仔兔的哺乳期一般为30~40 d。断奶过早或过迟，均会对仔兔健康和生长发育产生不利影响。断奶后的仔兔消化系统尚未发育完善，开食后胃肠道的负担加重，若管理不当，极易产生消化不良和生长缓慢等现象。仔兔断奶后容易出现胃酸分泌不足的现象，进入胃内的细菌不能被有效杀灭，进而破坏机体免疫系统，引起腹泻等疾病的发生，制约家兔养殖业的发展[1]。黄芪多糖（APS）作为一种低毒、高效、来源广泛的天然产品，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化以及抗寄生物等多种生物学功能[2-6]，可作为抗生素的替代品，以提高动物的生长性能和免疫性能[7]。因此，APS在畜禽养殖行业越来越受到重视。APS相关研究主要集中在猪、鸡和羊等动物中，在断奶仔兔研究和养殖应用方面鲜有报道。因此，本试验通过在断奶仔兔基础日粮中添加不同水平的APS，以探究其对断奶仔兔生长性能、营养物质表观消化率、血清生化以及免疫器官指数的影响，确定APS在断奶仔兔日粮中的最适添加水平，为APS在家兔养殖生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料黄芪多糖，纯度为45%，购自生泰尔（内蒙古）科技有限公司。1.2试验设计选择240只体重相近且健康的35日龄断奶仔兔，随机分为4组，每组6个重复，每个重复10只兔（雌雄比例相同）。对照组（Ⅰ组）仔兔饲喂基础日粮，试验Ⅱ组、试验Ⅲ组、试验Ⅳ组分别在基础日粮中添加100、200、400 mg/kg APS。基础日粮组成及营养水平见表1。试验日粮加工为颗粒料进行饲喂。预试期7 d，试验期35 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米11.0消化能/(MJ/kg)10.18豆粕18.0粗蛋白质/%17.80麦麸18.0粗纤维/%14.10大麦16.0钙/%1.41玉米皮35.0总磷/%0.90石粉1.0赖氨酸/%0.77食盐0.5蛋氨酸＋半胱氨酸/%0.69预混料0.3蛋氨酸0.1赖氨酸0.1注：1.预混料为每千克日粮提供：Fe 70 mg、Cu 20 mg、Zn 70 mg、Mn 10 mg、Co 0.15 mg、I 0.2 mg、Se 0.20 mg、VA 10 000 IU、VD 900 IU、VE 50 mg、VK 2 mg、VB1 2 mg、VB2 6 mg、泛酸50 mg、VB6 2 mg、VB12 0.02 mg、烟酸50 mg、胆碱1 000 mg、生物素0.2 mg。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验仔兔单笼饲养，每日8：00~9：00和16：00~17：00定时饲喂，自由采食和饮水。采用常规免疫程序进行接种，自然采光和通风，确保兔舍卫生，保证仔兔健康。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能于正式试验第1 d和35 d时，各组试验仔兔空腹称重；每天记录试验仔兔的饲喂量和剩料量，统计试验期初重（IBW）、末重（FBW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。ADG=(FBW-IBW)/试验天数(1)ADFI=总采食量/试验天数(2)F/G=ADFI/ADG(3)1.4.2营养物质表观消化率试验第28 d时，采用全收粪法进行消化代谢试验。连续收集5 d粪样，65 ℃风干、粉碎、过40目筛。采集日粮样品，65 ℃烘12 h、回潮24 h。日粮和粪样中的粗蛋白质（CP）含量参照GB/T 6432—2018，使用凯氏定氮仪（KDY-9820）测定；粗脂肪（EE）含量参照GB/T 6433—2006，使用脂肪测定仪（SZC-B）测定；干物质（DM）含量参照GB/T 6435—2014，采用烘干恒重法测定；有机物（OM）含量参照GB/T 6438—2007，采用灼烧法测定；中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）含量采用范式（Van Soest）方法测定；总能（GE）含量参照GB/T 6435—2006，使用氧弹式测热装置（IKAC2000 BASIC）测定。营养物质表观消化率=[(日粮中该营养物质摄入量-粪中该营养物质含量)/该营养物质摄入量]×100%(4)1.4.3血清生化指标试验第35 d，每组选择体重相近的仔兔，用于测定血清生化指标。5 mL促凝管收集血液，静置30 min析出血清后，3 000 r/min 离心10 min，取血清于1.5 mL EP管中，-20 ℃冻存，测定血清生化和免疫指标。血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、尿素氮（BUN）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）均使用中生北控生物科技有限公司试剂盒测定，采用VITAL-E全自动生化分析仪测定。免疫球蛋白（IgA、IgG）、脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量均使用江苏菲亚生物科技有限公司酶联免疫分析试剂盒测定。1.4.4免疫器官指数试验第35 d，每组选择体重相近的仔兔进行屠宰，分离胸腺、脾脏、肝脏、圆小囊和蚓突，称重并记录，计算各免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重/宰前活重(5)1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件进行整理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1APS对断奶仔兔生长性能的影响（见表2）由表2可知，对照组相比，Ⅲ组仔兔ADG显著升高、F/G显著降低（P0.05），FBW极显著升高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T002表2APS对断奶仔兔生长性能的影响组别IBW/(kg/只)FBW/(kg/只)ADFI/[g/(只·d)]ADG/[g/(只·d)]F/GⅠ组（对照组）0.65±0.161.54±0.21Bb106.79±3.5524.45±6.21b4.38±1.63bⅡ组0.66±0.661.52±0.20Bb107.21±0.6025.71±4.00b4.17±1.21bⅢ组0.67±0.151.66±0.14Aa107.29±0.5027.54±3.52a3.90±0.67aⅣ组0.65±0.171.53±0.23Bb107.10±1.2825.73±4.57b4.16±1.02b注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2APS对断奶仔兔营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，Ⅲ组仔兔DM和OM表观消化率显著高于其他组（P0.05）。Ⅳ组EE和CP消化率显著低于其他组（P0.05）。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组NDF消化率有升高趋势，但差异不显著（P0.05），Ⅳ组NDF消化率显著升高（P0.05），Ⅱ组ADF消化率显著升高（P0.05），Ⅲ组和Ⅳ组ADF消化率极显著升高（P0.01）。与对照组相比，Ⅲ组GE消化率极显著升高（P0.01），Ⅳ组GE消化率显著高于Ⅱ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T003表3APS对断奶仔兔营养物质表观消化率的影响组别DMOMEECPNDFADFGEⅠ组56.48±1.89b46.15±1.68bc99.08±0.41a71.29±1.24a50.93±0.76b31.46±1.52Bc62.75±1.45BbcⅡ组55.56±0.70b47.52±0.89b98.63±0.51a71.93±2.08a60.01±4.75ab42.58±5.86Bb61.63±2.25BcⅢ组59.00±0.61a49.59±1.36a98.82±0.33a71.92±1.58a63.02±11.16ab46.59±5.57Aa66.42±1.25AaⅣ组55.24±2.31b44.39±1.95c98.31±0.42b68.32±1.87b67.84±7.25a43.81±2.30Aa64.37±1.22ABab%2.3APS对断奶仔兔血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，Ⅲ组仔兔GLU和TP含量均显著高于其他组（P0.05），ALB含量极显著高于其他组（P0.01）。与对照组相比，Ⅱ组和Ⅲ组TG含量均极显著升高（P0.01），各试验组ALT活性均极显著降低（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T004表4APS对断奶仔兔血清生化指标的影响组别GLU/(mmol/L)TG/(mmol/L)ALB/(mmol/L)TP/(mmol/L)BUN/(mg/L)ALP/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)Ⅰ组7.01±0.72b0.70±0.10Bb45.93±0.64Bb52.69±2.46b22.68±0.81134.68±9.9653.73±1.89Aa66.70±6.66ABabⅡ组7.87±0.84b1.24±0.10Aa46.70±1.63Bb50.44±2.35b23.08±1.70136.49±3.4442.17±2.05Bb70.88±2.64AaⅢ组8.51±0.37a1.24±0.06Aa50.38±0.95Aa54.77±3.66a23.26±1.75138.19±8.9142.48±3.89Bb64.14±3.31BbcⅣ组6.52±0.05b0.68±0.03Bb44.40±2.17Bb50.58±0.03b22.29±1.18127.65±7.4942.97±0.67Bb61.27±4.84Bc2.4APS对断奶仔兔免疫器官指数的影响（见表5）由表5可知，试验Ⅱ组和Ⅲ组仔兔胸腺指数均显著高于对照组（P0.05）；与对照组相比，Ⅳ组仔兔圆小囊指数显著升高（P0.05），Ⅱ组和Ⅲ组有上升趋势，但差异不显著（P0.05）。各组仔兔脾脏指数、肝脏指数和蚓突指数差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T005表5APS对断奶仔兔免疫器官指数的影响组别胸腺指数脾脏指数肝脏指数圆小囊指数蚓突指数Ⅰ组2.30±0.78b0.77±0.0730.72±3.831.15±0.58b5.73±0.53Ⅱ组3.04±0.32a0.82±0.0929.96±1.761.16±0.36b5.55±3.38Ⅲ组3.07±0.19a0.76±0.1030.47±5.071.21±0.31ab5.36±1.23Ⅳ组2.97±0.75ab0.81±0.0930.21±2.861.37±0.27a4.96±0.39g/kg2.5APS对断奶仔兔血清免疫指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，各试验组仔兔血清IgA和IgG含量均极显著升高（P0.01），血清中LPS和TNF-α含量较对照组均有下降趋势，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.012.T006表6APS对断奶仔兔血清免疫指标的影响组别IgA/(mg/L)IgG/(mg/L)LPS/(ng/L)TNF-α/(ng/L)Ⅰ组70.67±11.95Bb1.47±0.13Bb179.67±9.14455.71±48.17Ⅱ组125.45±21.23Aa2.20±0.34Aa178.11±4.18446.85±71.08Ⅲ组120.70±20.42Aa2.19±0.26Aa170.91±7.43433.18±56.13Ⅳ组121.86±20.65Aa2.17±0.28Aa173.31±5.21440.76±40.723讨论3.1APS对断奶仔兔生长性能的影响FBW、ADG和F/G等指标是反映畜禽生长性能的重要指标。研究表明，APS在改善畜禽生长性能方面具有显著促进作用[8-10]。吴占运[11]通过对“杜×长×大”断奶仔猪的研究表明，400、600 mg/kg的APS对其ADG、FBW和F/G均有显著改善作用。张嘉琪等[12]在黄羽肉鸡基础日粮中添加1%的APS，发现FBW、ADG和相对生长率（RGR）均有升高趋势，F/G有降低趋势，但差异均不显著。张有增等[13]研究表明，APS可通过抑制细菌和病毒的入侵，降低肠炎发生率，增强肠道功能，从而提高畜禽免疫和生长性能。研究表明，APS与其他中草药或益生菌联合使用，对畜禽生长性能的提升效果优于单一添加剂[14-16]。在仔兔日粮中添加一定比例的APS，能够有效提高断奶仔兔的FBW和ADG，降低FBW，从而改善仔兔生长性能[17-18]。本试验中，APS显著提高了断奶仔兔FBW和ADG、降低了F/G，200 mg/kg APS添加量效果最好，表明适量的APS能够改善断奶仔兔的生长性能，添加量过大，APS的吸湿性大，使肠道中食物粘连而不能充分吸收，进而降低仔兔生长性能[19]。有研究表明，在日粮中添加400 mg/kg APS对仔兔生长性能的促进效果最优[20]，造成与本试验差异的原因可能是APS的来源、纯度或提取工艺不同，具体研究有待进一步深入探究。3.2APS对断奶仔兔营养物质表观消化率的影响OM、CP、EE、DM、NDF、ADF和GE是评价家畜或家禽对营养物质表观消化率的重要指标。大量研究表明，APS能够影响动物对日粮中营养物质表观消化率[21-23]。有研究表明，日粮中添加APS对断奶仔猪和产房仔猪CP和EE消化率有促进作用[24-25]。侯路钊等[26]通过对高温季节荷斯坦公牛的研究表明，8~16 g/(头·d)的APS可显著提高其DM、CP、NDF和ADF的表观消化率，APS可缓解高温对肠道造成的损伤，进而提高饲料消化率。国内关于APS在断奶仔兔营养物质表观消化率上的研究较少，杨新宇等[27]研究显示，在獭兔日粮中添加1 500 mg/kg的APS时，OM、GE、CP和CF消化率均显著提高；添加量为2 000 mg/kg时，獭兔对总OM和GE消化率的增幅降低，表明一定量的APS可提高獭兔对营养物质的表观消化率，其机制可能是APS通过提高消化道蛋白酶和脂肪酶等活性、增加肠绒毛高度和绒隐比以及改善肠道菌群结构，进而提高其对营养物质的消化率[28-29]。过量的APS会吸收肠道中的水分，导致其黏度增加，降低了与消化酶的接触面积，减慢养分的溶出速度，进而导致消化率降低[19]。本试验中，200 mg/kg的APS可显著提高35日龄断奶仔兔的营养物质表观消化率，添加过多则造成资源浪费和饲料成本增加。3.3APS对断奶仔兔血清生化指标的影响血清生化指标在动物机体生长发育和新陈代谢上具有重要的作用，可综合反映机体健康状态。GLU是动物血液中供能的重要单糖，正常范围内，机体糖代谢是否旺盛，与GLU含量呈正相关[28]。TG与动物机体内脂质代谢有关。研究表明，随着基础日粮中APS添加量的增加，竹鼠和断奶仔猪血清中GLU和TG含量呈下降趋势[29-30]。本试验中，添加200 mg/kg APS组仔兔血清GLU含量高于对照组，其他组均无显著影响，说明APS对GLU具有双向调节作用。TG含量显著高于对照组和400 mg/kg APS组，与上述研究结果不一致，可能是由于物种、日龄或日粮营养水平的差异等引起，具体原因有待进一步研究。血清中TP和ALB含量的变化可直接影响动物的营养代谢和免疫调节能力，随着其含量升高，机体对蛋白质消化吸收也升高，进而提高动物机体对饲料中营养物质的利用效率[31]。甄玉国等[32]在断奶仔猪日粮中添加APS后，仔猪血清中TP、ALB含量明显升高，且200 mg/kg的APS添加组效果最优，表明添加200 mg/kg APS能够有效促进机体对蛋白质的利用效率，与本试验中200 mg/kg的APS添加组能够显著提高ALB和TP含量的研究结果一致。APS的添加可调节氨基酸代谢，提高断奶仔兔蛋白质和氨基酸的利用率，促进了蛋白质合成与吸收，进而促进仔兔的生长发育。血清中尿素（UREA）含量的变化可反映机体蛋白质代谢水平，其含量升高表明机体对氮的利用率下降，排出量增多，蛋白质合成效率下降[33]。刘邦等[34]在海南黑山羊精料中添加APS进行30 d的饲养试验，结果表明，APS添加组血清中Urea含量与对照组无显著差异，与本试验的结果一致，表明日粮中添加APS对蛋白质的合成无抑制作用。血清中ALT和AST是动物体内2种重要的转氨酶，其活性可作为判断肝脏健康状况的重要指标[35]。肝细胞内ALT和AST在血清中的活性很低，当肝脏细胞受到损伤时，细胞内的ALT和AST被释放到血液中，从而使其在血液中的含量升高，破坏肝脏的生理功能，对肝脏造成不同程度的影响[36-37]。有研究报道，在断奶羔羊日粮中添加APS后，ALT和AST活性与对照组结果接近，对肝肾无毒负效应[38]。本试验中，与对照组相比，各试验组ALT活性均极显著降低，对ALP活性无影响，Ⅳ组AST活性显著降低，说明日粮中添加APS可抑制ALT和AST活性，不会引起肝脏损伤，且具有一定的保护作用，可在动物养殖生产中广泛应用。3.4APS对断奶仔兔免疫器官指数的影响胸腺作为Ｔ细胞分化、发育和成熟的场所，是仔兔重要的免疫器官和淋巴器官。脾脏作为机体最大的外周免疫器官，具有造血、吞噬衰老细胞和调节免疫力的功能。圆小囊作为仔兔特有的淋巴器官，在机体免疫中同样起重要作用[39]。肝脏也是免疫系统的一部分，可产生抗体，对抗抗原入侵。蚓突能够分泌淋巴细胞，在细胞和体液免疫中具有重要作用。有研究表明，APS能够显著提高藏羊脾脏指数，增加脾脏器官质量，提高免疫力[40]。赵文文[41]研究了APS对雏鸭免疫器官指数的影响，结果表明，日粮中添加800 mg/kg APS对雏鸭的脾脏指数和胸腺指数具有一定的促进作用，且与5×108 CFU/kg丁酸梭菌混合饲喂的效果更佳。张杰等[42]在淇河鲫日粮中添加APS，发现1 000 mg/kg APS能够显著提高肝脏指数，促进肝脏的发育和成熟。研究发现，在伊拉肉仔兔日粮中添加0.05%大蒜素和0.07%的APS能够显著提高圆小囊指数，改善免疫性能[43]。唐姣玉等[44]研究表明，日粮添加200 mg/kg APS能够显著提高断奶仔兔胸腺指数，极显著提高脾脏指数。本试验中，添加200 mg/kg APS显著提高了胸腺指数和圆小囊指数，并有提高脾脏指数的趋势，与上述研究结果一致。3.5APS对断奶仔兔血清免疫指标的影响IgA、IgG含量的变化能够反映机体的免疫功能。李楠等[45]研究表明，添加不同水平APS可提高獭兔血清中IgA和IgG含量，增强免疫性能，以0.15%~0.20%为最适添加量。与本试验不同比例的APS均能提高断奶仔兔血清中IgA和IgG含量的结果一致。其机制可能是由于APS中含有大量的β-葡聚糖，能够激活白细胞功能，诱导B淋巴细胞产生抗体，进而增强机体免疫力。有研究报道，APS可通过提高断奶仔猪体内淋巴细胞的转化率，增强细胞免疫功能，进而提高机体对免疫性能的调节能力，促进仔猪生长发育[46]。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁脂质双分子层的外层结构。有研究表明，LPS作为一种激活剂，诱导机体合成并释放大量炎性介质，进而对机体造成损伤[47-48]，其机制可能是因为LPS与细胞壁连接紧密，当细菌被杀死后，通过溶解和破坏细胞脱落，吸附于动物正常细胞发挥其毒性，进而引起机体炎性反应[49]。TNF-α主要由单核细胞、巨噬细胞和T细胞产生，能使机体发生抗应激反应，产生最早的多种炎性细胞因子，引发急性炎症反应[50-51]。崔玉革等[52]研究表明，APS可使仔猪血清中TNF-α的含量显著降低，说明APS能够调节断奶仔猪免疫性能，减少炎症发生率。本试验在基础日粮中添加不同比例的APS，对断奶仔兔血清中LPS和TNF-α含量有降低趋势，但效果不明显。可能是由于在搬运、采血或宰等过程中仔兔发生强烈应激反应引起的，具体原因需进一步探究。综上所述，APS对断奶仔兔血清免疫指标有积极作用，考虑经济效益，最佳添加比例应为200 mg/kg。4结论本试验研究表明，在日粮中添加适量的APS可显著改善仔兔生长性能、促进机体代谢、提高免疫功能，且APS添加量为200 mg/kg时效果最佳。