采食量/平均日增重(5)1.4.3免疫器官指数饲养3周后，定期从每组随机挑取2只鸡，屠宰分离出脾、胸腺、法氏囊，分别称重，计算免疫器官指数。脾指数=脾重量/活重×100%(6)法氏囊指数=法氏囊重量/活重×100%(7)胸腺指数=胸腺重量/活重×100%(8)1.4.4免疫应答抗体效价21日龄免疫后14 d起，每周从各组随机采集6只鸡翅静脉血，待血液自然凝固后收集血清；于3 000 r/min离心5 min，取上清液用于新城疫抗体和禽流感抗体效价测定。采用血凝试验和血凝抑制试验（HI）测定新城疫抗体效价和禽流感H9亚型抗体效价。新城疫抗体效价测定按照国家标准《新城疫诊断技术》（GB/T 16550—2020）执行，记录测定数据，计算HI（log2）结果的平均值。禽流感H9亚型抗体效价由广西璞缔恩葳生物科技有限公司检测。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel进行记录，GraphPad Prism 6.01软件进行方差分析，进行独立样品t检验。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1酿酒酵母对麻黄肉鸡肠道指数及死淘率的影响（见表2）由表2可知，试验84 d，与对照组相比，酵母组的肠道指数显著降低（P0.05）。21日龄后，各组肉鸡均未死亡。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.007.T002表2酿酒酵母对麻黄肉鸡肠道指数及死淘率的影响项目对照组酵母组P值肠道指数21 d7.54±1.226.66±0.800.480 442 d6.44±0.556.15±1.030.760 963 d5.94±1.275.96±0.930.988 884 d4.71±0.143.67±0.15*0.017 8死淘率1~21 d7.18±0.7316.67±4.710.106 6注：与对照组相比，“*”表示差异显著（P0.05），“**”表示差异极显著（P0.01），无肩标表示差异不显著（P0.05）；下表同。%2.2酿酒酵母对麻黄肉鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，试验22~84 d内麻黄肉鸡酵母组的料重比显著低于对照组（P0.05）。试验全期，酵母组肉鸡平均日采食量、料重比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.007.T003表3酿酒酵母对黄麻肉鸡生长性能的影响项目对照组酵母组P值体重/(g/只)21 d236.50±24.75226.50±2.120.626 584 d1 060.00±14.141 054.00±5.660.633 5平均日增重/[g/(只·d)]0~21 d8.15±0.437.38±0.240.159 822~84 d13.19±0.0913.50±0.170.148 70~84 d12.56±0.0812.55±0.070.890 0平均日采食量/[g/(只·d)]0~21 d22.02±1.6019.62±0.190.168 922~84 d60.05±0.9756.99±0.670.066 30~84 d51.07±0.2948.11±0.45*0.015 7料重比0~21 d2.70±0.062.66±0.110.698 522~84 d4.55±0.044.22±0.10*0.049 40~84 d4.21±0.043.96±0.06*0.037 72.3酿酒酵母对麻黄肉鸡免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，对照组肉鸡脾脏指数在42 d龄时达到了最高值，而酵母组肉鸡的脾脏指数在63 d才达到最高值，但两组最高值一致。对照组和酵母组肉鸡法氏囊指数均在21 d达到最高值。21、42日龄的胸腺太小，很难分离，误差大，所以未计算这两个时期的胸腺指数。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.007.T004表4酿酒酵母对麻黄肉鸡免疫器官指数的影响项目对照组酵母组P值脾脏指数21 d0.22±0.030.18±0.040.411 142 d0.34±0.090.28±0.030.494 863 d0.22±0.020.34±0.040.149 784 d0.16±0.010.21±0.080.498 7法氏囊指数21 d0.32±0.040.26±0.080.384 542 d0.12±0.010.13±0.010.406 363 d0.04±0.000.06±0.020.274 284 d0.04±0.020.12±0.060.213 3胸腺指数63 d0.23±0.060.40±0.120.220 284 d0.51±0.030.54±0.180.883 4%2.4酿酒酵母对麻黄肉鸡疫苗免疫应答能力的影响（见表5）由表5可知，两组麻黄肉鸡的AI H9 Ab效价到达最高值的时间不一致，对照组麻黄肉鸡在免疫后35 d达到最高值，而酵母组在免疫后56 d才达到最高值，试验全期，酵母组的AI H9 Ab平均效价高于对照组。试验第56 d时，酵母组极显著高于对照组（P0.01）。两组的ND Ab效价均在免疫后14 d达到了较高的水平，在免疫后35 d达到最高值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.007.T005表5酿酒酵母对麻黄肉鸡体液免疫应答能力的影响项目对照组酵母组P值AI H9 Ab水平14 d7.67±1.538.33±1.530.621 321 d7.67±1.156.67±1.150.348 628 d8.67±0.587.33±1.150.148 135 d9.00±0.008.67±1.150.643 342 d8.33±0.589.00±1.000.373 949 d8.33±0.589.33±0.580.101 256 d7.67±0.5810.00±0.00**0.002 263 d8.67±0.5810.00±1.000.116 1ND Ab水平14 d9.33±0.589.00±1.000.643 321 d8.33±0.587.00±2.000.329 528 d9.33±1.158.67±1.150.518 535 d9.67±0.589.00±0.000.116 142 d8.67±0.588.00±0.000.116 149 d9.33±1.158.33±0.580.250 856 d8.33±0.588.33±1.150.999 963 d8.67±0.589.00±0.000.373 9log23讨论3.1酿酒酵母对麻黄肉鸡生长性能的影响酵母中含丰富的蛋白质和多糖类物质，能够改善肉鸡的生长性能，提高免疫能力。添加酵母或酵母培养物对鸡生长性能的影响与酵母添加量、鸡的品种、日龄等多种因素有关。胡友军等[10]研究表明，在母猪日粮中添加过多或过少的活性酵母，均不利于母猪采食，活性酵母最适添加量为0.5×107~2.0×107 CFU/g。徐杰等[11]在日粮中添加500 g/t包被活性酵母，饲喂28日龄仔猪14 d，仔猪生长性能得到改善；饲喂17 d时，测定胃肠道中活酵母菌数量，发现在仔猪胃肠道各部位中酵母活菌数量约为106~108 CFU/g。姜文等[12]研究报道，在断奶仔猪日粮中添加0.1%的活性干酵母，饲喂30 d，可明显提高仔猪日增重，降低料重比。而有关活性酵母在鸡生产中的应用报道很少。王海波等[13]研究发现，在1日龄瑶鸡饲料中分别添加0.02%、0.04%富硒酵母和0.02%枯草芽孢杆菌，饲养120 d，对提高瑶鸡的生长性能和屠宰性能均具有良好效果。谢燕妮等[14]在26周龄罗曼蛋鸡日粮中添加含1×109 CFU/g产朊假丝酵母菌的复合益生菌，改善了蛋鸡的肝功能和脂代谢，提高了抗氧化性能和生产性能。目前酿酒酵母在禽类生产中应用较多的形式有酵母提取物（主要包括酵母多糖、酵母细胞壁）和酵母培养物（主要成分为酵母代谢产物、发酵后的培养基和部分失活的酵母）[6]。已有研究发现，鸡日粮中适宜的酵母提取物或酵母培养物添加量在0.05%~0.40%之间，其中酵母培养物的添加量为0.2%~0.3%时效果较好。荣博涵[8]在日粮中添加酿酒酵母培养物，对1~21日龄AA肉鸡的平均日增重无显著影响；酿酒酵母培养物添加量为0.192%和0.384%时可显著提高22~42日龄AA肉鸡的平均日增重和新城疫弱毒疫苗免疫的抗体滴度；0.192%组显著降低了料重比，而0.024%组对平均日增重、料重比和新城疫抗体滴度均无明显影响。鄯来平等[15]研究发现，在日粮中添加0.2%~0.3%酵母多糖可以提高21~42日龄AA肉鸡的平均日增重和平均日采食量。廖灿青等[16]研究发现，在白羽肉鸡日粮中添加0.05%的酵母多糖，在提高肉鸡的生长性能和抑制大肠杆菌、沙门氏菌的效果上优于日粮中添加0.1%酵母多糖的试验组。夏超笃[17]在日粮中添加0.05%~0.15%的酵母细胞壁，发现酵母细胞壁对1~63日龄黄羽肉鸡的生长性能无显著影响。吴涛等[18]研究发现，在49周龄的芦花鸡日粮中添加0.3%的酵母培养物，75 d后，显著提高了芦花鸡的平均日增重、终末体重和平均日采食量；显著降低腹泻死亡率；对脾、法氏囊指数无明显影响。易倩等[9]在42周龄AA肉鸡和罗斯鸡产蛋后期的日粮中添加0.2%酵母培养物，可以降低肉种鸡产蛋后期的死淘率，提高平均产蛋率和平均产蛋合格率。本试验中，与对照组相比，在麻黄肉鸡日粮中添加1×107 CFU/g酿酒酵母，1~21日龄麻黄肉鸡的平均日增重未产生明显的影响，但提高了22~84日龄麻黄肉鸡的平均日增重；显著降低了试验全期麻黄肉鸡的平均日采食量；添加酵母组肉鸡料重比显著低于对照组，但对麻黄肉鸡的末重无明显影响；在麻黄肉鸡日粮中添加1×107 CFU/g酿酒酵母降低了肠道指数，84日龄时酵母组的肠道指数显著低于对照组，21日龄后酵母组与对照组死淘率无显著差异。3.2酿酒酵母对麻黄肉鸡免疫功能的影响鄯来平等[15]研究发现，添加0.2%和0.3%的酵母多糖能够促进AA肉鸡胸腺和脾脏的发育，显著提高ND Ab水平，添加0.1%酵母多糖对ND Ab水平无显著影响。荣博涵[8]在日粮中添加0.024%与0.196%的酿酒酵母培养物能够显著提高AA肉鸡胸腺指数，0.384%的添加量对胸腺无显著影响，0.192%与0.384%的添加剂量显著提高血清中ND Ab水平。管秀界等[7]研究发现，在饲料中添加0.1%~0.2%酵母细胞壁能够提高白羽肉鸡ND Ab水平，添加量为0.05%和1.00%时对ND Ab无正向作用。戴晋军等[19]在日粮中添加不同来源的酿酒酵母细胞壁（0.025%组、0.100%组），对白羽肉鸡的生长性能、免疫器官指数和ND Ab水平均无正向影响；添加量为0.030%时，可提高42日龄白羽肉鸡的平均日增重和ND Ab水平，降低肠道中大肠杆菌的数量。夏超笃[17]研究发现，与添加量为0.05%试验组相比，添加0.15%试验组的酵母细胞壁可显著提高21日龄黄羽肉鸡法氏囊指数以及63日龄黄羽肉鸡的胸腺指数。廖灿青等[16]研究发现，在日粮中添加0.05%的酵母细胞壁，能够显著提高21日龄内白羽肉鸡免疫器官指数，优于0.10%的添加量试验组；添加量为0.10%时，可显著提高21~42日龄肉鸡的免疫器官指数和42日龄ND Ab水平。因此，酵母培养物或酵母提取物对鸡免疫性能的影响，与酵母添加量、添加形式和鸡的日龄、品种有关。本试验中，在日粮中添加1×107 CFU/g酿酒酵母，可提高63日龄以上麻黄肉鸡的脾脏、法氏囊和胸腺等免疫器官指数，但对63日龄以下黄麻鸡的免疫器官指数无显著影响，对试验全期黄麻鸡的新城疫灭活疫苗免疫应答抗体水平无显著影响，与上述研究结果不一致，原因可能是鸡的品种、日龄和酵母添加量的不同有关。酿酒酵母在鸡生产中的添加量需要进一步深入探究。本试验中，在日粮中添加1×107 CFU/g酿酒酵母，从二免后42 d（63日龄）起，酵母组鸡的免疫器官指数和禽流感抗体水平高于对照组，并在二免后56 d（77日龄）平均抗体水平达到最高。因此，在日粮中添加1×107 CFU/g酿酒酵母，对麻黄肉鸡的禽流感（H9亚型）灭活疫苗免疫应答抗体水平具有正向作用，能够提高禽流感灭活疫苗免疫的抗体峰值和抗体保持时间。杨福剑等[20]研究发现，在70日龄麻鸡日粮中添加0.025%的酵母多糖，饲喂35 d，可显著提高麻鸡的平均日增重、AI Ab水平、ND Ab水平，对AI H9 Ab水平影响较大。同一活性酵母添加量对鸡的新城疫和禽流感灭活疫苗免疫应答能力的影响不一致，其作用机制需要进一步研究。研究发现，84日龄的麻黄肉鸡，与对照组相比，酵母组鸡的肠道指数显著降低，平均日增重显著增加，料重比显著降低，免疫器官指数增高，AI Ab水平增高。因此，肠道指数与麻黄肉鸡的生长性能和免疫性能之间无正相关关系，酿酒酵母对鸡生长性能和免疫性能影响的机理需进一步深入研究。4结论本研究表明，日粮中添加1×107 CFU/g 酿酒酵母可降低麻黄肉鸡的料重比，降低平均日采食量，提高育成阶段平均日增重，提高AI Ab水平，但对ND Ab水平没有正向作用。综合考虑，在麻黄肉鸡两月龄后的饲粮中添加酿酒酵母对鸡生长性能和禽流感疫苗免疫应答效果改善较理想。