日粮氨基酸（AA）比例是影响猪体内粗蛋白质（CP）消化率的主要因素，降低日粮CP水平并添加人工合成的AA可实现AA平衡，从而提高CP消化率[1]。日粮中AA的不平衡可能会破坏肠道形态，增加仔猪腹泻的风险[2]。脂肪酸（FA）是影响肉类风味的一种化合物，研究表明[3]，不饱和脂肪酸（UFA）对肉类的风味起重要作用，可能会影响脂质氧化过程中挥发性化合物的形成，对肉质的多汁性和风味造成影响。降低日粮CP并补充AA是养猪业降低成本和污染的有效策略[4]。低CP日粮的经济效益会因原料价格和猪生产性能不同存在差异[5]，但会使猪的氮排泄量降低，从而对环境产生有益影响[6]。青海八眉猪是青海省的地方品种，具有耐粗饲、抗逆性强、繁殖力高、肉质好等特性，是优良的育种素材，因此采用日粮营养调控提高八眉猪肉品质和养殖效益具有重要意义。目前，八眉猪日粮适宜的AA平衡模式还处于空白阶段。本试验以生长育肥八眉三元猪为研究对象，探讨低蛋白日粮不同氨基酸比例对八眉三元猪AA、FA及营养物质表观消化率的影响，以期为科学配制八眉猪日粮提供参考。1材料与方法1.1试验设计选择保育结束、体重约16 kg、遗传背景相似的健康八眉三元公猪（杜×长×八）36头，随机分为3组，每组3个重复，每个重复4头猪。参照NRC（2012）氨基酸比例、八眉猪（BMZ）肌肉氨基酸比例和NYT（2004）氨基酸比例设计了3种氨基酸比例的日粮，分别为NRC组、BMZ组、NYT组。预试期5 d，正式试验期120 d。所有试验日粮均满足生长猪的营养需求，各组日粮氨基酸比例见表1，试验日粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T001表1各组日粮氨基酸比例组别赖氨酸（Lys）蛋氨酸（Met）苏氨酸（Thr）色氨酸（Trp）NRC组47.6213.8130.478.10BMZ组51.035.6136.227.14NYT组47.8512.9230.628.61%10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T002表2试验日粮组成及营养水平项目NRC组BMZ组NYT组原料组成/%玉米53.0255.8655.00小麦麸15.0015.0014.79喷浆玉米皮9.965.405.00稻壳5.036.007.31菜籽饼5.005.001.24大豆粕2.102.6010.80玉米蛋白粉2.000.390石粉1.401.401.40预混料2.202.202.20食盐0.350.400.40植物油2.903.001.50L-赖氨酸0.651.570.26DL-蛋氨酸0.0600L-苏氨酸0.261.010.08L-色氨酸0.070.170.02合计100.00100.00100.00营养水平消化能/(MJ/kg)12.5612.5612.56粗蛋白/%14.0014.0014.00粗纤维/%6.606.596.75钙/%0.600.590.60总磷/%0.390.360.37赖氨酸/%1.122.010.90蛋氨酸/%0.320.230.24苏氨酸/%0.721.420.58色氨酸/%0.190.280.16注：1.每千克预混料为日粮提供：VA 250 kIU、VD3 68 kIU、VE 638 IU、VK3 60 mg、VB1 29 mg、VB2 154 mg、VB6 118 mg、烟酸713 mg、泛酸276 mg、Cu 2 125 mg、Fe 2 550 mg、Mn 650 mg、Zn 2 125 mg。2.营养水平均为计算值。1.2饲养管理试验猪自由采食饮水，每天饲喂3次（8：00~9：00、11：00~12：00、17：00~18：00）。消毒、卫生防疫和日常管理按照养殖场常规饲养方法进行。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验开始前和结束前对试验猪空腹称重，试验期间每天收集剩料，记录各栏采食量，计算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。ADG=(末重-初重)/试验天数(1)ADFI=(喂料总量-总剩料量)/试验天数(2)F/G=平均日采食量/平均日增重(3)1.3.2氨基酸含量称取适量背最长肌（LM）样本于2 mL EP管中，加入600 μL 10%甲酸甲醇-H2O（1∶1）溶液，加入2颗钢珠，涡旋振荡30 s，放入组织研磨器中，60 Hz研磨90 s，4 ℃、12 000 r/min离心5 min，取上清液20 μL；加入80 μL 10%甲酸甲醇-H2O（1∶1）溶液，涡旋振荡30 s，加入100 µg/L的Trp-d3内标100 μL涡旋振荡30 s，上清液过0.22 μm膜过滤，过滤液置于检测瓶中。检测条件为：ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱（2.1×100 mm，1.7 μm，美国Waters公司），进样量5 μL，柱温40 ℃，流动相A-10%甲醇水（含0.1%甲酸），B-50%甲醇水（含0.1%甲酸）。1.3.3脂肪酸含量称取适量背最长肌样本于2 mL离心管中，准确加入1 mL氯仿甲醇（2∶1）溶液，加入100 mg玻璃珠，放入高通量组织研磨仪中60 Hz振荡1 min，重复2次，室温超声30 min，4 ℃、12 000 r/min离心5 min，取全部上清液于15 mL离心管中；精确加入2 mL 1%硫酸甲醇溶液，充分混匀振荡1 min；80 ℃ 水浴锅中酯化30 min，取出，冷却，精确加入1 mL正己烷萃取，振荡混匀30 s，静置5 min，加入5 mL H2O（4 ℃）洗涤，4 ℃、3 500 r/min离心10 min；精准吸取700 μL上清液于2 mL离心管中，加入100 mg无水硫酸钠粉末除去多余水分，振荡混匀30 s，12 000 r/min离心5 min；精确吸取100 μL上清液于2 mL离心管中，加入400 μL的正己烷稀释；精确吸取300 μL稀释液于2 mL离心管中，加入15 μL 500 mg/L水杨酸甲酯作为内标，振荡混匀10 s，吸取200 μL上清液置于检测瓶中。色谱柱Thermo TG-FAME毛细管柱（50 m×0.25 mm ID×0.20 μm）；进样量1 μL，分流比8∶1。进样口温度250 ℃，离子源温度300 ℃，传输线温度280 ℃。程序升温起始温度80 ℃，保持1 min；以20 ℃/min升至160 ℃，保持1.5 min；以3 ℃/min升至196 ℃，保持8.5 min，以20 ℃/min升至250 ℃，保持3 min。载气为氦气，载气流速0.63 mL/min。1.3.4营养物质表观消化率试验期结束前7 d，将Cr2O3按照每日饲喂量的0.4%均匀混合至日粮中，从第4 d开始每天收集无尿液污染的新鲜粪样约100 g，于-20 ℃冰箱中冻存。分别将每个重复的样本进行混合，使用烘箱在65~70 ℃下制成风干样，用于分析粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、干物质（DM）含量，并计算表观消化率。营养物质表观消化率=1-(日粮Cr2O3含量/粪中Cr2O3含量)×(粪中养分含量/日粮养分含量)×100%(4)1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2016软件进行整理，SPSS 26.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮氨基酸比例对八眉三元猪生长性能的影响（见表3）由表3可知，NRC组和NYT组八眉三元猪的ADFI显著高于BMZ组（P0.05），NYT组八眉三元猪的ADG显著高于BMZ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T003表3日粮氨基酸比例对八眉三元猪生长性能的影响组别初重/(kg/头)末重/(kg/头)ADFI/[kg/(头·d)]ADG/[g/(头·d)]料重比NRC组15.89±0.2279.17±3.122.09±0.15a527.33±24.26ab3.96±0.39BMZ组16.43±0.2871.81±4.971.69±0.02b461.44±40.32b3.67±0.32NYT组16.64±1.1380.75±4.871.93±0.11a534.25±31.87a3.63±0.41注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表6与此同。2.2日粮氨基酸比例对八眉三元猪背最长肌氨基酸的影响（见表4）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T005项目NRC组BMZ组NYT组必需氨基酸（EAA）/(μg/g)529.13±14.73500.95±34.31506.30±27.91非必需氨基酸（NAA）/(μg/g)771.40±22.40741.13±44.21742.06±40.24总氨基酸（TAA）/(μg/g)1 300.52±24.871 242.09±29.571 248.37±65.54必需氨基酸/非必需氨基酸（EAA/NAA）/%68.65±2.9067.98±8.5468.25±2.15必需氨基酸/总氨基酸（EAA/TAA）/%40.69±1.0440.35±2.91b40.56±0.76注：同行数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表5与此同。由表4可知，BMZ组八眉三元猪背最长肌Lys含量显著高于NRC组和NYT组（P0.05）；NRC组猪背最长肌Val、Ile、Leu的含量显著高于BMZ组和NYT组（P0.05）。BMZ组八眉三元猪背最长肌Gly含量显著高于NRC组和NYT组（P0.05）；NRC组八眉三元猪LM中Tyr含量显著高于BMZ组（P0.05）；NRC组Hcy含量显著高于BMZ组和NYT组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T004表4日粮氨基酸比例对八眉三元猪背最长肌氨基酸的影响项目NRC组BMZ组NYT组必需氨基酸/(μg/g)赖氨酸（Lys）19.06±3.86b33.89±13.02a18.58±1.91b蛋氨酸（Met）20.85±2.6818.68±3.7723.94±7.39苏氨酸（Thr）20.80±1.8125.35±8.1618.71±2.28色氨酸（Trp）7.99±0.466.93±1.237.19±0.60缬氨酸（Val）35.57±2.56a29.02±6.74b26.74±3.38b异亮氨酸（Ile）21.97±1.73a17.23±3.10b18.18±2.84b组氨酸（His）333.50±11.61314.03±16.88328.62±11.14苯丙氨酸（Phe）31.10±2.7425.55±4.1529.16±8.72精氨酸（Arg）17.17±3.3114.76±2.4119.70±6.75亮氨酸（Leu）21.13±2.18a15.51±3.12b15.48±3.05b非必需氨基酸/(μg/g)甘氨酸（Gly）68.63±4.80b94.08±19.26a66.36±6.18b丙氨酸（Ala）137.92±14.93127.22±7.34128.15±8.21γ-氨基丁酸（GABA）0.58±0.100.63±0.150.56±0.03丝氨酸（Ser）18.85±2.1321.78±4.2916.82±5.32脯氨酸（Pro）19.89±1.1118.33±1.0018.63±2.60天冬酰胺（Asn）403.01±11.45364.71±40.23395.02±23.77鸟氨酸盐酸盐（Orn）3.12±0.654.49±0.964.01±1.05天冬氨酸（Asp）7.52±1.676.71±3.7511.51±3.32高半胱氨酸（Hcy）0.57±0.06a0.36±0.14b0.36±0.07b谷氨酰胺（Gln）67.73±9.7571.36±8.5064.56±16.55谷氨酸（Glu）12.97±2.8510.98±3.6910.49±3.17酪氨酸（Tyr）30.61±2.60a20.49±3.61b25.60±8.44ab续表4　日粮氨基酸比例对八眉三元猪背最长肌氨基酸的影响2.3日粮氨基酸比例对八眉三元猪背最长肌脂肪酸的影响（见表5）由表5可知，BMZ组猪背最长肌中C10∶0、C16∶0、C18∶0、C16∶1、C18∶1n9c、SFA、MUFA含量显著高于NRC组、NYT组（P0.05）；NRC组和NYT组猪背最长肌C12∶0含量显著高于BMZ组（P0.05）；NRC组猪背最长肌C20∶0、C18∶2n6、C18∶3n3、C22∶6n3、PUFA含量显著高于BMZ组和NYT组（P0.05）；NRC组和BMZ组猪背最长肌C20∶4n6含量高于NYT组；NRC组和BMZ组猪背最长肌UFA含量显著高于NYT组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T006表5日粮氨基酸比例对八眉三元猪背最长肌脂肪酸的影响项目NRC组BMZ组NYT组癸酸（C10∶0）15.21±2.67b21.97±5.39a14.56±1.70b月桂酸（C12∶0）11.22±1.88a5.04±0.91b10.22±1.84a棕榈酸（C16∶0）2 949.79±160.67b3 794.86±171.54a2 870.18±48.83b硬脂酸（C18∶0）1 803.54±216.14b2 639.82±389.99a1 961.28±118.02b花生酸（C20∶0）29.19±2.12a16.20±3.80b17.90±4.78b顺-9-棕榈油酸（C16∶1）264.84±22.99b340.48±21.96a272.71±7.61b油酸（C18∶1n9c）3 693.42±166.19b4 883.59±60.75a3 791.48±140.82b亚油酸（C18∶2n6）1 723.27±89.48a801.07±81.74b861.04±237.54bα-亚麻酸（C18∶3n3）59.54±5.86a26.31±6.35b31.42±9.07b花生四烯酸（C20∶4n6）121.54±3.04a115.97±7.22ab106.80±7.23bEPA（C20∶5n3）6.57±0.677.28±0.736.35±0.49DHA（C22∶6n3）5.95±0.46a3.92±1.10b4.62±0.37b饱和脂肪酸（SFA）4 808.95±239.65b6 477.89±503.00a4 874.14±149.14b单不饱和脂肪酸（MUFA）3 958.26±166.24b5 224.06±81.62a4 036.55±183.53b多不饱和脂肪酸（PUFA）1 916.86±97.49a954.55±77.71b1 010.22±247.68b不饱和脂肪酸（UFA）5 875.12±167.41a6 178.61±125.89a5 046.77±264.68bμg/g2.4日粮氨基酸比例对八眉三元猪营养物质表观消化率的影响（见表6）由表6可知，BMZ组八眉三元猪DM、CP、NDF、ADF的消化率显著高于NRC组和NYT组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2023.07.005.T007表6日粮氨基酸比例对八眉三元猪营养物质表观消化率的影响组别DMEECPNDFADFNRC组78.84±0.92c92.82±3.1181.06±0.27c63.13±3.52c59.49±2.79cBMZ组85.91±0.88a94.66±1.1986.95±0.67a71.08±1.79a67.24±3.39aNYT组83.48±1.14b92.45±3.5285.26±1.01b53.71±1.94b50.90±2.08b%3讨论3.1日粮氨基酸比例对八眉三元猪生长性能的影响日粮CP水平降低可能会导致EAA含量不足，造成猪ADFI、体重下降。研究表明，降低日粮CP水平并补充适当AA不会影响育肥猪的生长性能[7]。海南黑猪日粮CP水平由15%降至13%，生长猪的ADG和F/G显著降低；当低蛋白日粮（13% CP）补充Lys比例由0.83%提高至1.03%，海南黑猪ADG和F/G与对照组（15% CP）相比差异不显著[8]。低蛋白（LP）日粮提高Lys比例保证猪的生长性能不受影响的原因可能与营养代谢物和生长相关激素胰岛素样生长因子1（IGF-1）水平变化有关。本研究表明，在LP日粮添加Lys、Met、Thr、Trp，BMZ组八眉三元猪ADFI显著降低，但生长性能未受到影响，生产成本降低，不同AA比例的日粮对猪生长性能影响不同的原因与日粮中CP水平及AA水平的限制有关。LP日粮添加AA的种类不同，对猪生长性能影响的作用也不相同。降低生长猪日粮CP水平、添加Lys对生长猪的生长性能并无显著影响[9]。Ma等[10]研究表明，在LP日粮中添加Lys、Met、Thr不会影响生长猪ADFI和ADG，额外添加Trp、Val可有效提高猪的生长性能。Soumeh等[11]研究表明，在日粮中提供充足Trp的前提下，适当添加Val可以改善仔猪的ADFI，进而提高生长性能。Meer等[12]研究发现，日粮添加的Met、Thr、Trp比例为基础日粮的20%时，育肥猪的生长性能得到明显改善。Wellington等[13]研究表明，在日粮中添加高于基础生长需求量20%的Thr可以改善22 kg生长猪的生长性能。AA需求种类和比例的变化可能是由于猪在不同生长阶段AA消化率的差异造成。3.2日粮氨基酸比例对八眉三元猪肌肉氨基酸的影响AA是动物构成所需CP的基本单位，其水平和组成对猪肉品质和风味具有重要影响。在低蛋白日粮中降低Met和半胱氨酸（Cys）的比例可以提高野猪的抗氧化能力[14]。降低日粮CP水平会增加肌肉中的Glu水平[15]，从而改善猪肉风味。Duan等[16]研究表明，在LP日粮（17.1% CP）中添加4种EAA，并将Leu∶Ile∶Val比值维持在1∶0.25∶0.25~1∶0.75∶0.75左右，可通过激活mTORC1信号和抑制肌肉蛋白降解，增强游离AA的吸收和利用，促进断奶仔猪肌肉生长。本研究表明，八眉三元猪背最长肌His、Val、Phe、Asn、Ala、Gly含量较高，可提高猪肉风味和营养价值。Lys是动物体内的EAA和改善猪肉品质地和色泽的重要物质。Gly是多种重要代谢物的前体[17]，如谷胱甘肽、卟啉、嘌呤、血红素和肌酸，能够提高抗氧化能力。本试验中，与其他组相比，BMZ组八眉三元猪中Lys、Gly含量较高，对动物新陈代谢和营养起到重要作用。Wang等[18]研究表明，与对照组（16% CP）相比，试验组猪LP日粮蛋白水平降低为14%、12%并补充EAA时，肌肉中EAA/TAA值显著升高，分别提高了3.40%、1.62%，因此，在LP日粮中添加AA可以提高育肥猪肌肉中EAA的水平，提高猪肉营养价值，改善猪肉品质。本研究表明，八眉三元猪背最长肌的EAA/NAA均在60%以上，EAA/TAA均在40%以上，符合联合国粮农组织/世界卫生组织（FAO/WHO）的模式标准。3.3日粮氨基酸比例对八眉三元猪肌肉脂肪酸的影响FA包括SFA和UFA，其组成成分是评价猪肉营养和健康价值的主要因素。过量摄入SFA会引起动脉硬化等疾病[19]，而C18∶3n3、EPA和DHA等UFA对动物有抗癌[20]、降脂和预防心血管疾病的作用[21]。Leger等[22]研究表明，猪日粮中摄入富含（n-3）PUFA的菜籽油，并辅以天然抗氧化剂（即辅酶Q10、生育酚和酚类化合物卡诺尔），可减弱肥胖相关的心血管功能障碍。FA的变化反映了动物体内脂肪生成和食物摄入中FA吸收之间的平衡，C18∶1n9C、C16∶1、C20∶4n6通常起维持体内正常代谢的作用。本研究表明，BMZ组日粮AA比例可提高八眉三元猪背最长肌C18∶1n9c和MUFA含量，倾向于增加C16∶1和C20∶4n6含量，降低背最长肌中PUFA含量，这些变化可能与肌肉中MUFA合成的增加有关。Zhou等[23]研究表明，LP日粮（12%CP）能够降低猪C16∶0、C18∶0和C18∶2n6的含量，并提高背最长肌中的C18∶1n9c水平，肉质风味较好。Wang等[18]研究表明，补充EAA的LP日粮（14% CP）会增加猪C20∶4n6水平，降低肌肉中的亚麻酸水平，而极低蛋白（VLP）日粮（12% CP）会增加肌肉中的亚麻酸水平；猪肉中UFA含量越多，其保质期越短，更容易被脂质氧化。Guo等[24]研究表明，与对照组相比，日粮中添加Arg和Glu可使猪肌肉中SFA、MUFA、PUFA和TFA含量分别提高49.08%、68.04%、56.55%和58.24%。Liu等[25]研究表明，与对照组相比，饲喂添加Lys、Met、Thr、Trp的VLP日粮（8.02% CP）降低了猪肌肉中SFA（C18∶2n6和C18∶3n3）的含量，提高了肌肉中MUFA的含量，导致FA不饱和程度增加，猪肉脂肪熔点和硬度降低，表明VLP日粮能够改善猪背最长肌FA组成。3.4日粮氨基酸比例对八眉三元猪营养物质表观消化率的影响适宜的日粮CP水平可以提高猪的表观营养物质消化率，减少粪便中营养物质的排泄，从而进一步提高猪对养分的利用效率。He等[26]研究表明，日粮CP水平从18%降低至12%，添加Lys、Met、Thr、Trp可使育肥猪的生长性能受到抑制；而将日粮CP水平降低3%（15% CP），对育肥猪的体重未产生影响，但会导致氮排泄下降。Fang等[27]研究表明，日粮CP水平从23.7%降至19.7%，额外补充Lys、Met和Thr，猪CP消化率增加。本研究显示，与NRC组和NYT组相比，BMZ组八眉三元猪DM、CP、NDF、ADF消化率显著提高，表明八眉三元猪对饲料中营养物质吸收率高，氮排泄减少。研究表明，随着日粮CP水平的降低，猪氮吸收率、氮表观消化率和氮沉积率呈线性下降[28]，可能是由于日粮CP摄入量减少导致。因此，BMZ组LP日粮满足猪前4种限制性EAA的要求，能够在不影响动物生产的情况下提高营养物质消化率和氮排泄量。4结论本研究表明，BMZ组Lys∶Met∶Thr∶Trp比例为100∶11∶71∶14时，可以提高八眉三元猪肌肉中Lys、Gly含量、背最长肌C18∶1n9c、C16∶1含量以及DM、CP、NDF、ADF的表观消化率。