三穗鸭是贵州省的特色鸭品种，具有抗病力、抗逆性强及耐粗饲等特点，肉质极为细嫩，是我国肉蛋兼用的地方优良麻鸭品种，与北京鸭、绍兴鸭和高邮麻鸭同被誉为“中国地方四大名鸭”。菌群移植是一种直接改变受体肠道菌群的方法。禽肠道内的微生物群落结构十分复杂且数量庞大，肠道微生物作为共生菌群直接影响宿主健康，在促进宿主消化吸收、增强免疫和抵抗病原微生物入侵方面发挥着重要作用，与宿主的机体免疫力和营养代谢水平有直接关系[1]。有研究表明，猪的粪便菌群移植能够促进仔猪的生长发育[2]；将野兔的盲肠菌液移植至家兔中，能够提高家兔对纤维的消化，改变盲肠微生态环境[3]；SPF鸡粪便菌群液移植可有效地降低雏鸡肠道菌群的抗药性[4]。菌群移植对动物肠道微生物群落结构具有一定的调控作用，能够治愈一系列肠道疾病，在畜牧业健康生产中有着重要的作用。因此，本试验将三穗鸭供体粪便制作成菌群液移植到受体鸭，通过16S rRNA第三代测序技术测定三穗鸭盲肠的菌群结构[5]，探究菌群移植对三穗鸭生长性能、屠宰性能和盲肠菌群的影响，以期为菌群移植调控鸭肠道微生物与宿主的关联性提供参考。1材料与方法1.1试验材料菌群供体取自42日龄的三穗鸭粪便（不含大肠杆菌、沙门氏菌），将处理后的粪便称取15 g，转移至无菌烧杯中并添加PBS（Na2HPO4/KH2PO4）缓冲液至150 mL，搅拌均匀，2 000 r/min离心5 min，使用纱布过滤3次，得到棕色的菌群接种液。1.2试验设计选择120只1日龄健康、平均体重为58.1 g的三穗鸭（来自贵州三穗县）随机分为2组，每组6个重复，每重复10只鸭。试验前3 d，对照组鸭饲喂基础日粮，移植组鸭饲喂基础日粮，灌胃0.5 mL菌群液，试验期42 d。基础日粮及营养水平参照贵州大学杨胜林教授等制定的三穗鸭饲养日粮标准。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米63.85代谢能/(MJ/kg)11.78豆粕27.83粗蛋白质/%18.92麦麸1.50钙/%0.81菜籽饼4.00有效磷/%0.42磷酸氢钙1.50赖氨酸/%0.95石粉0.85蛋氨酸/%0.29食盐0.25预混料0.22注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 4 000 IU、维生素E 20 mg、VK3 2 mg、VB1 3.5 mg、VB12 0.01 mg、叶酸1.0 mg、铜10 mg、铁80 mg、锰60 mg、锌60 mg、碘0.4 mg、硒0.2 mg、烟酸50 mg、生物素0.1 mg、泛酸钙10 mg、吡哆醇2.5 mg。2.营养水平中粗蛋白、代谢能为实测值，其他均为计算值。试验阶段采取2层笼养，三穗鸭自由饮水，人工控制光照。鸭进舍第1 d，保持舍内37 ℃，此后每周降2~3 ℃，直至与室温一致，每日饲喂3次（8：00、12：00、18：00）。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第42 d（8：00），鸭空腹称重，计算平均日增重、平均日采食量、料重比，并统计试验阶段的成活率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总干物质采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)成活率=成活数量/总数量(4)1.3.2屠宰性能试验结束后，每组选择45只鸭通过颈静脉放血致死，根据NY/T 823—2004测定鸭的活重、屠体重、全净膛重、半净膛重、胸肌重、腿肌重、腹脂重、腿重。1.3.3样本DNA提取分别从移植组和对照组选取8只三穗鸭进行屠宰，收集盲肠中段内容物置于5 mL离心管中，将离心管中的内容物保存于液氮中，转移-80 ℃超低温冰箱保存，盲肠总基因组DNA提取采用QIAamp DNA Stool Mini Kit（IAamp 德国）分离试剂盒，称取200 mg内容物样品置于2 mL离心管中，按照试剂盒提取步骤进行操作。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel软件整理，SPSS 19.0软件进行统计分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1菌群移植对三穗鸭生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，移植组鸭成活率、平均日增重显著提高（P0.05），料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.T002表2菌群移植对三穗鸭的生长性能的影响组别成活率/%平均日均采食量/[(g/(头·d)]平均日增重/[(g/(头·d)]料重比对照组91.67±2.14b38.05±1.3024.89±0.17b1.53±0.12a移植组96.66±1.09a36.09±1.1328.32±0.14a1.27±0.17b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3、表5与此同。2.2菌群移植对三穗鸭屠宰性能的影响（见表3）由表3可知，移植组与对照组鸭的屠宰率、全净膛率、半净膛率、胸肌率等指标均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.T003表3菌群移植对三穗鸭屠宰性能的影响组别屠宰率全净膛率半净膛率胸肌率腿肌率腹脂率对照组89.59±0.07773.85±0.04879.09±0.03810.48±0.0299.67±0.0312.10±0.027移植组92.32±0.06275.32±0.01682.02±0.02112.32±0.01210.60±0.0232.61±0.016%2.3菌群移植对三穗鸭盲肠菌群门水平丰度的影响（见图1）由图1可知，移植组和对照组鸭盲肠主要的优势菌门为厚壁菌门和拟杆菌门，相对丰度均高于其他菌门。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.F001图1菌群移植对三穗鸭盲肠菌群门水平丰度的影响2.4菌群移植对三穗鸭盲肠菌群丰度的影响（见表4）由表4可知，移植组较对照组的拟杆菌门、变形菌门分别降低了8.7%（P0.05）和24.4%（P0.05）；厚壁菌门、梭杆菌门分别提高了11.2%（P0.05）和26.1%（P0.05）；放线菌门、蓝藻的丰度水平显著提高（P0.05）；脱铁杆菌门、螺旋体的丰度显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.T004表4菌群移植对三穗鸭盲肠菌群丰度的影响项目移植组对照组P值拟杆菌门46.1±15.150.50±9.740.51厚壁菌门40.2±9.9835.70±7.180.34梭杆菌门7.42±7.785.48±6.610.60变形菌门2.91±1.023.85±1.440.16放线菌门3.01±1.84a1.34±0.93b0.04脱铁杆菌门0.18±0.17b1.60+1.40a0.02螺旋体0.02±0.03b0.84±0.72a0.03互养菌门0.05±0.060.12±0.150.28浮微菌门00.15±0.220.09糖细菌门0.07±0.180.01±0.020.35蓝藻0.28±0.05a0.07±0.06b0.03注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.5菌群移植对三穗鸭盲肠菌群主成分的影响（见图2）由图2可知，第一成分和第二成分的贡献率分别是46.9%和27.65%，移植组的盲肠菌群分布较为集中，对照组盲肠菌群分布相对分散，表明菌群移植对鸭的盲肠微生物群落结构影响较小，能够调节盲肠的菌群稳态。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.F002图2移植组和对照组三穗鸭盲肠和结肠菌群主成分分析2.6菌群移植对三穗鸭盲肠菌群OTU的影响（见图3）由图3可知，移植组与对照组2个处理间共有的OTU数目为659，移植组独有的OTU数目为60，对照组独有的OTU数目为246，移植组OTU数目较对照组具有显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.F003图3移植组与对照组韦恩图2.7菌群移植对三穗鸭盲肠菌群Alpha多样性的影响（见表5）由表5可知，移植组与对照组的Chao指数、Ace指数、Shannon指数差异均不显著（P0.05），移植组组间物种丰富度较对照组分布更均匀。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.06.006.T005表5Alpha多样性指数分析组别Chao指数Ace指数Shannon指数P值0.150.130.42移植组462.94±60.76462.04±56.744.12±0.33对照组533.38±105.42536.66±106.604.26±0.243讨论3.1菌群移植对三穗鸭生长性能的影响本试验中，菌群移植能够显著提高三穗鸭的生长性能和降低料重比。可能是由于刚孵化出壳的三穗鸭肠道内几乎是无菌状态，入舍后经食用日粮、饮水及与环境中的微生物接触，肠道菌群逐渐开始定植[6]。1~14 d是肠道微生物菌群构建的关键期[7]，其肠道菌群的菌种多样性和丰度水平易受外界环境中微生物的影响。移植菌群后，鸭肠道中的微生物群快速繁殖，增加了肠道菌群的多样性和丰度，形成肠道微生态稳态保护屏障，从而完善免疫功能。杨伟平等[8]研究发现，肠道微生物对动物生理健康与肠道微生态内环境发挥着重要的作用；肠道微生物是影响动物生长发育的重要器官[9]，肠道菌群紊乱与多种宿主疾病相关[10-11]，完善肠道菌群的结构和功能可以提高宿主对营养物质的代谢和吸收[12]。鸭肠道内的菌群结构复杂且数量庞大，对宿主的健康生长和疾病防御有重要作用[13]。这是源于肠道菌群含有大量的碳水化合物消化酶和蛋白质，能够帮助宿主消化大分子蛋白质和碳水化合物，为宿主提供多种重要生理功能的短链脂肪酸，促进宿主生长发育，从而提高了生长性能。3.2菌群移植对三穗鸭屠宰性能的影响菌群移植可以改变仔猪肠道菌群组成，改善肠道形态及肠道健康状况，有效提高了仔猪的饲料利用率、平均日增重和生长性能[14-16]。不同的菌群组成会影响宿主的体重和免疫指标[17]。王姝妹等[18]研究发现，饲养方式对鸭的肠道功能和微生物群落组成具有显著的优化作用。肠球菌产生的油酸通过棕色脂肪组织活化后能够影响制宿的主体重[19]。优势微生物物种与屠宰性能的相关性分析表明，拟杆菌门与鸭胸肌率显著性相关[20]。本试验中，移植组和对照组在屠宰性能方面无显著差异，可能是由于盲肠绝对优势菌门中的厚壁菌门和拟杆菌门的丰度水平变化不显著。3.3菌群移植对三穗鸭肠道菌群的影响研究表明，菌群移植能够改变受体肠道菌群的组成结构，家禽在14日龄，受体菌群与供体菌群在菌种多样性上可达到高度相似，使受体菌群组成向供体群落结构转变[21]。此外，菌群移植能够改善肠道微生物内环境及快速恢复紊乱的肠道菌群，肠道菌群是促进动物生长发育的重要因素，受禁食、摄食周期[22]、饮食[23]、昼夜节律[24]等因素的影响而发生变化。稳定的肠道菌群是机体生命活动提供能量的重要微生态保障，能够维持机体的正常生命活动与健康。本试验中，各试验处理组间的盲肠优势菌群均为拟杆菌门和厚壁菌门，与Climent等[25]的研究结果一致，菌群移植降低了含大量病原性微生物的变形菌门丰度，改变了盲肠菌群的多样性。4结论三穗鸭饲喂基础日粮，灌喂0.5 mL菌群液能够提高三穗鸭的生长性能和屠宰性能，改变盲肠的菌群丰度。