新城疫（Newcastle disease）是由新城疫病毒引起的一种侵害禽类的急性、高度接触性传染病[1-2]，特征是高热、呼吸困难、下痢以及随之出现的神经症状[3-4]。新城疫具有很高的发病率和病死率，是危害我国禽业的一种主要传染病，对养禽业造成了重大经济损失，被国际兽医局列为Ａ类疫病[5]。近年来，由于鸡新城疫疫苗不断研发应用，基本上控制了该病的大规模发生和流行。然而，因免疫程序不合理、母源抗体干扰等因素导致疫苗免疫失败的情况也时有发生[6]。因此，为更好地防控各种传染疾病，企业往往需要积累大量数据并建立自己的基线，以便合理科学判定鸡群是否存在潜在的感染风险。北京油鸡是一个我国重要的地方鸡种[7]，品质优良、抗病力强。近些年，随着北京油鸡品种资源保护和开发利用工作深入，北京油鸡的品种规模日益扩大。但截至目前尚无对北京油鸡传染性疾病免疫抗体消长规律的研究报道。考虑到基准线受品种、免疫程序、疫苗类型以及外界环境等多因素的影响，企业需要建立起自己的免疫基准线[8]。本试验旨在对北京油鸡新城疫抗体消长规律进行研究，并建立北京油鸡新城疫免疫基准线，为新城疫综合防控以及北京油鸡其他传染病的研究提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物随机挑选60只刚出壳临床健康北京油鸡，由北京某油鸡养殖场提供。随机分成3组，每组20只，饲养在同一鸡舍不同笼位中。于5、16、35日龄免疫新城疫与支气管炎二联活苗，64日龄免疫新城疫-禽流感（H9）灭活苗，116日龄免疫新城疫-支气管炎-法氏囊-产蛋下降综合征四联灭活苗，270日龄免疫新城疫-支气管炎-法氏囊-病毒性关节炎四联灭活苗。1.1.2试验试剂上述所有疫苗购自梅里亚动物保健有限公司；新城疫血凝抑制试验（HI）抗原、新城疫阳性血清由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。1.1.3试验仪器96孔一次性微量凝集反应板、微量移液器、微型振荡器、台式离心机、一次性注射器、灭菌离心管购自北京惠创科技有限公司；酶标仪购自赛默飞世尔仪器公司；高速台式离心机购自Eppeorf公司。1.1.41%鸡红细胞悬液采集3只SPF公鸡血液6 mL与等体积的PBS混合，2 000 r/min离心10 min，PBS液洗涤3次，再使用PBS液配成体积为1%的红细胞悬液300 mL，4 ℃保存。1.2试验方法1.2.1血清新城疫抗体效价检测根据鸡群集中免疫前或免疫后抗体上升阶段确定采样日龄，兼顾0日龄母源抗体水平和315日龄纯繁前抗体水平，分别在0、21、42、84、105、147、168、252、315日龄，每只鸡翅静脉无菌采血2 mL，分离血清，按《中华人民共和国兽药典》2010年版三部[9]测定HI抗体，计算每个采样时间点抗体效价的几何平均数。抗体滴度1表示1 Log2，2表示2 Log2，以此类推。1.2.2抗体合格率判定方法HI抗体达4 Log2为个体免疫抗体合格，70%比例个体抗体合格则表示群体免疫合格。1.2.3数据统计与分析试验数据采用SPSS软件进行分析，计算均值、标准差、变异系数。1.2.4免疫基准线的建立方法将相同日龄所有个体抗体滴度值由小到大排列，头尾各取15%数值的平均值作为低滴度值与高滴度值，中间70%数据值的平均值作为中滴度值，通过计算将得到的高滴度、中滴度、低滴度值汇总，得到鸡新城疫抗体基准线。2结果与分析2.1不同日龄新城疫抗体合格率变化（见表1）由表1可知，3组在0日龄时抗体合格率均达到了100.0%；21日龄时3组抗体合格率均明显下降，平均为48.3%；42日龄~315日龄，抗体合格率上升明显，3组抗体合格率均达到100.0%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.04.002.T001表1不同日龄新城疫抗体合格率变化Tab.1Changes in qualified rate of Newcastle disease antibody at different ages日龄/d组别鸡数/只抗体合格率/%抗体平均效价/Log2变异系数/%0120100.08.96.8220100.08.88.7320100.09.07.2合计/平均值60100.08.97.52112055.03.835.022045.03.634.032045.03.536.0合计/平均值6048.33.635.242120100.07.414.1220100.06.323.6320100.06.711.6合计/平均值60100.06.816.584120100.09.915.6220100.010.014.4320100.09.313.1合计/平均值60100.09.714.4105120100.010.27.5220100.010.46.6320100.010.18.2合计/平均值60100.010.27.5147120100.010.47.2220100.010.013.2360100.010.08.3合计/平均值60100.010.19.6168120100.09.912.0220100.09.57.4320100.09.58.7合计/平均值60100.09.69.4252120100.08.816.7220100.08.021.3320100.07.920.1合计/平均值60100.08.219.4315120100.09.613.7220100.09.712.9320100.09.412.1合计/平均值60100.09.612.63组鸡在不同日龄新城疫抗体滴度和变异情况均存在一定差异。0日龄时，鸡受母源抗体的影响，新城疫的抗体效价约为8.8~9.0 Log2，平均8.9 Log2，变异系数6.8%~8.7%。21日龄时，3组抗体下降明显，抗体效价为3.5~3.8 Log2，平均为3.6 Log2，变异系数明显增大，为34.0%~36.0%。42日龄时抗体效价明显上升平均达到6.8 Log2，变异系数为16.5%。84日龄时3组的抗体提升速度较快，达到9.7 Log2，变异系数为14.4%。105日龄抗体效价持续升高，达到峰值10.2 Log2，变异程度变小。随后，147~315日龄鸡群抗体维持在较高水平，均在8.0 Log2以上。从变异程度看，随着日龄增加，新城疫抗体均匀度呈先降低再增加，之后又降低的趋势。由高到低依次为105日龄、147日龄、168日龄、0日龄、315日龄、42日龄、84日龄、252日龄，最低为21日龄。2.2新城疫抗体基准线建立对3组北京油鸡各阶段抗体水平进行比较分析，发现各组新城疫抗体各阶段变化规律相似。进一步根据各阶段抗体滴度监测数据，根据基准线的建立方法对各阶段数据进行处理，即得到鸡新城疫抗体基准线，见图1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2023.04.002.F001图1新城疫抗体基准线Fig.1Newcastle disease antibody baseline3讨论有研究指出，通过建立免疫抗体基准线能够更好地监测疫情，及时采取防控措施[10]。本研究首次对北京油鸡新城疫抗体消长规律进行了研究，并初步建立了抗体基准线，为后续的疫病预警及免疫计划的调整奠定了基础。本研究结果显示，0日龄雏鸡受母源抗体影响，3个组的雏鸡群抗体效价均较高，新城疫抗体平均效价为8.9 Log2，抗体合格率达到100.0%，处于有较强免疫保护的抗体水平，可对新城疫产生免疫力。21日龄时各组鸡新城疫抗体效价快速下降，抗体合格率仅为48.3%，母源抗体下降明显，平均滴度为3.6 Log2，与谢梅等[11]、曹立辉等[12]研究结果类似。结果表明，从免疫效果看，应在21日龄前进行免疫，但实际上在5、16日龄已经进行了两次免疫，从抗体效价上来看，一免效果并不明显，二免抗体尚未产生，此时存在感染风险[13]。推测原因可能由于母源抗体水平过高会对后天免疫产生干扰，导致免疫器官发育不健全，免疫应答能力较弱[14]，无法出现本应形成的免疫应答[15]。本试验中在35日龄再次进行免疫，42日龄时抗体效价缓慢上升，表明二免效果初现，3组鸡群抗体效价为6.3~7.4 Log2，抗体合格率达到100.0%。经过64日龄的免疫，84日龄鸡群抗体上升明显，抗体滴度为9.7 Log2，抗体合格率达到100.0%，表明免疫叠加作用开始显现；105日龄时，北京油鸡的新城疫抗体达到峰值，一直维持到168日龄；252日龄时抗体有所降低，但抗体合格率仍在100.0%；经过270日龄免疫后，315日龄抗体效价回升明显。本研究根据上述结果首次确定了北京油鸡的免疫抗体基准线，即0日龄抗体基准线在7.8~10.0 Log2，21日龄时抗体基准线在2.0~5.4 Log2，42日龄时抗体基准线在4.9~8.3 Log2，84日龄时抗体基准线在7.7~12.0 Log2，105日龄时抗体基准线在9.0~11.1 Log2，147日龄时抗体基准线在8.6~11.0 Log2，168日龄时抗体基准线在8.3~11.1 Log2，252日龄时抗体基准线在5.4~10.3 Log2，315日龄时抗体基准线在7.1~11.4 Log2。综上可知，在84~168日龄，鸡群抗体进入高峰维持期。4结论本研究结果表明，通过检测北京油鸡新城疫抗体水平并结合生产临床数据，可提示近期鸡群有无感染风险。若抗体效价偏低，便可提示感染风险，可追溯疫苗质量和回顾免疫接种程序，便于及时做出有效的防治措施，从而完善该养殖场的免疫监测体系和疾病预警机制。